Анемија, zbog manjka aktivnosti glukoza-6-fosfata dehidroksid

Na aktivnost deficit glukozo-6-fosfatdegidrogenaza (G-6-PD) je najčešći nasledno abnormalnosti od crvenih krvnih zrnaca, uzrok broj hemolitiиkih krizam, povezane sa sticanje brojne medicinske svrhe sredstva. Iz krize u većina pacijenata je stanje ukupne nadoknade, Iako pojedinci drži konstantan broj hemolitiиkih anemija.

Prvi opis aktivnosti deficita, -6-FD je bio u 1956 господин. u osobe, Uzimam preventivno sredstvo za zaštitu antimalariиni droge primaquine. Bez obzira na ove studije 1957 господин. G. nedostatak je otkrio 6-FD u eritrocite bolesna, koji povremeno pridržavaju hemolytic kriza bez primanja nikakvu drogu.

Sada opisane u više 250 razne oblike mutirani g-6-PD. Razlikuju se po electrophoretic mobility enzima, njegova sklonost da bi je glukoza-6-fosfata i nikotinamidadenindinukleotidfosfatu (NADP) Posledica nizak afinitet je nedostatak enzimsku aktivnost u uslovima, Kada je koncentracija Odredićemo striktno ograničen je količinom od brzine njihove prethodne reakcije za obrazovanje. Nedostatak aktivnosti ne znači u većini slučajeva gubitak kose kao takva enzima iako tamo mogu biti posmatrane i. Najčešće, odsustva ili smanjenu aktivnost enzima je rezultat njegovog pacijenta u Patološki najnižeg nivoa obrasca.

Strukturna gena i gena kontrolu, Napravi sintezu g. 6-FD, nalaze se na hromozomima, Stoga, nasleđe nedostatak ovu enzimsku aktivnost u eritrocite uvek formiraju sa X-povezana.

Postoje dva glavna oblika mutanta, u kojoj amino kiselina zamena ne odnosi se na aktivni centri, i stoga, obe ove rasprostranjene mutacije su normalni. Razlikuju se međusobno po electrophoretic mobility, Međutim, afinitet za podlozi su podjednako. Na modernim nomenklature, jedan od ovih obrazaca, česti u Evropi, koja se zove obrazac BB, а други, taj trend u Africi je oblik od A. Trenutno opisano i druge mutirani obrasce, To takođe se ne razlikuje mnogo u kinematic indikatore, Ali imaju različite electrophoretic mobility.

Sceplennost' enzim sa Paulom daje na znatan sliиnim Zemljinom ljudi među osobama sa kliničke manifestacije patologija. Bila je prisutna kod homozygous mužjaka, nasledio patologiju majka sa njenom X hromozoma., homozygous kod ženke su (bolest je naslijeđena od oba roditelja) a deo heterozygous žene, nasledovavshih bolest od jednog roditelja sa mutirani fenotip na kakav ranije.

Najčešće aktivnost deficit, -6-FD nalazi se u evropskim zemljama, nalazi se na mediteranskoj obali, Grčka, Italija, jednako dobro kao i u nekim zemljama u Latinskoj Americi, Afrika, itd.

Можда, To je izuzetno visoka akumulacija jedan abnormalni gen u nekim lokalitetima olakšava sačuvan je od mešoviti brak, to dovodi do akumuliranje u populacija homozygous ženke, daje teške kliničke manifestacije bolesti se češće, od geterozigotnye medija, i povećava verovatnoća od rođenja homozygous mužjaci, kao raširena u prošlosti, ovi unosi tropske malarije.

Po hipotezama o postojećim, лице, imati deficit g. 6-FD, trpimo tropske malarije i retko umre od ove bolesti. Ko je za ova hipoteza kaže činjenica neujednačen širenje parazita među eritrocite heterozygous žene. Pronađen, to u normalne ćelije sadrže mnogo veći broj parazita, nego u oskudna. Postoje dva hipotetička objašnjenja za tu činjenicu. Prvi od njih: Ne gubimo vreme g-6 deficita-FD nije u stanju da izdrži efekte od parazita i odmah se deli u sistemu fagocitičnih makrofaga, Gde umre Plasmodium. Drugi stav uključuje zaliha za razvoj glutation je parazit smanjene, iznos koji smanjenja u eritrocite sa deficitom od g. 6-FD.

Етиологија и патогенеза

Prva faza uticaj droge je njenu transformaciju u telu, premestite na aktivni obrazac, To može dovesti do promene u strukturi membrana ne gubimo vreme. U aktivnom obrascu sastojaka komunicira sa 550nm su. Kada količinu hidrogen peroksida..

Reciklirani glutation peroxidase sistem koristeći on detoksinira neke od peroksid, reakcija proces reciklirani glutation je ta premazana.

U zdravih ljudi, akutna hemolytic kriza razvija sa uvođenjem velike količine proizvoda za medicinske svrhe (otrovna doza). Kriz da iznikne, Kada je glutation oporavak sistema ne može da se izbori sa ostatke formirana kompleksima i ta premazana glutation. Sa deficitom od aktivnosti glukoza-6-fosfata dehidroksid i vraćanje narušene NADP, Uprkos normalne aktivnosti glutation reductase, prekršila njenoj obnovi, Jer nema normalan vodonik izvora. Reciklirani glutation ne mogu da odolim oksidativnih efekte od konvencionalne terapijske doze lekova. Ovo vodi do oksidacije od hemoglobina, gubitak š od molekula hemoglobina, gubitak u globin gen kolo. Slezina objavljuje krv iz Gejnca bik. Uradi to, izgubio deo površine crvena krvna zrnca, To vodi u smrt.

U pathogenesis od nemoguce, povezane sa jedenjem Pjaci pasulj, i dalje je mnogo nepoznato. FAVISM (favizm) razvija samo u neki pojedinci sa nedostatak aktivnosti g-6-PD. Вероватно, da pokaže ovu anemiju zahteva kombinacija dva neutralizovali sredstvo defekta. Можда, Govorimo i o nedostatku propusnicu za neki pojedinci otrovne supstance., koji se nalaze u pasulj konja, ili o formiranju i metabolita, pozivanje zloupotrebe u sulfhydryl grupe eritrocite. U zdravih osoba prima malu količinu konja pasulj ne izaziva naglašenu nemoguce, Jer u presence od smanjene glutation u crvenim krvnim zrncima mogućnosti da se suprotstavimo toksičnih efekata metabolita. Nasledstvo od ovaj deficit, очигледно, autosomnoe dominantna. Sa kombinacijom izuzetne transformacije u telu otrovne supstance, koji se nalaze u pasulj konja, sa deficitom od g. aktivnost 6-FD manifestuje kliničke znakove anemije primahinovoj.

Клиничке манифестације

Eksperti koji je dalja podela opcije g. 6-FD u skladu sa kliničke manifestacije homozygous pacijenata imaju i nivo aktivnosti u eritrocite četiri klase.

Prva klasa -Opcije, u pratnji hronične nemoguce.

Druga klasa -Opcije aktivnost, -6-FD u eritrocite je 0 10 % od normi, nosač, što dovodi do nedostatka nemoguce se kriza, i kriza, povezane sa uzimao drogu, ili pijenja konja od pasulja.

Treća klasa -Opcije aktivnost u eritrocite 10-60 % od normi, u kojem svjetlo može se primetiti po kliničke manifestacije, povezane sa ste uzimali neke lekove.

Četvrti razred — varijanti sa normalna ili blizu normalne nivoi aktivnosti, Ne u pratnji kliničke patologije.

Kada se rodi dete je nemoguce, koje se odnose na oba prvi, i druga klasa g. deficit 6-FD.

Nivo aktivnosti od g. 6-FD u eritrocite se uvek ne poklapaju sa ozbiljnost kliničke manifestacije. U mnogim verzijama u prvom razredu je definisao 20-30 % nivo aktivnosti od enzim. sa druge strane, na nultom nivou aktivnosti u neki pacijenti to ne poštuje kliničke simptome. Ovo je krajnji rok, Kao prvo, sa svojstva lutantnyh enzima, Kao drugo, по свој прилици, brzinom iskopavanja drogu citohromnym aparat za jetru pacijenta.

Najčešće aktivnost deficit, -6-FD ne pruža kliničke manifestacije bez posebne provokacije hemolytic krizu. U većini slučajeva, hemolytic kriza počinje nakon što sulfanamides (norsulfazola, streptocida, sulfadimetoksina, sulfazil-natria, etazola, biseptola), lek protiv malarije drogu (primahin, kinin, akrihina), nitrofuranovyh droge (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOC, nevigramona), droga izonicotinova kiseline (tubazida, ftiwazida), PASC-natrijum, kao i nitroglicerin.

Lek protiv malarije droge sa aktivnost g-6-PD može biti dodeljena delagil, iz sulfanilamidnykh-ftalazol. Brojne drogu, u velikim dozama izaziva hemolytic krize, u malim dozama može da se koristi sa deficitom od g. aktivnost 6-FD. Među njima su neљto, амидопирин, fenacitin, левомицетин, streptomicin, antidiabetics sulfa droge.

Svim lekovima, može da izazove hemolytic krize, kataliziram oksidacioni denaturatia hemoglobina molekularni kiseonik.

Kliničke manifestacije bolesti može doći do sekunde-the trećeg dana od početka prijema lekove. U početku se pojavljuju lako scleral, tamno urina. Kada si prestao da uzima lekove tokom ovog perioda hemolytic tešku krizu ne razviju. Ako se nastavlja tretman, za 4-5 dana se može javiti hemolytic Kriz raspodjelu urin crno ili ponekad Brown, koja je pridružena intravaskularne eritrocita raspada. Hemoglobin mogao odbiti po 2-3 %.

Kada je ozbiljne bolesti je povećana telesna temperatura, pojavljuju se oštre glavobolja, bol ekstremiteta, повраћање, Ponekad proliv. I evo ga dolazi, smanjuju krvni pritisak. Često povećava slezina, Ponekad jetre.

U rijetkim slučajevima, otkazivanje bubrega razvija, povezane sa naglim padom bubrega za filtriranje i bubrega Cevasti blokiranja krvnih ugrušaka.

Laboratorijski pokazatelji

U studiji o krvi je identifikovao anemija sa povećanim brojem reticulocytes. Bilo je povećanje broja ćelija sa zaokret u mielozitov. Neki pacijenti, посебно код деце, broj ćelija koje mogu ponekad da ustanu na značajne cifre (100 Т у 1 Ја и још много тога). Broj trombociti se ne menja.. Na bojenje od eritrocite kristalnu tekućinu u hemolytic ozbiljne krize je otkriven je veliki broj Taurus Gejnca.

Otkriven je oštar iritacije klica crvene koštane srži. Povećana seruma slobodni hemoglobin sadržaja, često nivoa bilirubin zbog indirektna. Koristeći uzorak benzidinovoj, otkrio je prisustvo hemoglobina u urin bez crvena krvna zrnca, Ponekad je otkrio hemosiderin.

U nekim vidovima deficit glukozo-6-fosfatdegidrogenaza postoji samoobuzdavanje hemolizu, Т. то је. hemolytic kriza krajeve, иако, pacijent se nastavlja da uzima lekove, To je izazvalo hemolytic Kriz. Sposobnost da biste ograničili hemolizu uzrokovana raste skoro normalno cifre nivo aktivnosti od enzim u retikulocitah. U većini oblika znatno smanjen.

Deca imaju ozbiljne hemolytic krize doći češće, nego kod odraslih. Izraz aktivnosti od g. deficit 6-FD ponekad pojave odmah nakon rođenja. Ovo je hemolytic bolest za novorodjence, nije povezan sa imunološke sukoba. Teško je samo tako, kao i kod broj hemolitiиkih anemija, zbog materinski i napuhani rezusnesovmestimost'ju. Možda prisustvo na kernicterus sa kobne neurološke simptome.

Pathogenesis od ovih kriza studirao nije dovoljno. Još nije utvrdila, Da li ove krize doći spontano u vezi fiziološki nedostatak enzima glutation peroxidase aktivnost na rođenju ili izazvati ih je upotreba određenih antiseptik pri obradi pupčanu vrpcu na dete. Можда, da ponekad kriza vezanim za uzimanje majka neke lekove.

У неким случајевима, hemolytic kriza u deficit, g. aktivnost 6-FD doći u pozadini su infektivne bolesti: Инфлуенца, salmonellosis, virusni hepatitis. Kriza može takođe biti izaziva azidozom dijabetesa, kada ili nedostatak bubrega.

Mali deo pacijenata sa nedostatak aktivnosti g-6-PD je primetio konstantan broj hemolitiиkih anemija, povezane sa ste uzimali neke lekove. U ovim slučajevima, označen neznatno povećanje u slezinu, umereni normochromal anemija sa povećanim sadržajem od reticulocytes, jeritrokariocitov u koštane srži i bilirubin nivoe. Exacerbation bolesti je moguće ni nakon prijema gore navedene lekove, ni pred licem infekcija.

Дијагностика

Osnova za dijagnozu za ovaj enzim nedostatak eritrocite je definisanje aktivnosti g-6-PD kod probanda i njeni rođaci. Od kvalitativne metode, koristi u ovu svrhu, preporučiti vrlo jednostavan metod.

Metod Bernstein vam omogućava da ustanovi ne samo aktivnosti deficit, g. 6-FD u svi gemizigotnyh ljudi, homozygous ženke, Ali otprilike proceni manjak ovaj enzim iz heterozygous žene. Ovaj metod uspeva da otkrivaju o 50 % heterozygous žene. Prednost ove metode je povoljnosti za upotrebu u istraživanju masovnih populacije u Expeditionary uslovima.

Metod koji se zasniva na promjena boje boja 2,6-dihlorfenolindofenol i njegove obnove. U prisustvu g-6-PD dolazi do oksidacije glukoze 6-fosfata i NADP oporavka stvaranjem NADP-n. Ova supstanca obnavlja fenazinmetasulfat, što je zauzvrat vraća 2,6-dihlorfenolindofenol. Fenazinmetasulfat posluje u ovu reakciju kao vrlo aktivni vektor elektrona NADP g. boje. Bez na fenazinmetasulfata reakcija je nekoliko sati, i u prisustvu fenazinmetasulfata obezbojenje se javlja tokom 15- 30 м.

Реагенси.

1. Rešenje o NADP: 23 mg NADP rastvorio u 10 мл воде.
2. Rastvor glukoze-6-fosfata (G-6-s): 152 mg soli natrijum od glukoza-6-fosfata rastvorio u 10 мл воде. Barijum Sol i glukoza-6-fosfata trebao biti prebačen u natrijum so. Da biste to učinili, teљka 265 mg barijum Sol i glukoza-6-fosfata, utopio u 5 мл воде, Dodavanje 0,5 Јр 0,01 M rastvora sona kiselina i 1 suva natrijum sulfata mg. Je prenaglio je skupljene centrifugom. Nadosadochnyj sloj neutralisati 0,01 M rastvor natrijum hidroksida i destilovanu vodu da 10 Јр.
3. Fenazinmetasulfata rešenje: 2 fenazinmetasulfata mg rastvorio u 100 ml TRIS-bafer 0,74 П; пХ вредност 8,0.
4. Obojiti rešenje 2,6-dihlorfenolindofenola (natrijum soli): 14,5 mg dye rastvorio u 100 ml bafer rastvora TRIS-HCL (0,74 П; пХ вредност 8,0). Bafer rešenje pripremljen od 1,48 M rastvora TRIS-gidroksimetilaminometana (42,27 g 250 мл воде) и 1,43 М раствор хлороводоничне киселине (2 ampule fiksanala, sadrži 0,1 g-EQ, Donesi vode je 135 Јр). До 230 dodao je TRIS-gidroksimetilaminometala ml 110 мл хлороводоничне киселине, dovesti pH 8,0 i dodajte vode da 460 Јр.

Pre upotrebe, pripremite mešavine reagensi: 1 не. rešenje NADP (1), 1 не. G. rešenje 6-f (2), 2 не. fenazinmetasulfata rešenje (3) и 16 не. Rešenje 2,6-dihlorfenolinodofenola (4).

Метод.

U epruveti, sadrži 1 мЛ дестилована вода, Napravi 0,02 ml krvi.

Nakon pojavljivanja hemolizu dodati 0,5 ml mešavine reagensi. Rezultati uzimaju u obzir kroz 30 м. Reakcija smatra se normalno sa punom promjena boje boja. Где, Kada boje obezbojenje od toga (ostaci intenzivno plavo-zelenom bojom sam), reakcije kao sharp-pozitivna. Ako je intenzitet se smanjuje., Ali plavo-zelena boja ostaje, reakcija mislim da Polo-pozitivna. Где, Kada je mnogima jasno je, Ali, u poređenju sa kontrolom ostaje pramenima, reakcija kao plus i minus.

Rezkopolozhitelnye i pozitivnu reakciju u homozygous gemizigotnyh žena i muškaraca. Ponekad je geterozigotnye žene daju pozitivnu reakciju, Ali najviše plus-minus.. Штавише, Plus-minus odgovor na ponekad posmatrao u potpuno zdravi ljudi sa nekim smanjenja aktivnost enzima protiv pozadini bolesti ili uzimanja lijekova. Plus-negativna reakcija treba uzeti u obzir i provjerite kvantitativne metoda enzimsku aktivnost samo kada žene sumnjao nemoguce, uzrokovano nedostatak aktivnosti glukoza-6-fosfata dehidroksid. Ti ne treba u račun plus zamrzavanje reakciju u masovno istraživanje.

Pogrešnih pozitivnu reakciju mogu biti izraženi kod pacijenata sa anemija usled činjenice, да 0,02 ml krvi, kao cijev, sadrže malu količinu crvenih krvnih zrnaca i, дакле, malu količinu enzima. U ovom slučaju, epruveta sa destilovanom vodom treba dodati dva ili tri eyedroppers (о 0,02 Јр) крв, da biste obojili ove probne epruvete prije dodavanja boja se ne razlikuje mnogo od kontrole.

Metoda za fluorescentnu mrlje Beutler i Mitchell na osnovu određenog florescentnu boju na smanjenu NADP u prislušnoj ultravioletno svetlo (440- 470 Нм), vizuelno pruženi osnovnih uslova.

Реагенси.

1. TRIS-HCl bafera 0,5 П; пХ вредност 8,0: 60,55 Tereza je raspušten u 800 мЛ дестилована вода, Dodavanje 20 ml koncentrirani HCl, dovesti pH 8,0 uz pomoć 2 M rastvora HCl i dodajte vode do 1 Јр; rešenje radnju da 36 dana na temperaturi od 4° c.
2. Rastvor glukoze-6-fosfata 20 П: 6 mg disodium začin glukoza-6-fosfata rastvorio u 1 мЛ дестилована вода; uskladištite do 2 dana na temperaturi od 4° c.
3. Rešenje o NADP 10 П: 8 mg NADP rastvorio u 1 мЛ дестилована вода; uskladištite do 10 dana na temperaturi od 4 ° Ц.
4. Rastvoru od saponin 1 % uskladištite do 20 dana na temperaturi od 4 ° Ц.
5. Rešenje o Oksidisani glutation (10 Јр): 2,4 mg glutation rastvorio u 1 мЛ дестилована вода; uskladištite do 10 dana na temperaturi od 4° c.

Метод.

Pre nego što definišete Kuk inkubacije mix, mešanje 1 не. rastvor glukoze-6-fosfata, 1 не. rešenje preko Ph, 2 не. rešenje o saponin, 5 не. Bafer i 1 не. rešenje o glutation. Крв (0,01 Јр) napravljeno u epruvetama ili ćelije gemaggljutinacionnoj daske i dodavanje 0,2 ml od inkubacije mix. Посредством 15 min micropipette izaberite jednu kap na smeše inkubacije (0,02 Јр) iz svakog uzorak i stavi ih na papir u obliku hromatograficheskuju mrlja prečnika 10-12 mm. Mrlje od suše u svježem zraku na sobnoj temperaturi i prikazivanje pod UV svetlo za vrednovanje florescentnu boju. Kontrola uzoraka poznato je da normalno krv. Kontrola kvaliteta reagensi sadrži nema krvi.

Rezultat rezultate.

Nepostojanje florescentnu boju pokazuje da nema aktivnosti, prisustvo florescentnu boju (intenzivan plavi plamen) – Dostupnost aktivnosti, kao u slabom sjaju – srednja reakcija. Po uslovima eksperiment metoda neće dati netačno negativne rezultate. Izvor netačno pozitivna dijagnoza može biti anketirani su izrazili anemija, Ali u mnogo manjoj meri, nego Berstein metod. Cak i kada je usvojen izražena anemija, srednja reakcija, Radije nego odsustvo florescentnu boju.

Upotreba kvantitativne metode za određivanje aktivnosti g-6-PD daje mogućnost da identifikujete usporavanje, ne samo u gemizigotnyh i homozygous pacijenata, Ali zene geterozigot. Од, da je broj reticulocytes i boja stopa utiču na nivo aktivnosti enzima, Preporučuje se da izmeni rezultate uzimajući u obzir ove indikatore.