Immünolojik neden kısırlık teşhisi

Kontraseptif kullanımı olmadan uzun evli ömrü boyunca, ve genital organların mukoza zarının mikro bölgedeki varlığı yavaş yavaş ortaya çıkar nokta olabilir sperm aşılama antijenleri. Eşlerin fizik muayene, çorak bir evlilik oluşan, 10-15 kısırlık nedenini belirlemek olamaz % olgular. Soruşturma gizli servikal kanalın özel yöntemlerini uygulayarak zaman kısır eşlerin bu grupta olduğunu, meni, plazma ve serum, sperm antikorlar genellikle tespit edilir (ASAT), Immünolojik araştırmaların kalitatif ve kantitatif testler kullanır.

Postkoytalnыy testi (FCT)

Postkoytalnыy testi (FCT) Bu, kalitatif bir immunodeney değinmektedir. Negatif bir test sonucu servikal kanal gizlice sperm yokluğunu gösterir, ama onların yokluğunda nedenini belirlemek olamaz.

Yöntem. Servikal kanal gizlice hareketli sperm sayısına göre, koitus sonrası elde edilen, Onlara servikal kanalın mukus infertilite ya da bağışıklık ile delici yeteneği ihlalleri boyutunu kurmak.

FCT aşağıdaki koşulları yürütmek için gerekli olan: Çalışma yumurtlama döneminde yapılmalıdır, bu colpocytologic ya da başka bir yöntem ortaya, 2-3 gün içinde önce perhiz eşlerin sonra.

Metodolojisi. Bir kadın için olağan koitus sonrası 30 dakika sırtına durmalıdır, dizlerinizi bükün. Douching ve yasak temizlik, Sadece hijyenik ped gerek, servikal kanalın mukus çalışma için çekim sırasında uzaklaştırıldığı. 2-4 saat sonra,, izin verilen ve 6-10 saat sonra (zaman, Çalışma öncesi geçen, analizde gösterildiği) cinsel serviks bir ayna Cuzco ve aspire Mukus veya tüberkülin şırınga kullanılarak maruz sonra (iğne olmadan), Bir lastik ampul olan bir pipet, veya polietilen kateter.

Cihazı yıkarken dezenfektanlar kullanılmamalıdır, Onlar sperm hareketliliğini etkileyen olarak. Servikal kanalın elde edilen mukus bir damlası ısıtılmış bir cam slayt aktarılır, kaplanmış lamel, Sıvı parafin ile yağlanır Bölge kaçak. Formülasyon hemen mikroskopiruyut (mercek 7X, 40X objektif), sperm hareketliliği sayısını ve niteliğini belirleyen. İlaç aktif sperm progresif motilite ile tespit edilebilir, salınım hareketi (swing fenomen) ve sabit.

FCT sonuçları beş tür sağlamak Kabul.

• Kusursuz (İlgili normları): Aktif sperm ilerleyen hareketlilik ve daha 15-20 görünümü kadar beş alanda. Salınım fenomeni Sperm daha az 25 %.
• Tatmin edici: görünümü kadar beş alanda 10 Aktif sperm ilerleyen hareketlilik ve daha az 25 % salıncak olgusu ile sperm.
• Fakir: daha az 5 görüş beş alanda spermler.
• Eksi: sperm olmaması.
• Şüpheli: Daha fazla görüş beş alanda 5 aktif hareketli sperm daha fazla 25 % swing fenomen.

Ne zaman FCT beşinci tip genellikle eşler arasındaki uyumsuzluk gözlendi bağışıklık, ACAT belirlemek için gereklidir. ACAT gizli endoservikal tanımlamak için, Plazma, meni veya kan serumu ve bunları görüntüleyebilir (Aglütinasyon veya hareketsiz) Bu nicel bağışıklık atanmasını gerektirir.

Negatif PBC çalışmalar delici bir tanımı ile başlar (nüfuz) penetratif testi yoluyla sperm yeteneği (Cum) ve servikal kanala sperm salgılanmasına duyarlılık sperm ve mukus bir test temasını kullanarak (TKSTSS).

Penetracionnyj testi (TP)

İnce kılcal uzunluğu 10 Servikal kanalın ovulasyon mukus sırasında yazdığınız gör. Kılcal açık uçlu kil kapatır, ve ikinci bir test taze boşalmak bir test tüpü içine yerleştirilir (daha fazla yok 3 boşalma saat sonra). Kılcal kil dik tutturulmuştur ile. Örnek bir sıcaklıkta bir termostat içinde inkübe edilir 37 ° C 1 hayır. Ejakülat kalitesi servikal kanalın mukus spermlerin penetrasyon derinliği ile karar verilir On. GHG üç tipi vardır.

• Olumlu - Penetrasyon derinliği (santimetre en büyük mesafe, En az tek sperm az seyahat) yukarıdaki 5 cm; Maksimum penetrasyon açısından sperm sayısı daha 5 görünürde, ve kılcal üst üçte motil spermatozoa sayısı daha büyüktür 50 %.
• Şüpheli - Penetrasyon up bir derinliği 5 Daha az sperm sayısını görün 5, Kılcal ulaşır üst üçte birlik hareketlilik 50%.
• Eksi - Sperm ulaşır nüfuz derinliği 1 cm.

Nüfuz sperm yeteneği Menstrüasyon periyodunun faz bağlıdır. O menstrüel siklusun 9 gün ortaya çıkmaya başlar,, yavaş yavaş aktive, yumurtlama döneminde maksimum ifade ulaşır, İki gün boyunca bu seviyede tutulur, ve daha sonra yavaş yavaş azalır.

Test temas meni ve servikal mukus (TKSTSS)

Slayt servikal kanaldan mukus küçük bir damla koymak, Yumurtlama döneminde kadınlardan alınan, ve boşalmak aynı boyutta damla bir dizi. Her iki damla kapak camı ile kaplıdır, biraz için hangi aşağı basıldığında, Bir damla katıldı. İlaç nemli bir odaya yerleştirilir (Nemlendirilmiş pamuklu çubukla Petri kabı) ve sıcaklıkta bir termostat içinde inkübe 37 ° C 1 hayır.

Bu koşullar altında, normal sperm Normal servikal kanalın gizli nüfuz, Bir büyütme 200X mikroskop altında görülebileceği gibi. İki medya arasındaki sınıra yakın reaksiyon için hesaba bakış iki komşu alanlarda servikal kanal sperm sırrı nüfuz sayar.

İki alanın mükemmel TKSTSS ile görüş daha ortaya 25 daha az salınım fenomeni aktif hareketli sperm 25 %. Görüş iki alanda tatmin edici TKSTSS daha ortaya koydu ise 15 aktif hareketli sperm, Düşük TKSTSS - daha az 15. Negatif yok penetrasyon TKSTSS, salınım bir fenomen aşıyor - şüpheli ise 25 %.

Bu testte, PCT olarak, swing fenomen, aşırı 25 %, muhtemelen, Bu ACAT varlığını gösterir ve kantitatif bağışıklık atanmasını gerektirir.

TKSTSS kullanarak meni ve servikal salgıları değişik oranlarda kanal infertil ve bereketli erkekleri kullanarak infertil koca tespit.

• Örnek 1. Kadın infertil çiftlerin ve kontrol ejekülat sağlıklı erkeklerde serviks gizli kanal Taken. Mükemmel TKSTSS kocasının sperm zayıf penetrasyon yeteneği ve servikal kanalın normal salgılanması duyarlılığını gösterir.
• Örnek 2. Alınan tam servikal kanal sağlıklı kadının sırrı ve infertil çiftlerin kocası ejakülat. Kötü TKSTSS sperm zayıf penetrasyon gösterir.
• Örnek 3. Alınan gizli endoservikal kadın infertil çiftlerin ve kontrol ejakülat sağlıklı erkek. Kötü TKSTSS aşağılık gizli servikal kanala gösterir, hangi besbelli, normal sperm nüfuz yok.

Kantitatif immünolojik testler

Mikroagglyutinatsionny testi Friberg

Mikroagglyutinatsionny testi Friberg (TF) yeterince duyarlı ve klinik teşhis laboratuvarları için kullanılabilir. TF kullanılarak çeşitli malzemelerden ACAT ve aglütinasyon titresi varlığını belirlemek (Plazma ejakülat, servikal kanalın mukus ve her iki eşin serum ekstreleri).

Reaktifler:

1. Fosfat tamponlu tuz çözeltisi (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe yağı.

Ekipman: mikroskop, tüberkülin şırınga, mikroagglyutinatsionnye pipetter 1 ml, Mikropipet kapasitesi 0,1 ml.

Yöntem. Kan deney serumu bir inkübatör içinde inkübe etmek suretiyle deaktive edilir 56 ° C 30 m. Söyleyivermek, Mastürbasyon ile elde edilen, Hemen olduğu şekilde seyreltilmiş FSB, sperm konsantrasyonu 40 milyon. içinde 1 ml.

Malzeme nedeniyle (Plazma ejakülat, servikal kanalın veya serum sırrını ayıklamak) dilüsyonları bir dizi hazırlamaktadır 1:4 için 1:128 Seyreltme FSB bir sıvı olarak kullanılarak. Bir iğne tanıtıldı ile parafin yağı mikroagglyutinatsionnyh ile kuyularında tüberkülin şırınga pullar (vazelinovoe yağ altında) Test malzemesinin her seyreltme küçük damlalar. Her bir örnek, dört kez yıkandı, sonra şırınga. Her bir seyreltmedeki ilave edilir 5 ejakülat kat daha küçüktür damla, tarafından 4 Oda sıcaklığında h agglutinates tespit. Son ıslahı, böylece tespit 100X büyütmede mikroskop altında 3 inceleme ve daha altında bitişimli, aglütinasyon titresi ACAT karşılık.

Spermoimmobilizuyuschy testi Izodzhima (SIT).

Titre hareketsiz ACAT serumu, plazma veya meni ayıklamak gizli servikal kanal antijenlerin varlığı hareketli sperm sayısına göre ayarlanır (sperm).

Bileşenler.

1. Söyleyivermek, üretilen ve benzer şekilde hazırlanmış olan, FSB kullanan TF için; motilite aşan 70 %.

2. Kobay Komplementsoderzhaschaya serum.

3. Bağışıklık insan serumu (Ichs), kompleman varlığında içeri verilmesi 1 saat inkübasyon hareketsizleştirme 90 % sperm.

4. Normal insan serumu (NCHS), bir sıcaklıkta ısıtma ile inaktive 56 ° C 30 m.

5. Deney inaktive serumu, Plazma ve meni gizli servikal kanala ayıklamak.

Yöntem. 1 tüp immobilize kompleman aktivitesini değerlendirmek tanıtıldı 0,5 izotonik sodyum klorür solüsyonu ile yıkanmakta, ASAT 2 test tüpü olmadan sperm hareketinde değişiklikleri belirlemek için - 0,5 ml NHS, Kontrol immobilizasyon üçüncü tüp - 0,5 ve ichs ml 4 tüp hareketsiz ACAT tespit etmek, - 0,5 Serum mi, ejakülat veya plazma, özü ya da salgı endoservikal.

Daha sonra, her bir tüp tarafından tanıtılan 0,1 ml tamamlayıcısı. Tüm tüplere son şey ilave edilir 0,05 bir konsantrasyonda mi sperm süspansiyonu 40 milyon. içinde 1 ml. Üçayak tüpler bir sıcaklıkta bir kuluçka makinesi içine yerleştirildi 37 ° C 1 hayır. Tüpler yerleşik aglütine sperm yansıtacak şekilde sarsılmış dikkatlice fırından çıkarılır ve.

Yüksek büyütme mikroskop altında sonuçlarını değerlendirmek (400X) test tüpünün bir damla hareketli sperm yüzdesi hesaplanır, Bir cam slayt üzerine yerleştirilen ve bir kapak ile kaplanmış. Aynı şekilde, NHS ve ichs test tüpleri damlacıklar halinde hareketli sperm yüzdesini ayarlar. Formül dikkate reaksiyonunun sonucudur

SIT = K / A

Nerede K - ichs ve NHS ile kontrol hareketli sperm sayısı;

Hakkında - Bir test tüpünün içinde hareketli sperm sayısı (Serum testi, ejakülat veya plazma, veya servikal kanalın sırrı).

Ortalama SİT ile<2 Test negatif olduğu (Yaklaşık kontrol ve test tüplerinde hareketli sperm hücrelerinin sayısı aynı), Eğer endeks CTI>2 - Test pozitif ise, t. bu. malzemede (serum, plazma veya meni gizli servikal kanala ayıklamak) ACAT immobilize edilir.

• Örnek 1. Ichs için yer kontrol - 10 % hareketli sperm. NHS ile ikinci kontrol - 80% hareketli sperm. İki kontrolleri bir araya - 90 % hareketli sperm. Test tüpünde - 80 % hareketli sperm.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Test negatif olduğu, hareketsiz ACAT yok.

• Örnek 2. Test tüpünde - 40 % hareketli sperm, Bununla birlikte, kontrol, Örnek 1.

KN = 90/40 = 2.2

Pozitif test. Immobilize antikor var (ASAT), hangi sperm hareketliliğini yoluyla önemli ölçüde azalır.