Diagnos av immunologiskt orsakade infertilitet

Under en lång gifta liv utan användning av preventivmedel, och i närvaro av mikro-regionen i slemhinnorna i könsorganen kan ske gradvis plats immuniserings antigener av spermier. Fysisk undersökning av makarna, bestående i ett kalt förbindelse, kan inte fastställa orsaken till infertilitet hos 10-15 % fall. Det är i denna grupp av infertila makar vid tillämpningen speciella utredningsmetoder hemliga cervikalkanalen, sperma plasma och serum spermier antikroppar ofta upptäcks (ASAT), Använder kvalitativa och kvantitativa tester av immunologisk forskning.

Postkoytalnыy testet (FCT)

Postkoytalnыy testet (FCT) Den hänvisar till kvalitativa immun. Ett negativt testresultat anger frånvaron av spermier i cervikalkanalen hemligheten, men du kan inte identifiera orsaken till deras frånvaro.

Metod. Med antalet rörliga spermier i cervikalkanalen hemligheten, erhölls efter coitus, fastställa omfattningen av kränkningar av deras genomträngande förmåga med infertilitet eller immunitet mot dem slem av cervikalkanalen.

FCT är nödvändigt att utföra följande villkor: Studien ska genomföras under perioden för ägglossning, vilket avslöjade colpocytologic eller annan metod, efter tidigare avhållsamhet makar inom 2-3 dagar.

Metodiken av. Efter den vanliga samlag för en kvinna 30 minuter bör ligga på rygg, böja knäna. Douching och rengöring av förbjudna, behöver bara sanitetsbindan, som avlägsnas under insamlings för studier av slem av cervikalkanalen. Efter 2-4 timmar, tillåten och efter 6-10 timmar (tid, förflutit innan studien, anges i analysen) efter samlag livmoderhals exponeras med hjälp av en spegel Cuzco och endocervikal slem sugs eller tuberkulinspruta (utan nål), en pipett med en gummi glödlampa, eller polyetenkateter.

När du tvättar instrumentet bör inte användas desinfektionsmedel, eftersom de påverkar spermierörlighet. En droppe av den erhållna slem av cervikalkanalen överföres till en uppvärmd glasskiva, belagda täckglas, Territorium smörjas med flytande paraffin läcka. Formulering omedelbart mikroskopiruyut (okular 7X, 40X objektiv), bestämma antalet och arten av spermierörlighet. Läkemedlet kan detekteras med aktiva spermier progressiv motilitet, oscillerande rörelse (fenomenet av swing) och fast.

Godkända ger fem typer av slutsatser FCT.

• Utmärkt (relevanta normer): i fem synfält upp till 15-20 med aktiv spermier progressiv rörlighet och mer. Spermier med fenomenet svängning är mindre än 25 %.
• Tillfredsställande: i fem synfält upp 10 aktiv spermier progressiv rörlighet och mindre 25 % spermier med fenomenet swing.
• Dålig: mindre 5 spermier i fem synfält.
• Minus: frånvaro av spermier.
• Osäkra: i fem synfält mer 5 aktiv-rörliga spermier och mer 25 % fenomenet av swing.

När den femte typen av FCT ofta observerade immun inkompatibilitet mellan makar, därför nödvändigt att bestämma ACAT. För att identifiera ACAT hemliga endocervikal, plasma, sperma eller blodserum och visa dem (agglutination eller immobiliserad) Det kräver utnämningen av kvantitativa immun.

En negativ PBC studier börjar med en definition av tränga (penetrering) förmågan hos spermier via penetrerande testet (Fri.) och mottaglighet för spermier utsöndring av livmoderhalskanalen med hjälp av en testkontakt av spermier och livmoderhalssekret (TKSTSS).

Penetracionnyj testet (TP)

Den tunna kapillärlängd 10 Se skrivit under ägglossning slem av cervikalkanalen. En öppen ände av kapillären stänger leran, och den andra är placerad i ett provrör med en test färsk ejakulat (inte mer 3 timmar efter utlösning). Med lera i kapillären är fäst vid den upprättstående röret. Provet inkuberas i en termostat vid en temperatur 37 ° C 1 Nej. Om kvaliteten på ejakulatet bedöms av inträngningsdjupet av sperma i slem av cervikalkanalen. Det finns tre typer av växthusgaser.

• Positiv - Inträngningsdjupet (det största avståndet i centimeter, reste åtminstone enda spermie) ovan 5 cm; antalet spermier i punkten för maximal inträngning mer 5 i sikte, och antalet motila spermier i den övre tredjedelen av kapillären är större än 50 %.
• Osäkra - En inträngningsdjupet upp till 5 Se mindre spermie 5, deras rörlighet i den övre tredjedelen av de kapillära når 50%.
• Minus - Djup penetration av spermier når 1 cm.

Förmågan hos spermier att penetration Det beror på fasen av menstruationscykeln. Hon börjar ta sig ur den 9: e dagen av menstruationscykeln,, gradvis aktiverande, når sin maximala uttryck under perioden för ägglossning, hölls vid denna nivå under två dagar, och sedan gradvis minskar.

Testkontakt sperma och livmoderhalssekret (TKSTSS)

På bilden sätts en liten droppe av slem från cervikalkanalen, tas från kvinnor under ovulation, och ett antal av samma storlek droppe ejakulat. Båda droppar är täckta med ett täckglas, som är något intryckt, förenad med en droppe. Läkemedlet placeras i en fuktig kammare (Petriskål med fuktad bomullstuss) och inkuberades i en termostat vid en temperatur 37 ° C 1 Nej.

Under dessa förhållanden, normala spermier penetrerar hemligheten av den normala livmoderhalskanalen, såsom kan ses under mikroskop vid en förstoring 200X. För att beakta reaktionen nära gränsen mellan två medier räknar antalet genomträngande hemligheten med cervikalkanalen spermier i två angränsande synfält.

Med utmärkt TKSTSS i två synfält avslöjar mer 25 aktivt rörliga spermier i fenomenet av swing mindre 25 %. Om tillfredsställande TKSTSS i två synfält avslöjade mer 15 aktivt motila spermier, TKSTSS i låg - mindre än 15. En negativ frånvarande penetrering TKSTSS, om tvivelaktiga - ett fenomen svängnings överstiger 25 %.

I detta test, såsom i PCT, fenomenet av swing, överstiger 25 %, sannolikt, Det indikerar närvaron av ACAT och kräver att utnämningen av kvantitativa immun.

Med sperma och cervixsekret kanal infertila och fertila män i olika mängder till att använda TKSTSS identifiera infertila make.

• Exempel 1. Taget en hemlig kanal i livmoderhalsen hos kvinnor infertila par och kontroll utropa friska män. Utmärkt TKSTSS indikerar en svag penetrationsförmåga av sperma från sin man, och känsligheten hos normala utsöndring av cervikalkanalen.
• Exempel 2. Tagit full hemlighet av livmoderhalskanalen frisk kvinna och hennes man ejakulat av infertila par. Dålig TKSTSS indikerar en svag penetration av spermier.
• Exempel 3. Taget hemliga endocervikala kvinnor infertila par och kontroll utropa friska män. Dålig TKSTSS indikerar underlägsenhet hemlig cervikalkanalen, som uppenbarligen inte tränga igenom normal spermier.

Kvantitativa immunologiska tester

Mikroagglyutinatsionny testet Friberg

Mikroagglyutinatsionny testet Friberg (TF) tillräckligt känsligt och är tillgänglig för kliniska diagnostiska laboratorier. Använda TF kan bestämma närvaron av ACAT och agglutination titer i olika material (plasma ejakulat, extrakt av slem i cervikalkanalen och i serum hos båda makarna).

Reagens:

1. Fosfatbuffrad saltlösning (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe olja.

Utrustning: mikroskop, tuberkulinspruta, mikroagglyutinatsionnye pipetter 1 ml, mikropipett kapacitet 0,1 ml.

Metod. Blodprov serum inaktiveras genom inkubering i en inkubator vid 56 ° C 30 m. Ejakulera, som erhållits genom masturbation, omedelbart spätts ut så att FSB, koncentrationen av sperma var 40 miljoner. i 1 ml.

På grund av materialet (plasma ejakulat, extrahera hemligheten med cervikalkanalen eller serum) förbereder en serie utspädningar 1:4 till 1:128 använder som en vätska för späd FSB. I brunnar med paraffinolja mikroagglyutinatsionnyh planschetter tuberkulinspruta med en nål införes (enligt vazelinovoe olja) Små droppar av varje spädning av testmaterialet. Efter varje prov tvättas fyra gånger sprutan. I varje utspädning tillsätts till 5 gånger mindre droppe ejakulat, och av 4 h vid rumstemperatur upptäckta agglutinat. Senaste avel, varvid under ett mikroskop vid 100 gångers förstoring upptäcks 3 agglutinatet under översyn och mer, agglutination titer motsvarar ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy testet Izodzhima (SITTA).

Titer immobiliserande ACAT serum, plasma eller sädesvätska extrakt hemliga cervikalkanalen sätts av antalet rörliga spermier i närvaro av antigener (sperma).

Komponenter.

1. Ejakulera, som produceras och beredda på samma sätt, för TF användning FSB; motilitet överstiger 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya serum från marsvin.

3. Immun humant serum (Ichs), ger i närvaro av komplement genom 1 timmars inkubering immobilisering 90 % sperma.

4. Normalt humant serum (NCHS), inaktiveras genom upphettning vid en temperatur 56 ° C 30 m.

5. Test inaktivserum, plasma och sperma extrahera hemliga cervikalkanalen.

Metod. För att utvärdera komplementaktiviteten immobilisera 1:a röret införes 0,5 ml isoton natriumkloridlösning, att bestämma förändringar i spermierörlighet utan ASAT 2nd provrör - 0,5 ml NHS, kontroll immobilisering tredje röret - 0,5 ml ichs och bestämma ACAT immobilisera den 4: e röret - 0,5 ml serum, eller plasma av ejakulatet, extrakt eller sekre endocervikal.

Därefter varje rör infördes genom 0,1 ml komplement. Det sista sak att alla rör tillsätts 0,05 ml spermier suspension i en koncentration 40 miljoner. i 1 ml. Stativrören placerades i en inkubator vid en temperatur 37 ° C 1 Nej. Rören avlägsnas från ugnen och försiktigt skakas för att återspegla fast agglutinerade spermier.

För att utvärdera resultaten under hög förstoring mikroskop (400X) beräknat andelen rörliga spermier i en droppe av provröret, avsatt på ett objektglas och täcktes med ett lock. Likaså ställer den andelen rörliga spermier i dropparna av provrören med NHS och ichs. Resultatet av reaktionen i beräkningen av formeln

SIT = K / A

där K - antalet rörliga spermier i kontrollen med ichs och NHS;

Om - antalet rörliga spermier i ett provrör (serumtest, eller plasma av ejakulatet, eller hemligheten med cervikalkanalen).

Med genomsnittlig SIT<2 testet är negativt (antal motila spermier i kontrollen och i provrören av ungefär samma), Om index CTI>2 - Testet är positivt, t. det är. i materialet (serum, plasma eller sperma extrahera hemliga cervikalkanalen) immobiliseras ACAT.

• Exempel 1. Markkontrollen till ichs - 10 % motila spermier. Den andra kontrollen med NHS - 80% motila spermier. De två kontroller tillsammans - 90 % motila spermier. I provröret - 80 % motila spermier.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Testet är negativt, immobiliserad ACAT frånvarande.

• Exempel 2. I provröret - 40 % motila spermier, Men i kontrollen, i Exempel 1.

KN = 90/40 = 2,2

Testet positivt. Det finns immobiliserad antikropp (ASAT), genom vilken spermierörlighet signifikant reducerad.