Определянето на количествените и качествените характеристики на спермата

Определяне на подвижността на сперматозоидите

Определяне на подвижността на сперматозоидите е важен параметър, на качеството на еякулата. Сперма, в състояние на оплождане, Трябва мобилност - Прав правете движение напред със скоростта на 50 м / сек. Тя може да бъде намерена в еякулата сперматозоиди с намалена подвижност - diskinospermiey под формата на вибрационното, Манеж и други движения, които обикновено се отсъства.

Подвижността на сперматозоидите е оценена в родния подготовка на еякулата с ограничено зрително поле (използвайки прозорец Fonio), Използването на лещата на окуляра 7X и 40X, когато качулка кондензатора. Преброяване 100 клетка, обърнете внимание на броя на преместването им, заседнал и фиксирани сперматозоиди. Обикновено, активно подвижни сперматозоиди са 80-90 %, заседнал начин - 10-12, фиксиран - 6 10 %. Като се вземат предвид само тези, активно развиващата се и бавно движещи се сперматозоиди, който направи стабилен напредък.

Можете да използвате и по-подробен от пет точки за оценка на мащаба:

• "4" - голяма мобилност (Всички те имат ясна подвижността на сперматозоидите при прогресивна значителен темп);
• "3" - добра мобилност (няколко капки);
• "2" - посредствен мобилност (Все още много сперматозоиди, но с вибрираща опашка);
• "1" - лошо мобилност (липсата на движение напред, Само опашката на подвижността на сперматозоидите);
• "0" - движението на сперматозоидите липсва.

плодовитостта на еякулата Това зависи от продължителността на подвижността на сперматозоидите, поради това е необходимо да се определи подвижността на сперматозоидите в динамика (Dynamic kinezisgramma).

Спад на сперма се прилага за покритието на стъклото, го обръщайте и пуснати на предметно стъкло с полумесец за капките кръв, така, намалението е в центъра на вдлъбнатината. Ръбовете на покривното стъкло смазват с течен парафин и микроскоп, определящи процента на активно motile-, заседнал и фиксирани чрез спермата 1, 3, 6, 12 и 24 часа след еякулация. Research се провежда при стайна температура. Обикновено, броят на активно подвижни сперматозоиди намалява всеки 2-3 часа 20 % ,

• Забележка. Микроскопско изследване на сперма трябва да се извърши в лабораторията на едно лице, имат достатъчно опит в областта на лабораторната диагностика, като резултатите от определянето на подвижността на сперматозоидите в различни изследователи варират до ± 40 % и до голяма степен зависи от опита с еякулата.

Делото за "възраждане" на сперматозоидите

Делото за "възраждане" на сперматозоидите Тя се основава върху възстановяването на нормалната подвижност на фиксирана, но живеят сперматозоидите чрез стимулиращи решения:

1) Разтвор Becker (Глюкоза - 3 ж, На₂HPO₄ - 0,6 ж, NaCl - 0,2 ж, KH₂СЛЕД₄ -0.01 G, Дестилирана вода, за да 100 мл; рН - 7,8);

2) 0,1 % кофеин разтвор (не само в ампули!) - 10 % обемът на еякулата;

3) 0,1 М разтвор на аргинин.

Метод. Dimensional пипета 1 мл nasasyvayut 0,1 мл еякулат (смесват добре) и също пипетата получаване на 0,9 мл разтвор стимулиращо. Съдържанието на пипетата се издухва върху стъкло за наблюдение, разбъркайте добре чрез многократно всмукване и издухване на флуида върху часовниковото стъкло, и след това в крайния продукт висящи капка. Чрез 5 10 мин фиксирана, но на живо сперматозоиди започнем да се движим.

Процентът на подвижни сперматозоиди определя непосредствено при възстановяване на мобилността и след 3, 6, 12 и 24 не. За по-надеждни резултати, се извършва успоредно на пробата с две предизвикателни решения. Само ако това е невъзможно да "съживи" сперматозоидите все още може да се говори за nekrospermii.

Идентификация на живо сперматозоиди сред фиксирана

Принципът на метода се основава на, ензими, които живеят сперматозоидите обезцветява еозин. Като се използват реагенти 5 % воден разтвор на калиев и еозин 10 % Водният Нигрозин.

Метод. На слайд предизвика малка капка сперма, поставя в непосредствена близост до голям спад на половина 5 % еозин разтвор и капка калиев 10 % Разтвор Нигрозин, което също е два пъти по капка еозин калий. Първо, еякулата се смесва с калиев еозин, чака няколко секунди, и след това се смесва с капка Нигрозин, отново изчакате няколко секунди и да направи тънки намазки полирано стъкло.

Използването микроскоп потапяне система, в петната се брои най-малко 200 сперматозоиди, подчертаване на живот (Безцветен) и мъртвите (еозин оцветени в червено). Броят на живите и мъртви сперматозоиди, изразен като процент. При липса на Нигрозин капка сперма смесва със слама 5 % еозин разтвор на калиев и да се подготвят тънки намазки за микроскопия. Нигрозиново багрила само на фона на лекарството, когато сперматозоидите са разпределени повече контраст. Обикновено живо сперматозоиди са 80-90 % от общия брой.

Преброяване на сперматозоидите в 1 мл, и в целия обем на еякулата

Броят на сперматозоидите в 1 мл в целия еякулат отчита на броячна камера Goryaeva.

Броят на сперматозоидите в целия еякулат се определя, като се умножи броя на сперматозоидите при 1 мл количество еякулат (милилитра).

• Забележка. Камерата за броене също може да се определи броят на подвижни сперматозоиди, Защо еякулат трябва да се разрежда с топла изотоничен разтвор на натриев hloridz и преброите неподвижни сперматозоиди, и след това се изважда от общия.

Обикновено, в 1 мл сперма съдържа 60-120000000. сперматозоиди, когато giperspermii - по- 120 милиона, при олигоспермии — от 30 към 60 милиона, какво, обикновено, което прави невъзможно да оплождане. Въпреки това, описаните случаи, Когато оплождането настъпва и Content 1 мл еякулат 5 към 30 милион. сперматозоиди.

Както и да е при идентифицирането на олигоспермия 2-3 необходими проверки преброяване на броя на сперматозоидите с интервали от 3-4 седмици, за да се определи техният максимален размер. По брой на същия мъжа сперматозоидите е обект на значителни колебания в физиологична.

Обикновено около еякулата съдържа повече от 150 милион. сперматозоиди.

Преброяване спермограма

Спермограма - е процентът на различни морфологични форми на сперматозоидите и сперматогенезата.

The намазка, оцветени с хематоксилин-еозин или Pappenheim, изчислената минимална 200 сперматозоиди, където количеството на нормални и патологични форми на, и спераматогенеза клетки, изразени в процент. Изчислението е направено с помощта на системите за потапяне микроскопски и машини за броене leukogram предварително променя имената на ключове.

В една нормална еякулат сперма нормални форми е 80-85 %, понякога 100 %, те включват физиологични различия, характеризира с необичайно или врата, или понижено, или уголемена глава.

Млад, или незрели, сперма форма има около главата и шията на останалата част от цитоплазмата ("Collar"), наблюдаван с честите сексуални контакти и да не са в състояние да оплождане.

Старите форми на сперматозоиди (hyperchromia, axromija, вакуолация главата) се появи в еякулата след удължен въздържание и не е подходящ за торене.

Патологичните форми включват сперматозоиди с деформации на главата: мегалосперматозоиди (gigantospermatozoidy), макро-, mikrospermatozoidy, Коничен, двупосочна сперматозоиди с шийка и опашка, без врата с едно или повече опашки, без опашка, опашката без глави и т.н..

При нормални здрави мъже еякулат обикновено не се намират форми анормален сперматозоиди, но понякога техният брой по време на нормална плодородието еякулат може да достигне 20 %, от които приблизително 15 % шеф на патологията, 3-5 % - Body, 2-5 % - Tail.

В патологична сперматогенезата, секреторна форма на безплодие идентифицирани сперматозоиди с ненормално главата и шията. Патология опашката Обикновено отделителната произход, Това се случва по време на преминаването на сперматозоидите VAS начини.

В оцветени препарати също са ясно видими отделно разположени зародишни клетки на различни етапи от диференциацията и съзряването, е важно да се прави разлика аспермия и азооспермия.

Сперматогони са закръглени, понякога овална, диаметър 5-12 микрона. Ядрото заема около една трета от клетки, тъмно- или светъл цвят, 1-2-3 Nucleo- Лама, Често близо до karyotheca (ядрената плик), фина структура на хроматина. В цитоплазмата е тесен, базофилен, Хомогенен. Сперматогони разделение митотично няколко пъти. Има клетки с добре определени етапи на митоза.

Някои от клетките, образувана чрез митоза, диференцират в сперматоцитите I, и след това II ред. Spermatocyte да поръчам - Кръгла или многоъгълни клетки с диаметър 17-19 мм с голяма кръгла ядро ​​и цитоплазма светлина глоба. В оцветени препарати е ясен перинуклеарно зона.

Сперматоцитите II на поръчката образуван в резултат на мейоза. Те са по-малки, от сперматоцитите да поръчам (диаметър 15 м), но по морфология почти идентичен. В еякулата по-често, от сперматоцитите да поръчам, но много по-рядко, от сперматиди.

Spermatydы - Small, кръгли или продълговати клетки с диаметър 12-15 мм с кръгли хиперхромни ядра, разположена централно или ексцентрично. Може да има многоядрени сперматиди. Pale цитоплазма, bazafilnaya, Често вакуолизиран.

Сперматиди се превръщат в сперматозоиди.

Клетките на сперматогенезата при нормална спермограма е не повече от 2 %. Голям брой безплодие наблюдава в секреторния характер.

За разлика фаза микроскопия еякулат се разрежда с изотоничен разтвор на натриев хлорид с добавяне на малко количество 1 % rivanola или воден разтвор на карболова киселина за намаляване на подвижността на сперматозоидите.

С флуоресцентна микроскопия приложена върху предметно стъкло капка сперма, и една капка акридин оранжево в отглеждането 1:20000. Капките се смесват и покрити със стъклен капак. Микроскоп окуляр използва 7X и 40X обективна. Живея сперматозоиди са оцветени зелено, мъртва - оранжева. Нормални и патологични форми сперматозоиди са лесни за разграничаване на поради техните морфологични белези.

Правилник за работа на фазов контраст и флуоресцентна микроскопия, са описани в инструкциите за тези устройства. При използване на фазово-контрастен и флуоресцентна микроскопия спермограма изчислява чрез общите правила.

Въз основа на микроскопско изследване на еякулата може да разкрие различни патологични състояния.

• Spermatoschesis - Липсата на сперматозоиди в еякулата и клетките на сперматогенезата.
• Азооспермия - Липса на сперматозоиди в присъствието на сперматогенезата.
• Astenospermii - Намаляване на броя на подвижни клетки и увеличаване на броя на патологични форми при нормални общия брой на сперматозоидите.
• Oligoastenospermiya - Намаляване на броя на сперматозоидите и мобилните форми и увеличаване на броя на патологични форми.
• Nekrospermiya - Fixed всички сперматозоидите в продукта, дори и след "възраждането".
• Akinospermiya - Членка, в която, за разлика от по-рано фиксирана nekrospermii сперматозоидите след "възраждането" започват да се движат.