Paroxyzmálna nočná hemoglobinúria – Choroba Marchiafava Michele

Paroxyzmálna nočná hemoglobinúria je relatívne zriedka nájdený získané forme hemolytickej anémie, spojený so zmenou štruktúry erytrocytov, Granulocytov neutrofilov a trombocytov. Toky s známky intravaskulárnej hemolýzy, kde sú hemoglobinúria, gemosiderinuriya, zvýšenie hladiny plazmatických voľnom hemoglobínu v. Choroba je často komplikovaná periférnych žíl a trombózy ciev vnútorných orgánov.

Etiológia a Patogenéza paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii

Prvý popis tejto choroby bol uvedený v 1882 g. Bolo popísané podrobnejšie v 1928 g.

Spoločný názov choroby Paroxyzmálna nočná hemoglobinúria (KALOVÉ ČERPADLÁ APG), Avšak, to skutočne zodpovedá malú ochorením, pretože neexistuje žiadna prítomná paroxyzmálna hemoglobinúria pozoruje nie vždy.

Intravaskulárna hemolýza s gemosiderinuriej okrem APG je pozorovaný v mnohých formách autoimunitná hemolytická anémia ako s teplom, a studenej protilátkami, najmä keď formuláre s teplo gemolizinami, rovnako ako v niektorých foriem dedičná hemolytická anémia, súvisí porušenie štruktúry membrány erytrocytov.

Choroby Markiafavy-Micheli pozorované v rôznom veku. Dôvod zvýšenej deštrukcii červených krviniek je erytrocytov, sami vadu.

Červené krvinky u pacientov s PNH, ako je uvedené vyššie, komplementom ľahko zbaliť pri vytváraní optimálnych podmienok jeho platnosti, alebo kedy acidifikácie sérum, alebo pri zvyšovaní koncentrácie komplementu okolo erytrocytov vytvorením nízke koncentrácie iónov v saharoznoj Streda. Červené krvinky u pacientov s PNH máte zvýšenú citlivosť na účinky protilátok ako aglutinínov v sére, a, obzvlášť, hemolysins.

Kedy PNG ovplyvňuje nielen červených krviniek, ale leukocytov a krvných doštičiek pacienta. Krvných doštičiek a leukocytov u pacientov s PNH majú zvýšenú citlivosť na účinky doplnkom ako keď acidifikácie sérum, a Streda s sacharóza nízku iónovú silu. Sú mnoho krát citlivejší na účinky izoaggljutininov, ako darca trombocytov a leukocytov. Tak, krvných doštičiek a bielych krviniek sa rovnakou chybou v membráne, ktoré a červených krviniek.

Zisťovanie protilátok na povrchu červených krviniek, leukocytov a krvných doštičiek a tým dokázať členstvo APG autoagressivnyh skupina chorôb nemôže byť najcitlivejších metód.

Existuje presvedčivý dôkaz o existencii dvoch odlišných populácií apg v erytrocytoch. Najodolnejšie buniek u zdravého človeka je retikulocytov APG sú viac krehké. To naznačuje, že, patologické červených krviniek obyvateľstva jednoducho neprežilo dozrievania, a staršie zrelých erytrocytov sa týkajú zdravé alebo takmer zdravej populácie.

IN 1970 v štúdii erytrocytov Latina, postihnuté PNG, To bolo objavené, že obsahujú, rovnako ako u zdravých mulati ženy, elektroforetického varianty dva normálne pán 6-FD; Variant, častejšia u obyvateľov Afriky, a možnosť, typické obyvateľov Európy. Potom, čo strávil hemolýza obrátil, že abnormálne červené krvinky obsahujú len jednu možnosť Mr.. 6-FD, a normálne červené krvinky – elektroforeticky varianty g-6-PD. Preto, rozložených červených krviniek sú potomkami jednu bunku.

Tento fakt s veľkou presnosťou indikuje prítomnosť dvoch populáciách erytrocytov, rôzne nie len funkčne, ako, napr, v mikrosferocitoze, ale aj podľa pôvodu: inými slovami, To potvrdzuje prítomnosť patologických klon buniek, T. to je. somatické mutácie. Totožnosť lézií membrány erytrocytov, počet neutrofilov a trombocytov naznačuje, že, patologické informácií pravdepodobne dostane klietky, ďalšie zmeny v doplnku kmeňových, T. to je. predchodca bunky mielopojeza. Blastomnyj rast PNG nie je špecifická. Opísať len ojedinelé prípady rýchleho rozvoja leukémie na pozadí PNG. Avšak, Môžeme predpokladať,, PNG je variant nezhubný nádor krvných systému, po dlhú dobu, produkujúce žiadne bujnenie nádorových buniek, charakteristická pre iné formy leukémie.

Komplementchuvstvitel'nosti mechanizmus rozvoja v PNG, kým je to jasné.

Významné zmeny v aktivite enzýmov glykolýzy a pentozno-fosfát cyklu nie.

Kedy PNG znížená aktivita acetylcholínesterázy asi erytrocytov, s najväčšou pravdepodobnosťou spôsobené narušenie štruktúry membrán červených krviniek, pretože enzým sa nachádza na povrchu membrány a ľahko zlomený, keď jeho porážky. Známy, že použitie inhibítory acetylcholínesterázy asi nemá žiadny vplyv na prežívanie erytrocytov. Však jeseň acetylcholínesterázy asi činnosti je zaznamenaný aj na iné formy hemolytická anémia, preto nemôžu vysvetliť jav zvýšené komplementchuvstvi- Lémy.

Sú dostupné údaje, dôkazy o zvýšenie počtu nenasýtených mastných kyselín, zahrnuté v štruktúre fosfolipidy, membrány erytrocytov. Existuje možnosť, že zmeny lipidov-je len odrazom iných zmien v štruktúre membrán červených krviniek. V štúdii proteínu membrány erytrocytov u pacientov s PNH v polyakrylamidovom Geli elektroforéza v prítomnosti sodný dodecilsulfata set, to, že v niekoľkých zlomkoch obsahu bielkovín je výrazne odlišná od kontroly.

Hlavnú úlohu v patogenéze trombotických komplikácií v APG odsunutí vnutrisosudistomu rozpad červených krviniek a koagulačných faktorov stimulácia, uvoľňuje z erytrocytov počas ich rozchodu. Kedy APG zničené väčšinou retikulocytov, Mohlo byť, To by vysvetlené výskyt trombotických komplikácií v tejto choroby, na rozdiel od iných foriem hemolytická anémiou, sprevádzané výrazným intravaskulárnej hemolýzy.

Klinické prejavy paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii

Ochorenie sa často začína fnuk. Pacienti sa sťažujú na slabosti, nevoľnosť, závrat. Niekedy poznámky subicteric skler. Často prvej sťažnosti na bolesti hlavy, bolenie brucha rôzne lokalizácie. Tendencia k zvýšenému trombus znemožňuje pacientovi lekársku pomoc. Hemoglobinúria zriedkavý je prvým príznakom ochorenia a u niektorých pacientov APG môže chýbať vôbec. V niektorých prípadoch zdá, po prvý raz cez 2-3 roky a to aj prostredníctvom 10 rokov po nástupe ochorenia.

Jednou z charakteristických čŕt PNG-záchvaty bolesti brucha. Lokalizáciu to môže byť veľmi odlišná. Mimo obdobia plážové bolesť brucha, zvyčajne, nedodržanie. Často sa pripojí, vracanie. Pravdepodobne, bolesti brucha u pacientov s PNH je spojená s DVT mezenteriálne lode.

Periférna cievna trombóza (viac často ako ne, ciev horných a dolných končatín, najmenej-obličkových ciev) aj charakteristickým príznakom paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii. V 12 % APG pacientov tromboembo. Tromboembolické komplikácie sú najčastejšou príčinou úmrtia v tejto choroby.

Keď cieľ študovať z pacienta často pozoruhodné bledosť s miernym nádychom zheltushnym. Často je tvárové opuchy, niekedy nadmerné plnosti. Snáď mierny nárast sleziny a pečene, Hoci to nie je typický pre APG.

Paroxyzmálna nočná gemoglobinurii charakterizuje známky intravaskulárnej hemolýzy, Najdôležitejšie je zvýšenie plazmatických voľnom hemoglobínu. Tejto téme pravidelne takmer všetci pacienti APG. Avšak stupeň zvýšenie plazmatických voľnom hemoglobínu sa líši a závisí na, v ktorom období štúdii choroby. Počas krízy tohto podiel zvyšuje výrazne, Tam bol tiež nárast počtu metal'bumina plazmy.

Plazmatických voľnom hemoglobínu úroveň závisí od stupňa hemolýzy v okamihu, obsah gaptoglobina, stupeň filtrácie hemoglobínu v moči a rýchlosť zničenie komplex hemoglobín-hemoglobín. V prípade malých stupeň hemolýzy voľného hemoglobínu v plazme nebude postačovať prefiltruje cez obličky filter. Preto hemoglobinúria nie je povinné symptóm ochorenia. Kedy prechádza nefronov kanálikov vylučovaný hemoglobín je čiastočne zničený a uložený v epitelu semenných kanálikov. To je dôvod, prečo moč hemosiderinu.

S močom hemosiderínu drvivá väčšina pacientov s paroxyzmálna nočná hemoglobinúria. Gemosiderinurija niekedy neobjaví ihneď. To je dôležité, ale nie sú špecifické pre PNG príznakom ochorenia.

Laboratórne parametre v paroxizmalna noc gemoglobinurii

Hemoglobínu u pacientov s PNH pohybuje od 1,86 — 3,1 mmol / l (30-50 g/l) a ešte viac nízka k normálu počas remisie.

Počet erytrocytov u pacientov s PNH znižuje hladinu zníženie hemoglobínu. Farba indikátora dlhšie obdobie zostáva blízko k jednotke. Kde, Ak pacient stratí značné množstvo železa s močom vo forme hemosiderinu a hemoglobín, postupne klesá hladina železa. Nízka farba indikátora je pozorovaná u približne polovice pacientov. Niektoré z nich majú zvýšené hladiny hemoglobínu (P), najmä v období zvýšil.

Veľká časť pacientov obsah zvýšenie retikulocytov, ale relatívne nízku (2- 4 %). Počet leukocytov v PNG vo väčšine prípadov zníži. U mnohých pacientov je 1,5-3 g 1 l, ale niekedy znížiť na 0,7-0,8 g 1 l. Leukopénia, zvyčajne, Tam je zníženie počtu neutrofilov. Niekedy krv v APG normálne alebo vysoká – až 10-11 g 1 l.

Keď APG znižuje fagocytárnu aktivitu neutrofilov granulocytov.

Trombocytopénia tiež bežne vidieť v PNG, Avšak, funkčný stav krvných doštičiek v normálnej. Pravdepodobne, To vysvetľuje rarita krvácavých komplikácií pri tejto chorobe, Hoci počet trombocytov niekedy sa výrazne zníži – až 10-20 g 1 l. Obvykle vo väčšine pacientov doštičiek 50 – 100 g 1 l. Normálny počet trombocytov nevylučuje diagnózu paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii.

V štúdii kostnej drene zistené príznaky, hlavne Charakteristika hemolytická anémia je červená podráždenie zárodočných krvotvorby v normálne číslo mielokariocitov. U niektorých pacientov má mierne zníženie počtu Megakaryocyte.

Hladina sérového železa v PNG To záleží na štádiu ochorenia, stupeň intravaskulárnej hemolýzy a aktivitu krvného. Kde, Ak majú pacienti stále alebo časté hemoglobinúria, ako aj neustále gemosiderinurija, obsah železa v tele, a teda, poklesom hladiny sérového, niekedy veľmi výrazne. Niekedy PNG začína s príznakmi hypoplastické. Železo ukladá v tele pacienta APG závisí, jedna strana, zo straty železa v moči, a na druhej strane intenzita erytropoézou. Preto nemôžete brať železo nedostatok diagnostický znak paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii.

Hladina sérového bilirubínu v PNG vo väčšine prípadov rozostrený zvýšené alebo normálne, najmä prostredníctvom nepriameho. Priemerný obsah bilirubínu je 22-28 umol/l. Malo by sa vziať do úvahy, že keď hemoglobín hemoglobín tvoril kaz vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj komplex, kto a nakoniec aj rozíde s tvorbou bilirubínu.

Niektorí pacienti s PNH choroba začína obrazy aplastickej anémie.

Diagnóza paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii

Po rozbití paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii shell štruktúry erytrocytov, ako sa odráža v vysoký stupeň citlivosti na účinky jej doplnkom. Tento precitlivenosť je detekovaný, použitím buď vzoriek Hema, alebo citlivejšie saharoznoj vzoriek. V niektorých prípadoch sa však, najmä v gemolizinovoj forma autoimunitná hemolytická anémia, saharoznaja vzorka môže dať falošne pozitívny výsledok. Gemoliziny sú upevnené na povrchu svoje vlastné červené krvinky a v prítomnosti doplnkom pri saharoznoj Streda zničil ich, Kým PNG je charakterizovaná zničenie buniek komplementom bez expozície protilátky.

Vylúčiť formulár gemolizinovoj autoimunitná hemolytická anémia štúdia odporučila hemolysins ako je popísané vyššie a pomocou sérových vzorkách pacientoch a darcoch odnogruppnogo erytrocytov cross-saharoznoj, a nie naopak, ako je zvykom. Kedy APG priame vzorka je pozitívna, a kríž-negatívny. Kedy môže vyskytnúť gemolizinovoj forme AIGA, ako pozitívne, a negatívne cross-vzorka. V týchto prípadoch je vhodné použiť tretiu možnosť saharoznoj vzorky — používať obe séra, a červených krviniek pacienta. Stupeň hemolýzy v tejto variante minimum pri PNG a maximálne gemolizinovoj forme AIGA. Vysvetliť taký výsledok môže byť vysoko špecifických protilátok v sére pacienta gemolizinovoj forma autoimunitná hemolytická anémia na antigén, dostupné vo veľkých množstvách v erytrocytoch práceneschopnosti, ako v erytrocytov darcu. Saharoznaja priamej pozitívnej vzorky týchto pacientov je spojená, pravdepodobne, prítomnosť erytrocytov priradených protilátky.

Detekcia hemolysins metóda agregatgemaggljutinacii a iných pomáha dať správnej diagnózy. Nemožno použiť ako darcu sére pacientov, rovnako ako v prípade gemolizina obsahu výsledok nemusí byť lozhnopolozhitel'nym. Negatívny výsledok môže dôjsť, Ak zdroj používa sére pacienta doplnkom APG alebo cirhózou pečene v sére pacienta, Reumatoidná artritída, Systémový Lupus Erythematosus a ďalších chorôb, v ktorých doplnkom úrovni znižuje. Saharoznaja vzoriek a vzoriek Hema stáva menej výrazný, Ak užívate krvi od pacienta ako antikoagulačnej heparín sa používa, skôr ako citrát sodný. Po hemolytická kríza intenzita je znížená vzoriek Hema a saharoznoj vzoriek, ale oni sa nestanú negatívne.

Definícia voľnej plazme hemoglobínu v Bing Derviz modifikácia metódy a Bjalko s paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii

Metóda je založená na schopnosť reagovať s kyselinou-benzidín Streda v prítomnosti peroxidu vodíka s tvorbou zelené farbivo hemoglobín, valcovanie najprv v modrej farbe, a potom v červeno-fialové. Intenzita je úmerná počtu hemoglobín.

Činidlá.

1. Acetátový pufer 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g octanu sodného, rozpusteného v 1 l vody (0,2 M roztok); v ďalšie meracie žiarovka Cook 1 l 0,2 M roztoku kyseliny uksousnokisloy; zmiešaný 480 ml č. 1 a 520 ml č. 2.
2. Peroxid vodíka 0,3 % riešenie (Príprava pred použitím chov riešenie v 100 doba).
3. Soljanokislyj benzidín 0,1 % riešenie: 50 benzidín mg soljanokislogo, rozpustí v 35-40 ml tlmivého roztoku octanu, zohreje sa roztok na 80 ° C vo vodnom kúpeli a po ochladení priniesť acetatnym medzipamäte 50 ml.

Filtračnej fľaše a skladujte v tme pri izbovej teplote nie viac ako 7 dní. Zažltnuté činidlo je nevhodné, Rýchle potemnenii musíte perekristallizovat "benzidín od alkoholu.

Metóda.

Krv štúdií vziať z žily suchej ihly v silikonirovannuju trubici, obsahuje akýkoľvek antikoagulant. Krvi s antikoagulantom odstredí viac 10 minút pri 1500 / Min. Po oddelení jeho plazma odstredivky opäť za 10 minút pri 8000 RPM pre nanášanie leukocytov.

V skúmavke je vyplnená 4 ml acetátového pufra, 2 ml peroxidu vodíka, 2 ml benzidín a 0,04 ml testovaného séra sa zmieša a nechá stáť 3 m, potom podlejeme dĺžka optickej dráhy kyvety 1 Pozri a fotometrirujut proti riešenie odškodnenia na zelenú clonu. Intenzita modré sfarbenie zvyšuje počas 4-5 minút, Preto, meranie opakujte 3 - 5 krát za sebou a nahrávať maximálne namerané hodnoty. Po 5-6 minút sfarbenie sérum stáva fialovo-hnedá odtieň, a hodnoty optickej hustoty začne klesať. Dvoch určených maximálnych výsledkov optickej hustoty stredne užíva.

Odškodnenie riešenie, pozostávajúce z 6 ml acetátového pufra, 8 ml peroxidu vodíka, 3 ml benzidín a 0,06 ml izotonickým roztokom chloridu sodného, Pripravte súčasne s.

Kalibračná krivka displej na riešenie hemoglobínu. V krvi, prijaté riešenie hemoglobínu, meranie jeho obsah (lekárske kolorimetre alebo lekárske refraktometre). Pripravte roztok hemoglobínu 1 g / l, z neho pripravte roztoky s nižšou koncentráciou: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 a 0,2 g / l. Každého výsledného roztoku pridajte 0,04 ml zmesi 4 ml acetátového pufra, 2 ml benzidín a 2 ml peroxidu vodíka.

Hlavné riešenie gemolizata (1 g / l) pre kalibráciu krivka je potrebné skladovať v chladnom počasí, apripravovať pracovné roztoky nižších koncentráciách bezprostredne pred skúškou.

Za normálnych okolností, v 1 obsahuje litrov krvnej plazmy 0,0005 mmol / l (0,01-0,04 G) Hemoglobín.

Definícia hemosiderinu moču s paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii

Degradácia hemoglobínu železo je adsorbovaný renálnej tubulárnej epitelu a je súčasťou hemosiderinu. Slushhennye buniek epitelu renálnej tubulárnej v týchto prípadoch obsahovať zrná z hemosiderinu.

Starostlivé štúdium sediment moču po odstreďovania zrno hemosiderinu viditeľné a bez špeciálneho farbiva. Však oni oveľa výraznejší pri zafarbenia Perlsa metóda.

Metóda.

Po odstredení moču vrchnú vrstvu odsávaný, ponoru pridá svejeprigotovlenny roztok 1 % Žltá krvi soli a 1 % kyseliny chlorovodíkovej (Zmiešajte rovnaké množstvo 2 % roztok kyseliny chlorovodíkovej a žltá krv soľ). Po 10 minút po zmiešaní, zmes sa odstredí a sediment sa pozerá na. Zrno hemosiderinu farbenie modrá.

Stanovenie plazmatickej metgemal'bumina spektrofotometrická metóda

Činidlá.

1. Fosfátového pufra izoosmoticheskij (pH 7,4): zmiešaný 18 ml 0.15 M roztok sodíka digidrofosfata (24,4 g YaN2R04 na 1 l vody) a 82 ml 0,15 M roztok hydrogénuhličitan (21,3 g NaH₂PO₄ na 1 l vody).
2. Hydrogensiričitan sodný.
3. Hydroxid sodný 1 M.
4. Roztoku ľudského sérového albumínu (40 g / l).
5. Riešenie gemina (5 mg / 100 ml); okamžite pripraví rozpustením gemina v malých množstvách lúh sodný, a potom: prinášať to do požadované množstvo roztoku sérový albumín.

Metóda.

K 2 pridáva ml séra alebo krvnej plazmy 1 ml zabuferernogo izoosmoticheskogo riešenie, pH 7,4. Zmes sa odstredí 30 min. 1200-1500 rpm. Stanovenie optickej hustoty pri 569 nm. Potom ak zriedeného plazmy je umiestnený do skúmavky a pridajte približne 5 mg sušeného hydratované sulfát sodíka. Cez 5 min opakovane Zmerajte optickú hustotu pri rovnakej vlnovej. Rozdiel medzi dve hodnoty optickej hustoty zodpovedá optickej hustoty metgemal'bumina. Metgemal'bumina koncentrácia určí harmonogramu kalibrácie.

Kalibračný graf zobrazenia takto. Riešenie gemina albuminom prevod do skúmaviek v množstve od 0,01 na 0,1 g / l (z 0,2 na 2 ml). V týchto rúr, Ak množstvo roztoku menej 2 ml, pridať do 2 ml albumín. Potom pridajte na 1 ml fosfátového pufra izoosmoticheskogo. Odstreďte zmes na 1500 / Min, a potom Zmerajte optickú hustotu. Rozdiel medzi rozmery sa aplikuje do grafu, resp. počet gemina.

V normálnej krvnej plazmy gemal'bumin chýba. Zdá sa, v prípade intravaskulárnej hemolýzy, napr, Ak paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii alebo gemolizinovoj forma autoimunitná hemolytická anémia, rovnako ako v neprítomnosti gaptoglobina, Kedy heme viaže na albumín.

Hema skúšaní paroxizmalna noc gemoglobinurii

Hema hodnotenie založené na zníženie odporu červených krviniek u pacientov s PNH nižšie pH Streda v prítomnosti čerstvého séra komplementu.

Činidlá.

1. Roztok kyseliny chlorovodíkovej 0,2 n.
2. Roztok amoniaku 0,04 %.

Metóda.

Z Viedne sa 5- 6 ml krvi. Ako antikoagulans používané citranu sodného alebo oxalátu. Zároveň trvať 15-20 ml krvi od darcu z rovnakej skupiny. Oddelenie erytrocytov od krvnej plazme pacienta a darcu.

Darcu séra sa naleje na 0,5 ml v šiestich tubách, dvaja z nich dať na 20 min. vo vodnom kúpeli s teplotou 56 ° C pre inaktiváciu doplnku sérum, Ostatné štyri skúmavky sú ponechané pri izbovej teplote. Červených krviniek pacienta dvakrát prané izotoniceski roztoku chloridu sodného, potom suspenzirujut rovnakého roztoku v pomere 1:1.

Diagram štúdie sú uvedené v tabuľke.

Obsah každej skúmavky sa premieša, dať na vaše 1 h do termostatu pri teplote 37 ° C, a odstredí.

Pre idle vo vzorke 0,05 m červených krviniek pacienta a darcu sa pridáva samostatne na 0,55 ml izotonickým roztokom chloridu sodného.

Po odstredení sa dá odhadnúť stupeň hemolýzy tým oko. Kvantifikovať rozsah hemolýza v každej skúmavke pre 4,7 ml 0,04 % Roztok amoniaku 0,3 ml povrchovej vrstvy, ale v skúmavke s nečinnosti breakout — 0,3 ml referenčného séra.

Na identifikáciu 100 % hemolýza na 4,7 Pridať ml roztoku amoniaku 0,3 mL suspenzie erytrocytov (0,05 ml erytrocytov pacienta v 0,55 ml izotonickým roztokom chloridu sodného).

Absorbancia roztoku sa meria pri lekárskej kolorimetre a porovnať namerané hodnoty optickej hustoty roztokom amoniaku bez červených krviniek:

% hemolýza =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

keď E₁ -Optická hustota analyzovať sonda; IS₂-absorbancia slepej vzorky; IS₃-Optická hustota 100 % gemolizata.

Normálne, nie viac ako gemoliziruetsja 5 % erytrocytov.

Vzorka sa považuje za pozitívny Hema v prípade, Ak gemoliziruetsja viac 6 % erytrocytov.

V paroxizmalna noc gemoglobinurii a gemolizinovoj forma autoimunitná hemolytická anémia gemoliziruetsja niekedy až do 50-80 % erytrocytov. Týchto chorôb sa vyznačuje hemolýza len v prítomnosti sérum neinaktivirovannoj (-Č. 2). Ak inaktivácie séra nebráni hemolýza (-Č. 3), Môžeme predpokladať existenciu iné formy hemolytická anémia alebo chybu pri stanovení výskumných.

Zničenie červených krviniek, u pacientov s paroxyzmálna nočná hemoglobinúria Streda pri pH 6,5 vyžaduje povinná prítomnosť komplementu, obsiahnuté v čerstvého séra.

Saharoznaja skúška s paroxyzmálnej nočnej gemoglobinurii

Saharoznaja vzorka je založená na, aby červené krvinky u pacientov s paroxyzmálna nočná hemoglobinúria a gemolizinovoj forma autoimunitná hemolytická anémia zničili Solutions nízkej iónovej sily v prítomnosti komplementu.

Činidlá.

1. Roztok sacharózy: 9,42 sacharóza, rozpustené v 0,005 M fosfatnom medzipamäť; pH 6,2 (91 ml 0,005 M NaH₂PO₄ a 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Činidlo na určovanie koncentrácie hemoglobínu: 200 mg červených soli rozpustené v 1 l destilovanej vody, Tam pridať 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Metóda.

Krv v u pacienta z Viedne do dvoch skúmaviek je suché (8-10 ml) a s antikoagulantom (2- 3 ml). Ako antikoagulans použiť citrát sodný. Erytrocyty skúmavky na odber krvi s antikoagulantom dvakrát vyperte izotoniceski roztoku chloridu sodného. Po špinavých a supernatant extrakciu na 0,4 Pridať ml erytrocytov 0,25 ml izotonickým roztokom chloridu sodného.

Zároveň brať krv od darcu z rovnakej skupiny krvi do dvoch skúmaviek — s antikoagulantom (2-3 ml), Sa zaobchádza rovnakým spôsobom, ako krv pacienta, a suché (8- 10 ml) získanie séra. Po oddelení darcu sérum 0,5 ml je umiestnené na vodnom kúpeli pri teplote 56 ° C 30 min inaktiváciu komplementu. Darcu sérum by mal mať každodenné skúsenosti a udržať v chlade. Plán štúdie je uvedený v tabuľke.

Rúrky sú umiestnené v termostat na 30 min. teplota 37 ° C, a potom odstreďuje 10 min rýchlosť 2000 RPM a hodnotenie stupňa hemolýzy.

Ak to chcete urobiť, v skúmavke sa naleje na 3,4 ml činidla pre určovanie koncentrácie hemoglobínu a 0,6 na ml- sedimentov z každej skúmavky. Cez 10 min Zmerajte optickú hustotu roztoku do skúmavky s 540 NM na zdravie refraktometre (Spektrofotometer) alebo lekárskej kolorimetre (DEC fotokolorimetre-m) Keď zelená visor, porovnaním údajov získaných s optická hustota roztoku pre stanovenie hemoglobínu. Berie priemer dvoch čítaniach každú skúsenosť. Vypočíta sa podľa vzorca:

% hemolýza invitro =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

keď E₁ -Optická hustota roztoku v test tube č. 1; IS₅ -Optická hustota roztoku v test tube č. 5, potrebné vylúčiť sfarbenie sérum; IS₈ -Optická hustota roztoku v test tube č. 8, kde 100% hemolýza.

Cross-saharoznoj vzoriek (-Č. 2) 100%-th hemolýza invitro je vyšetrovaný číslo. 7.

Vyhodnotenie výsledkov.

Normálne in-vitro No. 1, obsahuje erytrocyty sondoval pacienta, hemolýza nepresahuje 2-3 %.

V paroxizmalna noc gemoglobinurii a gemolizinovoj forma autoimunitná hemolytická anémia (Aiga) Tento in vitro hemolýza presahuje 6 % V skúmavkách-No. 4, obsahom krvi pacienta a darcu sérum inaktivirovannuju, skúmavky # 5, obsahujúce sérum darcu a erytrocytov, a číslo 6, obsahujúce sérum namiesto izotonickým roztokom chloridu sodného – hemolýza nemá prekročiť 1-2 %.

Cross-saharoznaja konania (-Č. 2) Pri gemolizinovoj forme AIGA zvyčajne pozitívne (v prítomnosti hemolysins v sére), ale môže to byť negatívny. In vitro č. 3 (červených krviniek a séra pacienta) hemolýza pozoruje na APG, a v gemolizinovoj forme AIGA. Paroxizmalna noc gemoglobinurii maximálne hemolýza odhalená v normálnej saharoznoj vzorka (-Č. 1), menej výrazné – s vlastnú vzorku buniek pacienta (-Č. 3); Bez hemolýzy vo vzorke cross-saharoznoj (-Č. 2).

Pri gemolizinovoj forme AIGA najvýraznejšie hemolýza je zistená vo vzorke s vlastné Krvné sérum a erytrocyty práceneschopnosti (-Č. 3), trochu menej výrazné – invitro č. 1. In vitro č. 2 hemolýza je často pozorované, ale nedostatok nevylučuje formulár gemolizinovuju AIGA.