Anémia, spojené s nedostatkom kyseliny listovej

Nech už je dôvod listovej Nedostatok kyseliny anémia je charakterizovaná výskytom v megaloblasts kostnej drene, Vnútrodreňové zničenie erythrokaryocytes, patsitopeniey, Makrocytóza a hyperchromia červené krvinky a niekedy - duševné poruchy.

Folievaya (pteroilglutaminovaya) kyselina (vitamín B₉) Skladá sa z troch zložiek:

• pteridínu krúžok;
• P-aminobenzoová kyselina (dohromady tvoria kyselinu pteroievuyu);
• kyselina glutámová.

Molekulová hmotnosť kyseliny listovej - 441. Kyselina listová je aktívna vo forme derivátov kyseliny tetrahydrofolových. Obsah kyseliny listovej v rôznych formách v ľudskom tele, je asi 5 až 10 mg. Zásoby v rozpore s jeho vstupu do tela môžu byť vyčerpané v priebehu 4 mesiaca.

Denná potreba kyseliny listovej je 100-200 mikrogramov, Tehotenstvo, hemolytická anémia, zvyšuje mnohonásobne.

Celkové množstvo kyseliny listovej v potrave s plným výkonom 500-600 mikrogramov denne. Fola - foláty obsiahnutá v značnom množstve v pečeni, droždie, špenát, mäso. Viac 50 % kyselina listová, v potravinách, To môže byť zničený pri varení.

Kyselina listová je absorbovaná v hornej časti tenkého čreva. Schopnosť čriev absorbovať kyselinu listovú, je oveľa vyššia, než jeho dennej potreby.

Kyselina listová sa podieľa na syntéze pyrimidinových a purínových báz, spolu s methylcobalamin - syntézou uridinmonofosfata timidinm nofosfata. Fola koenzýmy Viac zapojiť v rade reakcií. Najmä, tetrahydrofolát sa podieľa na syntéze kyseliny glutámovej histidínu.

Etiológie a patogenézy anémia pri deficite kyseliny listovej

Nedostatok kyseliny listovej, ako aj deficit kobalamínu, To vedie k vývoju megaloblastickou anémiou.

Malabsorpcia folátu pozorované u jedincov, resekcia tenkého čreva, predovšetkým jejunum, rovnako ako v dlhodobé užívanie antikonvulzíva, ako difenylhydantoin (difenina) a fenobarbital (Luminale). Príjem kyseliny listovej je prerušené, keď je sprue a celiakia. Nedostatok kyseliny listovej, ako aj deficit kobalamínu, pozorovaná Syndróm slepej slučka. Popísaný zriedkavé prípady dedičných porúch kyseliny listovej transport cez črevnú stenu a do mozgovomiechového moku. Absorpcia ďalších látok, bez toho, aby utrpel.

Nedostatok kyseliny listovej u novorodencov pozorované u predčasne narodených detí, porušenie črevnej absorpcie, FED kozie mlieko, obsahujúce malé množstvo kyseliny listovej.

Významnou malabsorpcia kyseliny listovej sa môže vyskytnúť u pacientov, alkoholici.

Zvýšená spotreba kyseliny listovej v priebehu tehotenstva To môže viesť k nedostatku kyseliny listovej, Avšak, vo vyspelých krajinách dnes to je zriedkavé. Nedostatok kyseliny listovej u tehotných žien sa nachádza v nízkom výkone, prítomnosť hemolytická anémia, použitie pred tehotenstvom veľké množstvo alkoholických nápojov.

Klinické prejavy nedostatku kyseliny listovej

Nedostatok kyseliny listovej u detí a mladých žien. V rovnakej dobe, pacienti sťažujú na celkovú slabosť, závrat. Na rozdiel od deficitu kobalamínu boľavý jazyk zriedkavo pozorovaná. Parestézia a iné známky lanové myelosis chýba. Skléry často ikterichnost.

Na rozdiel od deficitu kobalamínu deficiencie kyseliny listovej, je len zriedka pozorovaná gistaminoupornaya Akhil, gastratrophia, aj keď zníženie žalúdočnej sekrécie, je často.

Pre nedostatok kyseliny listovej, ako aj pre nedostatok kobalamínu, charakterizované výskytom v makrocytózu periférnej krvi, megalocitov a megaloblasts, prítomnosť hyperchromický anémia, zníženie počtu retikulocytov, krvných doštičiek a leukopénia sa neutrofilním posunu doľava a doprava. V kostnej dreni - megaloblasts.

Zmeny v nervovom systéme sa líšia od prejavov na B₁₂-nedostatok anémia.

Preukázané, že osoby s epilepsiou, Nedostatok kyseliny listovej vedie k častým útokom, k ich väčšej závažnosti. To je dôležité najmä vzhľadom na skutočnosť,, že s antikonvulzíva môžu spôsobiť malabsorpcii folátov. Podľa literatúry, u jedincov s deficitom schizofrénie Kyselina listová vedie k zhoršeniu ochorenia, vážnejšie príznaky a menej účinná liečba.

Diferenciálnej diagnostika kobalamínu deficitu a kyseliny listovej

Pre diferenciálnu diagnostiku kobalamínu deficitu a kyseliny listovej sa používa Spôsob radioimmunoassay pre stanovenie kyseliny listovej v sére, a to najmä v erytrocytoch. Obsah kobalamínu je určená mikrobiologickú metódou. Ako skúšobný organizmus používané ako Streptococcus faecalis a Lactobacillis casei. Za normálnych okolností, obsah kyseliny listovej v krvnom sére rozsahy, Podľa autorov, použitie rôznych výskumných metód, z 3 na 25 ng / ml, a erytrocytov - od 100 na 425 ng / ml.

Pri nedostatku kyseliny listovej sa znižuje ako úroveň séra, a v erytrocytoch. Obsah kyseliny listovej u deficitom kolabaminov v krvnom sére často stúpa, a v erytrocytoch niekedy znížené, Zatiaľ čo pokles, zvyčajne, malé.

Pre diagnostiku nedostatku kyseliny listovej sa vzťahuje aj zaťaženie metóda histidín (15 g), potom definuje obsah kyseliny formiminglutaminovoj v moči. Bežne tvorí podstatnú časť kyseliny glutámovej histidín. Moču 1 je kyselina formiminglutaminovoj 18 mg. Pri nedostatku kyseliny listovej počas 8 h po zavedení jeho organizmus s moču je od 20 na 1500 mg kyseliny formiminglutaminovoj. Značný počet kyseliny formiminglutaminovoy vylúči v moči po podaní histidínu u osôb, neliečených metotrexátom. Na nedostatku kobalamínu, cirhóza pečene vylučovanie kyseliny zvyšuje formiminglutaminovoy, v menšej miere, než s deficitom kyseliny listovej. Normálna hladina močových Methylmalonová obsahu kyseliny zvyšuje formiminglutaminovoy histidín Kyselina po obdržaní dôkazy o nedostatku kyseliny listovej, namiesto kobalamínu.

Pomáha rozlíšiť tieto dva štáty a štúdium rádionuklidov. Na nedostatku kobalamínu, spojené s porušením sekrécie vnútornému faktoru, zhoršená absorpcia označeného kyanokobalínu, nedostatok kyseliny listovej, je správne absorbovaný.

Na nedostatku kyseliny listovej, jeho zavedenie do tela vedie k vyššiemu obsahu retikulocytov, vzhľadom k tomu, injekcií kyanokobalínu (deriváty) neúčinný. Listová Nedostatok kyseliny methylcobalamin zvyšuje hladinu retikulocytov.

Definovanie index segmentácia neutrofily

Spočítajte počet neutrofilov, s 4 segment a viac (Celkom 200 bunka). Určiť percento buniek, s 5 segmenty a viac, vztiahnuté na množstvo buniek, s 4 segment. Index je stanovuje podľa vzorca:

IS =(KS (5 a viac))/KS(4);

kde IC - index segmentácie;

KS (5 a viac) - Počet segmentových neutrofilov (na 200 bunka), v ktorom je počet segmentov sa rovná 5 alebo viac;

KS (4) - Počet segmentových neutrofilov, v ktorom je počet segmentov sa rovná 4.

Za normálnych okolností tento index rozsahy 2,5 na 25 %. Kde, ak prevýši 30 % (oscilácie 120%), Môžete hovoriť o hypersegmentace neutrofilov. Uviedol, nedostatok kyseliny listovej, metilkoʙalamina, a urémia.

Stanovenie kyseliny methylmalonové v moči u Giordio a Plaud

Činidlá.

1. Anex Dowex-ZX4 (Formulár chlorid, 200-400 Mesh). Živica bola premytá piatimi objemami destilovanej vody 3 doba, sa suspenduje v dvoch objemoch destilovanej vody a uložené v tmavom miske pri teplote 4 ° C.

2. Roztok p-nitroanilín 0,075 % pripraví rozpustením 37,5 mg činidlo 500 ml 0,2 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Skladujte v tmavom hrnci, To zostala stabilná po dobu niekoľkých mesiacov pri teplote miestnosti.

3.Acetátový pufer (pH 4,3) z 1 M octanu sodného a 1 M roztok kyseliny octovej.

4.Diazoreaktiv: 4 ml 0,5 % dusičnanu sodného, ​​roztok sa zmieša s 15 ml para-nitroanilín. Zmes sa umiestni v chladničke pri 4 ° C a bol pridaný ochladený roztok 4 ml 0,2 M octan sodný. Reagent stabilitu pri teplotách 4 ° C počas jedného dňa.

5.Normálny 0,05 M roztok kyseliny methylmalonové: 295 mg kyseliny methylmalonové sa rozpustí v 50 ml vody.

Metóda

Moč sa zhromažďovala do sklenenej fľaše a zmrazený až do štúdie. Pre štúdium nabíjacie časť moču (20- 25 ml), rozmrazené, tsentrifugiruyut, a supernatant bol zhromaždený pomocou slabý roztok hydroxidu sodného alebo kyseliny chlorovodíkovej na úpravu pH 6,5.

Chromatografická výška stĺpca 20 cm a priemer 1 cm bola naplnená živicou Dowex-ZX4. Živice vrstva by mala byť v rámci 3 cm. Prechádza živicu 5 ml moču, premyje sa destilovanou vodou (2 × 50 ml v množstve nie viac ako 15 ml 1 z). Kyseliny methylmalonové môže byť vylúhovaný z živice 20 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Ďalšie 2 ml eluátu sa zmieša s 3 ml 1 M acetátový pufer pH 4,3 v skúmavke so sklenenou zátkou (15×2cm). K zmesi sa pridá 3 ml studený diazoreaktiva, vyznačujúci sa tým, pH sa zvýši na 4,0. Zmes sa zahrieva na vodnom kúpeli pri teplote 94 ° C. 3 min a 2 ml 3 M roztoku hydroxidu sodného. Trubica bola potom odstránená z vodného kúpeľa, uzavrie a obsah bol miešaný. Reakčná zmes sa schladí na teplotu miestnosti za 10 min a pri fotometriruyut 620 nm v kyvete sa dĺžka dráhy 1 cm.

Ako kontrola, zmes, skladajúci sa z 2 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej, 3 ml a diazoreaktiva 3 ml acetátového pufra. Štandardný roztok kyseliny methylmalonové sa skladá z rovnakých komponentov a 0,02 ml 0,05 M roztok kyseliny methylmalonové. Absorbancie týchto roztokov boli merané za rovnakých podmienok.

Obsah kyseliny methylmalonové (mg) na jednotku objemu moču (1 l) definovaná vzorcom:

(IS_Vzorka-IS_ovládanie)/(IS_štandard-IS_ovládanie)*A *((1000*T)/M)

kde E - absorbancie rôznych vzoriek;

A - množstvo kyseliny methylmalonové v štandardnej skúmavky, ml;

1000 - Množstvo moču, prijatá pre výskum, ml;

T - množstvo kyseliny chlorovodíkovej, považovaná za vymytie, ml;

M - počet eluáte, prijatá pre výskum, ml.

Za vyššie uvedených podmienok, vzorec možno zjednodušiť takto::

(IS_Vzorka-IS_ovládanie)/(IS_štandard-IS_ovládanie)*236

Kde, keď je množstvo kyseliny methylmalonové v moči vyššie ako 300 mg / l, by mali byť znovu zmiešaný s acetátu vyrovnávacej eluát a diazoreaktivom, ale namiesto toho 2 ml eluátu je účelné, aby sa 4- 10 krát nižšia a doplňte na objem 2 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Pri výpočte by malo brať do úvahy riedenie.

Za normálnych okolností denne s výkonom moču 0,6-4,7 mg kyseliny methylmalonové. Pri nedostatku kobalamínu denne vylučovanie kyseliny metylmalónovej siahne 294 mg. Za normálnych okolností, recepcia 10 g valín nezvýši klírens kyseliny methylmalonové, nedostatok kobalamín zvyšuje vylučovanie kyseliny methylmalonové.

Stanovenie kyseliny methylmalonové v moči u Green

Činidlá.

1. Éter.
2. Etanol.
3. Roztok kyseliny chlorovodíkovej 0,1 M.
4. Síran amónny.
5. Silná základňa živice deatsidit FF (200 pletivo, Formulár chlorid).
6. Roztok dusičnanu sodného 0,5 % (hmotnosť / objem).
7. Roztok p-nitroanilín (750 mg rozpustí v 1 l 0,2 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej).
8. Octan sodný 0,2 M.
9. Acetátový pufer 1 M, pH 4,3: zmiešaný 1 M roztoku octanu sodného a 1 M roztok kyseliny octovej v pomere 16,35:33,9.
10. Vodný roztok hydroxidu sodného 3 M.

A. Štandardný roztok kyseliny methylmalonové: 100 mg rozpustí v 100 ml vody, uchovávaný v chladničke.

B. Pracovný štandardný kyseliny metylmalónovej: Štandardný roztok riedi 20 doba 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej (1 ml štandard a 19 ml kyseliny chlorovodíkovej). Toto množstvo ekvivalentu kyseliny methylmalonové 100 mg kyseliny methylmalonové 1 skúšobné podmienky l moču.

Na prípravu zmesového diazoreaktiva 4 ml 0,5 % dusičnanu sodného a 15 ml para-nitroanilín. Zmes sa umiestni do ľadového kúpeľa a pridajte 4 ml 0,2 M octan sodný.

Metóda.

Moč sa zhromažďovala po dobu jedného dňa, merané jeho objemu a 10 ml podkislyayut 1 M roztoku kyseliny sírovej na pH 2,0 alebo mierne pod. Bol pridaný síran amónny až do nasýtenia. Zmes sa umiestni do oddeľovacieho lievika a extrahuje sa trikrát éterom a etanolu v pomere 3:1. Aby sa zabránilo tvorbe emulzie extrakčného zmesi použité v prebytku.

Extrakt sa nechá prejsť malým stĺpcovou chromatografiou (1 – 1,5 cm priemer), dokončený 5 ml živice. Kolóna bola premytá 50 ml destilovanej vody. Kyselina methylmalonové vymýva 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Po elúciu vybraný 2 ml eluátu, W sa pridá ml acetátového pufra, a 3 ml diazoreaktiva.

Po zmiešaní sa skúmavka bola umiestnená do vodného kúpeľa pri teplote 95 ° C 3 m. Potom sa pridá 2 ml 3 M hydroxidu sodného a raz uzatvorenej trubice zátkou, aby sa minimalizovalo styku so vzduchom. Po ochladení sa absorbancia bola meraná pri vlnovej dĺžke 620 im. U polotovare namiesto použitia eluátu 2 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej, a pre štandardný roztok - 2 ml pracovné normy.