Damar-trombosit hemostaz çalışma

Hemostazın bu bağlantı ihlalleri trombozu veya gemorragiam için bir eğilim devam etmek, Ne bağlı olarak araştırma yöntemleri seçilir. Dışında, araştırma yöntemleri tüm parametrelerin hemostazın temel ve gelişmiş ayrılmıştır, veya ikinci satırı testleri, yalnızca geçerli, Eğer testler herhangi bir ihlali ortaya. Ana (Bankası) Aşağıdaki sınamalar içerir.

Direnç örnekleri (gevreklik) kılcal damar-manzhetochnaja, kavanoz, angiorezistometrija

Bu testler kullanılabilir ve henüz yeterince bilgilendirici çoğu Konchalovsky-yeke-Leede örnek.

Değerlendirme sayısı ve kanama boyutunu göre, önkol Palmar yüzeyini üstüne kurdu (çapında bir daire 5 cm) Omuz sıkma 5 dakika sonra basınç 12-13, 3 kPa kelepçele. (90-100 Mm Hg. Sanat.). Sonuçları dikkate alınır 5 manşet çıkardıktan sonra min. Petehij daha fazla sayıda 10 yüzdeki artan kırılganlık için Puan, Bu sık sık trombositopeni veya trombosit işlev angiotroficheskoj ihlali ile ilişkilidir. De görünümünü kanama ve yaka altında dikkate alır.

Örnek kavanoz Cilt aynı alanlar üzerinde çalışır zaman negatif basınç artmaya stupeneobraznom — gelen 20 kPa (150 mm Hg. Sanat.) ve daha düşük. Peteşi sayılan sonuçlarını değerlendirirken, altında kurulmuş olup.

Süre ve kılcal kanama büyüklüğü için örnekleri

Klasik Duke örnek o sonra alt panel memesi bir ısınma ışık 3,5-4 mm derinlikte deldi.. Ne zaman böyle normal çalışma zaman kanama fazla olamaz 4 m, bir damla kan filtre kağıt üzerinde nispeten küçük ve 1-1'den başlayarak, 5 min hakkında bir delik sonra daraltmanız başlıyor. Ne zaman trombocitopenijah ifade (daha az 20 T 1 l) ve 20-40 dk zaman kanama şiddetli işlev bozuklukları trombosit arttı, kan lekeleri daha büyük ve ya azaltamaz wavelike sonra indirimli, sonra tekrar artış. Yeterince hassas Duke deneme, içinde 2/3 trombocitopatijami olan hastalar normal sonuçlar verir.

Daha hassas örnekleri, kanama zamanı Venöz Staz yapay olarak oluşturulan arka plan araştırıyor, Omuz kol boyunca basınç tarafından desteklenen araştırma ve tansiyon ölçme cihazları üzerinde üst üste nedir, eşit 5,3 kPa (40 mm Hg. Sanat.). Bu tür koma halinde Borchgrevink-Vaalera örneği çentik derinlik spayed önkol skarifiktorom üst üçte Palmar yüzeyinde çapraz 1 mm ve 8-10 mm uzunluğu (Zaman kanama Norma öncedir 10 m), ve Ivey örnek et. önkol aynı bölgede kan almak için bir Lancet bir parmak üç yanal delik derinliği alınır 3 mm (Zaman kanama Norma öncedir 7 m).

Aynı Venöz Staz fonunda gerçekleşir Eğitim ve. DAN. Shitikovoj, Sonuçta bir falanks parmak ağrıları bir derinlik için uygulanır 3 mm, ve sonra bir parmak ucu ile fincan içine daldırma 5 Sodyum Klorür ve iletilen ışık kanama zamanında ml izotoniceski çözüm (Çözüm çok yoğun kan renkli, daha fazla gözlem parmak başka bir fincan içine taşır). Kayıp kan miktarı bardak sıvı hacmi büyüme tarafından belirlenir (Zaman kanama Norma öncedir 4 m, kayıp kan kan hacmi olduğunu 0,01 için 0,4 ml).

Olan test,. N. Sushkevichu kaçınılmaz kan miktarı amonyak çözüm boyama tarafından belirlenir (0,04 %) , kan ile batırılır kağıtları olan lekeleri, tarafından kolorimetrirovanija üzerinde tıbbi kolorimetre.

Kanama test süresi tanıklık, norm sapma, hızlı thrombocytic-vasküler hemostaz ihlali ifşa, Ancak, bu örneklerin normal sonuçları olmadığı zaman varlığı yak²n trombocitopatij tarafından ifade hariç.

Kandaki trombosit sayısını hesaplama

Kandaki trombosit sayısını hesaplama (Muhasebe odası Gorjaeva içinde faz kontrast veya renk tonu veya parçacık sayaçları kullanarak) trombocitopenij ve trombocitopatij teşhis için kritik bir yoldur, Bu hücre sayısı sürekli veya periyodik indirimler ile devam (anomaliler, Bernard Soulier, Mey-Hegglina, vs.).

Trombosit sayısını hesaplama da öneriyor, daha fazla işlev üstlenebilir ve nasıl yapılmalıdır (öncesi konsantrasyon trombosit ya da onsuz ile, fotometricheski veya mikroskobik ve t. d.).

Smear boyutlarda trombosit incelenmesi – trombotsitometriya

Smear boyutlarda trombosit incelenmesi (trombotsitometriya) üzerinde çalışılmış kan bu hücrelerin farklı popülasyonlar ön bir yargıda ve onların anomaliler sayısı hakkında bilgi almanızı sağlar, trombosit granül doygunluk yanı sıra.

Bazı trombocitopatijah (Vizcotta Sendromu-Aldrich) kanda çok küçük trombosit tarafından hakimdir (için 2 mikron çapında), diğer-dev formu (anomaliler, Bernard Soulier, Mey-Hegglina) - To 8 m veya daha fazla. Trombocitopatij bir dizi Bunlar zavallı granül hücre (cm. aşağıda), Diğer koptuğunda ne zaman trombosit rasplastyvanii merkezileşme camına granül, Bu reaksiyonlar yayın granül ve içlerinde bulunan maddelerin ihlali teşkil, hemostazın uygulanması için gerekli. Bu özelliklerin tümünü, trombosit düzleştirme ve oluşum süreçleri için yeteneği yanı sıra, Bu hücreler yapısını derecelendirme geleneksel ve tarama elektron mikroskobu kullanılarak keşfedilmeyi olabilir, Nomarskomu üzerinde girişim optik kullanarak yanı sıra.

Kan pıhtısı geri çekilmesi doğal olarak rahatsız zaman trombositopeni ifade (daha az 30-40 g 1 l) ve trombosit nitel aşağılık bazı formları, çoğu zaman — trombocitoastenii Glanzmann, uremicheskoj thrombocytopathies, vb.

Trombosit yapıştırıcı-trombosit fonksiyonları incelenmesi (AAFT)

Trombosit yapıştırıcı-trombosit fonksiyonları incelenmesi (AAFT) çoğu trombocitopatij laboratuvar tanısında en önemli bağlantı. Şu anda, birkaç yönetilebilir ve erişilebilir yöntem araştırma geliştirdi, Visual içerir, mikroskobik ve donanım (agregometry, microfilters, vs.) Bu kayıt işlevi gösterge için aşağıdaki teknikleri atanabilir.

Trombosit camına saklama yöntemleri (veya filtreler)

Trombosit sayısı Venöz kan önce ve onun predelennoj üzerinden standart sütun cam topları ile veya helezon fiberglas ile hız ile atlama sonra yapılır; trombosit kan kaybı adhesiveness kendi derecesini değerlendirilecektir.

Daha fazla kullanılabilir, Biraz daha az olsa da kesin, önce ve sonra belirli bir süre ve ampul iç yüzeyine kişiyle kan trombosit sayısını belirleme yöntemi, belirli bir hız ile döner. Trombosit millipornyh gecikme filtreleri belirleme daha doğru yöntemleri (gözenek çapı 15-20 µm olduğunu). Ne zaman bu test puanı degrade basınç üstündeki ve altındaki filtre artan dışarı taşınan (gözenekleri ve onların trombosit toplamları tıkanması bu göstergeyi artırmak için yol açar).

Trombosit işlev toplama araştırma yöntemleri

Gemolizat-toplama testi eritrositler yıkanmış gemolizata yeteneği üzerinde dayalı, araştırma ıslahı 10^-2 ve 10^-6, Ne zaman denilen onun toplama plazma karıştırma, trombosit oderzhashhej çok sayıda (Plazma citratnoj ve gemolizata oranı — 1,0:0,2). Zaman toplama dikkate alır (gemolizata-11-17 yüksek konsantrasyon ile kural, düşük — 40-54 ile) ve onun tezahürü. Süreci ve şiddeti dinamikleri-ebilmek da var olmak fotometricheski (tıbbi Kolorimetre, Yeşil filtre, pomeshivanie) ve agregografe herhangi bir tasarım.

Ne zaman yüksek seyreltme gemolizata kullanarak grafik işleme kayıt (10^-6) sağlar dvuhvolnovuju agregatogrammu olsun, İkinci dalga gitmekten endojen ADP-toplama uyarıcılar trombosit içerir, katekolamin, thromboxane, vb. Bu ikinci dalga reaksiyonlar sürümü karakterize, Trombosit yoğun granüller yokluğunda oluşmaz (depolama havuzu hastalığı) veya tepkiler yayın ihlali ise (aspirinopodobnyj sendromu, vb.).

Gemolizat-toplama test herhangi bir laboratuvarda gerçekleştirmek kullanılabilir, herhangi bir özel reaktifler gerektirmez.

Görsel mikrometod trombosit toplama tanımı

Onun özüdür, silikonirovanija karşısında çift birim Venöz kan stabilize 3,8 % Sodyum sitrat (oranı 2,4:0,6 ml), onun santrifüj 6 dakikalarda 100 D/d/dk, sonra elde edilen trombosit açısından zengin plazma giy 0,02 ml slaytlara ve agregirujushhih ajanlar aynı miktarda ile karışık — ADF, trombinom, kollajen, noradrenalin veya ristomycin. Kan plazması hedef agregirujushhih konsantrasyon ajanların olmalıdır:

• ADF 0,5*10^-4 mmol / L;
• norepinefrin olduğunu 0,015%;
• Trombin olduğunu 0,125 u/ml (konsantrasyon kollajen ampirik olarak seçilir).

Nasıl düşük test edebilir, ve agregirujushhih ajanlar daha yüksek konsantrasyonlarda. Konsantrasyonları yelpazesi farklı etkinlik ve üretim örnekleri farklı ilaçların çeşitli etkinlik bağlı olarak değişebilir, Bu nedenle normal plazma konsantrasyonu her aracısının düzeltilmesi ilerlemek.

Ajan karışık sallamak slayt toplayarak trombosit açısından zengin plazma karışımı, günlüğe kaydedilen zaman birimi "kar fırtınası" şeklinde bir büyüteç ile karanlık bir arka plan üzerinde olduğunu. Ne zaman sonuçları değerlendirmek dikkate alın plazma trombosit sayısı. Yani, ADP-zaman toplama, 27-37 sn ile artar 400 T 1 l trombosit 62-75 sec önce 50 T 1 l, Trombin toplama — 40-52 79 için sırasıyla, ile — 106 itibaren.

Grafik kayıt işlemi toplama

Grafik kayıt işlemi aynı agregirujushhih ajanların etkisi altında toplama — trombosit işlev araştırma çok bilgilendirici yöntemi. Agregografah üzerinde çalışır veya.

Ne zaman grafik kayıt tanımlamak sadece zaman toplama, Ama şiddeti (en büyük sapma eğri ve kare agregatogrammy), toplama birinci ve ikinci nesil varlığı-epinefrin ve ADP düşük konsantrasyonlarda kullanırken (İkinci dalga reaksiyonlar sürümü karakterize), patolojik yükünün yanı sıra.

Trombosit toplama etkisi ristomitina altında bir görüntü veya grafik çalışma

Çok trombosit toplayıcı etkisi ristomitina altında görsel ve grafik eğitim önemlidir. Bu tür toplama ihlal (son konsantrasyon ristomitina 0.8-1.0 mg/ml) biri en yaygın Hemorajik diyatez — angiogemofilii (von Willebrand hastalığı), su kuyusu aynı derecede anormal trombosit, Bernard Soulier ve Edinsel von Willebrand faktör sentez baskı bazı türleri ile (üremi, bağışıklık inhibisyon bu vb. d.).

Von Willebrand faktör plazma miktar

Miktar kan plazması von Willebrand faktör ristomicin-Aglutinasyon askıya normal trombosit formalinizirovannyh çeşitli dilutions okudu bestrombocitarnoj plazma içinde tarafından yürütülen.

Önemli yöntemdir angiogemofnlii tanısında ve bu faktör ikincil baskı sentezi için her ikisi de, ve endotel yenilgi yerçekimi değerlendirmek için (vaskülit, ateroskleroz ve diğerleri.) ve eğilimler tromboz için, nerede von Willebrand faktör kan içeriği sık sık önemli ölçüde artırır.

Von Willebrand faktör düzeyi endotel bu sentez yeteneğini gösterir (aigiogemofilii ile indirdi) ve ne ölçüde vaskulitah ile endotel yenilgi, ateroskleroz ve diğer hastalıklar, kan damarlarının iç astar yenilgisi ile devam.

Elde etmek için sabit bir normal trombosit sağlıklı bireylerin trombosit açısından zengin plazma için sürekli olarak eklenir 0,2 % EDTA çözeltisi (0,5 ml 5 ml plazma) tarafından 2 Min — çözüm sabitleme (20 ml 40 % formalin içinde 1000 ile ml fosfat tampon 0,2 g EDTA, pH 6,4).

En az 4 ° c sıcaklıkta muhafaza karışımı 1 hayır, sonra o atıyor, süpernatant kaldırılır, ve iki kere suspenzirujushhim çözüm trombosit tortu yıkanmış (bir birim 3,8 % Sodyum nitrat ve Sodyum Klorür 5 cildi izotoniceski çözüm çözüm; pH hazırlanmıştır 7,4). Trombosit normal formalinizirovannyh pişmiş süspansiyon dolu 1 ML ve saklı,-20 ° c. Kalibrasyon eğrisi üreme normal plazma bestrombocitarnoj kullanarak inşa ediliyor, ile hangi karışık formalinizirovannye trombosit örnekleri. Sonraki karışımı ristomicin-Aglutinasyon tarafından tanımlanır. Kalibrasyon eğrisi kan plazması von Willebrand faktör sayısına göre belirlenir. Sodyum azida az miktarda formaldehit çözümde eklerseniz sabit trombosit daha iyi korunur.

Testler, spontan trombosit toplama yansıtan

Hastalarla trombojembolijami ankette ya da tromboz ve iskemik çekirdek için artan bir eğilim ile test yöntemleri dahil, spontan trombosit toplama yansıtan, t. bu. Tam kan veya kan plazması agregirujushhih ajanlar ek olmadan doğan.

Ne zaman mikroskopi kan yayma bu fenomen tanımlamak için dikkat oranı ayrı temel alınan trombosit sayısı ve birimlere çekilir, 3-5, trombosit ve daha fazla toplam oluşan. Bu olay daha iyi hava akımı görüntülerken algılanır, yoğun ceitrifu altında elde- girovanii trombosit açısından zengin plazma (20-30 dk 6000 / Dakika), stabilize sitrat veya EDTA-çözüm citratnym. Ancak, daha istikrarlı sonuçlar spontan toplama tespiti için aşağıdaki yöntemleri sağlar.

Wu yöntemi — Hoak

Wu yöntemi — Hoak dayanmaktadır, damardan kan iki test tüplerde yazıldığından emin, EDTA çözeltisi içerir, ve diğeri de EDTA ile aynı çözüm karışımı 4 % formalin çözümü. Tüpler içeriğini karıştırdıktan sonra savunucuları 30 Oda sıcaklığında dakika.

Sedimantasyon birimleri tasfiye sırasında, Ama bireysel trombosit nadosadochnom katmanda kalır. Savunmak sonra her tüplerinin nadosadochnom katmanındaki trombosit sayısını sayar. Normalde, her iki tüpler içeriğini trombosit sayısı farkı 10-15 fazla olamaz %, Bu yükseltilmiş spontan agregasyon artırır.

Bay yöntemi. VE. Tarasova

Bay yöntemi. VE. Tarasova (1984) trombosit tam kan birimlerinden düşüş hızında AVU-1 vstrjahivatele, silkinti o 3 dakika sonra citratnoj içinde sayılan 90 - 100 kez 1 m.

Test tüpünde 0,5 kan mi, titriyordu, tanıttı 1 ml 1 % formalin izotonicescom çözüm Sodyum Klorür çözeltisi. İkinci kontrollü tüp sallayarak maruz değil, ve üzerinden araştırıldı aynı kanı 3 dk da formalin bir çözüm sunar.

Her iki test tüpleri savunucuları kan 30 m, o zaman nadosadochnom katmanında trombosit sayısı sayılır. Normalde, trombosit sayısı farkı daha büyük değil 20 %, Bu toplama için yüksek eğilimleri artırır.

Temel sınamalar uygularken ihlali tespiti halinde, trombosit hemostaz karakterize, daha fazla araştırma gerektiği gibi gerçekleştirmek. Bunlardan en önemlileri şunlardır.

Hemostazın parametrelerini belirlemek için ek çalışmalar

Bu hücre morfolojisi bir çalışma ile mielogramme ve kemik iliği trepanate Megakaryocyte sayısında üzerine bir çalışma

Kemik iliği dilimler Megakaryocyte sayısında önemli bir artış, genellikle kan trombosit sayısı daha fazla veya daha az belirgin artış ile birlikte, gözlenen eritremia, Hemorajik ve jessencialnom trombozitoze ve miyoproliferatif diğer bozuklukları. Orta amegakaryocytosis, Trombositopeni ile birleştiğinde, trombocitopenicheskoj Purpura için tipik (Verlgofa hastalığı).

Ne zaman aplazii kemik iliği hipoplazisi ve herhangi bir Genesis azalır kemik iliği dilimleri içinde Megakaryocyte içeriğini olarak, ve periferik kan trombosit sayısı.

Kısmi amegakariocitoz açığı trombocitopojetina görülmektedir (Konjenital trombositopeni nadir bir formu), kan antimegakariocitarnyh antikor oluşumu, essencialna kısmi aplazii Megakaryocyte (Lösemi gelişme öncesinde).

Birçok trombocitopatijah morfolojik ve cytochemical değişiklikleri kutladı Megakaryocyte.

Trombosit elektron mikroskobik çalışmada

Trombosit elektron mikroskobik çalışmada trombocitopatij bir dizi teşhis etmek için ayarla, Ne zaman var hayır veya protein granül yüksek optik yoğunluğu büyük ölçüde azaltır (ADP içeren, Serotonin, Katekolaminler, Kalsiyum vs.), veya protein α-granül, Bu trombocitopatij bir dizi normaldir, Toplu depolama havuzu hastalık grubu, ya da granül eksikliği hastalıkları.

Kusurları kontraktilnom cihaz tespit edilebilir (mikrotübüller sistemi) ve lizosomah trombosit.

Ne zaman elektron mikroskobu ya da trombosit çalışmanın Nomarskomu üzerinde girişim optik kullanarak tarama olabilir işlemek için platelet yüzey yabancı kusurlarý algılandı, kendi rasplastyvanija üstünde o, eğitim süreçleri, merkeziyetçilik ve salgı granül, Pek çok trombocitopatij için karakteristik nedir.

İmmunofljuorescent tarafından antitrombocitarnyh antikorların tanımı- trombosit süspansiyon immünglobulin Tion araştırma, Bu hücreler ile ilişkili – Dickson yöntemi

Bağışıklık ve non-immün trombositopeni ayırt etmek için bu karmaşık yöntem sağlar.

Ancak, en belirgin formları trombositopeni ile hastalığın bu kabul edilemez, ilişkili immünglobulin yeterince büyük gerekli olmadığını belirlemek için (daha--dan 40-50 g 1 l) trombosit sayımı.

Etiketli Otolog trombositlerin yaşam süresi belirleme

Etiketli Otolog trombositlerin yaşam beklentisi belirleyen trombositopeni dolaşımdaki trombositler normal bir yaşam beklentisi ile arasında ayrım yapmanızı sağlar (yaklaşık 9 Gece) ve hastalık formu bu hücreler kısaltılmış bir ömrü ile.

İlk en çok azalmış trombosit kemik iliğinde imalatı ile ilişkilidir, ikinci ile hızlı onların ölümdür, veya antitrombocitarnyh antikorlar etkisi ile (Otoimmün trombocitopenijah için bir kaç saat trombosit ömrü azalır), ya yoğun yıpratma toplamları bu hücreler ve kan pıhtıları disseminirovannom vnutrisosudistom kan veya büyük tromboz (Trombositopeni tüketimi).

Kantitatif tayin öncesi ve sonrası trombosit toplama faktörler plazma içindekiler

Kantitatif tayin öncesi ve sonrası trombosit toplama faktörlerin bir plazma içindekiler — membran Fosfolipid faktörü 3, α-granül içeriği (antigeparinovogo faktörü 4, Β-tromboglobulina, iyi ifade trombosit faktör) ve yüksek elektron optik yoğunluk nonprotein granül (Serotonin, katekolamin, ADF), asit HİDROLAZLAR yanı sıra.

Bu çalışmalar içinde yapıları ve onların bileşenlerinin trombosit içeriği hakkında bir fikir vermek, onları içine plazma toplama sürecinde serbest bırakmak hakkında, vnutriso yanı sıra- sudistoj trombosit aktivasyon, trombositlerin α-granül ve son bileşeni yoğun konsantrasyon artan kan plazma serbest ile (antigeparinovogo faktörü 4, Β-tromboglobulina, vs.).

Trombosit faktör trombocitopatij bir dizi kimlik için önemli kantitatif çalışma (Granül ve bileşenleri güvenlik ihlali, Bu bileşenler taraflidir reaksiyonlar sürümü, Plazma yoğun iç nedeniyle içeriklerini geliştirmek- Vasküler adezyon ve toplama trombosit, vs.). Birkaç trombocitopatij mitokondrial membranlar içerik faktör düşüş karakterize 3 kan pıhtılaşma sürecinde katılmak için onun durumu ihlali.

Trombosit ve bireysel yapılarını biyokimyasal özelliklerinin çalışma

Trombosit ve onların bireysel yapılar stroma biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi, Granül, mitokondri ve böylece. d. Belge bağlantı farklı türleri patoloji ve trombosit işlev bozukluğu enzim eksikliği belirli türleri ile etkinleştirmek (COX eksikliği, tromboksansintetazy, vs.), Bütün membran lipoprotein çiğneyen, agregirujushhimi ajanlar ile etkileşim için gerekli, ve t,. d.

Bu tür çalışmalar iyi donanımlı araştırma laboratuvarları, ve bu nedenle genel uygulama geçerli değildir.