Hemoglobinúria paroxística noturna – Doença Marchiafava Michele

Hemoglobinúria paroxística noturna relativamente raramente é encontrada a forma adquirida de anemia hemolítica, conectado com a mudança da estrutura dos eritrócitos, Plaquetas e granulócitos neutrófilos. Fluxos com sinais de hemólise intravascular, onde há Hemoglobinúria, gemosiderinuriya, aumento do nível de hemoglobina livre de plasma. A doença é muitas vezes complicada por veias periféricas e órgãos internos de trombose vascular.

Etiologia e patogênese da paroxística noturna gemoglobinurii

A primeira descrição da doença foi dado em 1882 g. Foi descrito em mais detalhes em 1928 g.

O nome comum da doença é hemoglobinúria paroxística noturna (APG), No entanto, na verdade corresponde a doença pouco, Porque não há nenhum presente Hemoglobinúria Paroxística é observada nem sempre.

Hemólise intravascular com gemosiderinuriej além disso APG é observada em muitas formas de anemia hemolítica autoimune, como com calor, e com anticorpos frios, especialmente quando formulários com calor gemolizinami, bem como em algumas formas da anemia hemolítica hereditária, relacionados à violação da estrutura da membrana dos eritrócitos.

Doença Markiafavy-Micheli observada em diferentes idades. A razão para a destruição aumentada das células vermelhas do sangue é que as hemácias se defeito.

Células vermelhas do sangue de pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna, Como dito acima, komplementom facilmente recolher quando criar condições ideais para a sua validade, ou quando soro de acidificação, ou quando você aumentar a concentração de complemento ao redor dos eritrócitos, criando íons de baixa concentração em saharoznoj quarta-feira. Células vermelhas do sangue dos pacientes com HPN aumentaram a sensibilidade aos efeitos de anticorpos como aglutininas, e, especialmente, hemolisinas.

Quando o PNG afeta não só células vermelhas do sangue, Mas, leucócitos e plaquetas do paciente. Plaquetas e leucócitos de pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna têm uma sensibilidade aumentada aos efeitos do complemento como quando soro de acidificação, e quarta-feira com baixa força iônica de sacarose. Eles são muitas vezes mais sensíveis aos efeitos da izoagglûtininov, de leucócitos e plaquetas do doador. Assim, plaquetas e glóbulos brancos têm o mesmo defeito na membrana, isso e células vermelhas do sangue.

Detecção de anticorpos na superfície das células vermelhas do sangue, leucócitos e plaquetas e, portanto, para provar a filiação da APG a autoagressivnyh grupo de doenças não pode ser os métodos mais sensíveis.

Lá é convincente evidência da existência de duas populações distintas de APG em eritrócitos. As células mais resistentes em uma pessoa saudável é um reticulócito APG são mais frágeis. Isto sugere que, essa população patológica glóbulos vermelhos simplesmente não sobreviveu à maturação, e eritrócitos maduros mais velhos se relacionam com a população saudável ou quase saudável.

EM 1970 no estudo de eritrócitos Latina, PNG afetado, Foi descoberto, que eles contêm., tal como acontece com as mulatas saudável, eletroforética variantes de dois normal Sr. 6-FD; Variante a, comum entre os povos da África, e a opção em, típico da população da Europa. Depois de passar a hemólise virou, que anormal de glóbulos vermelhos contêm uma única opção Mr. 6-FD, e hemácias normais — ambas as variantes eletroforética de g-6-PD. Conseqüentemente, lisados hemácias são descendentes de uma única célula.

Este fato com grande precisão indica a presença de duas populações de eritrócitos, diferente não apenas funcionalmente, Como, por exemplo, em mikrosferocitoze, Mas também pela origem: em outras palavras, Confirma a presença de células patológicas clone, t. é. mutação somática. Identidade das lesões de membrana eritrocitária, neutrófilos e plaquetas sugere que, Essa informação patológica provavelmente Obtém a gaiola, próximo para haste, t. é. o antecessor celular mielopoèza. Blastomnyj crescimento para PNG não é específico. Descreva apenas casos isolados de rápido desenvolvimento da leucemia em um plano de fundo PNG. Não obstante, Podemos supor, que o PNG é uma variante do tumor benigno do sistema sanguíneo, por um longo tempo, produzindo a não proliferação celular do tumor, característica para outras formas de leucemia.

Mecanismo de desenvolvimento Komplementčuvstvitel′nosti em PNG enquanto incerto.

Significativos alterações na atividade das enzimas da glicólise e pentozno-fosfato do ciclo não.

Quando o PNG reduzida atividade da acetilcolinesterase de eritrócitos, muito provavelmente devido ao rompimento da estrutura das membranas de células vermelhas do sangue, Porque a enzima está localizada na superfície da membrana e facilmente quebrado quando sua derrota. Conhecido, que o uso de inibidores da acetilcolinesterase não tem efeito na sobrevivência de eritrócitos. No entanto, a queda da atividade da acetilcolinesterase é também observada em outras formas de anemia hemolítica, Portanto, não pode explicar o fenômeno da komplementčuvstvi aumento- LEMs.

Há evidências, evidências de aumento do número de ácidos graxos insaturados, incluído na estrutura dos fosfolípidos, membrana de eritrócitos. Há uma possibilidade, Isso muda em lipídios — é apenas um reflexo de outras alterações na estrutura das membranas de células vermelhas do sangue. No estudo de proteínas de membrana de eritrócitos de pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna em eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de sódio dodecilsulfata definido, que, em um número de fracções de teor de proteínas é significativamente diferente do controle.

O principal papel na patogênese de complicações trombóticas em APG relegado vnutrisosudistomu degradação de células vermelhas do sangue e coagulação fatores de estímulo, lançado de eritrócitos durante sua dissolução. Quando APG destruído principalmente reticulócitos, pode ser, Isso deve explicar a freqüência de complicações trombóticas nesta doença, ao contrário de outras formas de anemias hemolítica, acompanhado por uma hemólise intravascular pronunciado.

Manifestações clínicas paroxística noturna gemoglobinurii

A doença muitas vezes começa com um gemido. Os pacientes queixam-se de fraqueza, mal-estar, tontura. Às vezes notas subicteric escleral. Muitas vezes as primeiras queixas de dor de cabeça, dor de estômago de localização de vários. Uma tendência para a formação de trombos aumento faz com que o paciente a procurar um médico. Hemoglobinúria bastante rara é o primeiro sintoma da doença e alguns pacientes do APG podem estar ausentes em todos os. Em alguns casos, ele aparece pela primeira vez através de 2-3 anos e até mesmo através de 10 anos após o início da doença.

Uma das características do PNG-crises de dor abdominal. Localização de la pode ser muito diferente. Fora do período de dor de estômago kriza, normalmente, não observada. Muitas vezes junta-se o vômito. Provavelmente, dor abdominal em pacientes com HPN está associado com os vasos mesentéricos TVP.

Trombose vascular periférica (mais frequentemente do que não — veias das extremidades superiores e inferiores, pelo menos-dos vasos renais) também sintoma característico paroxística noturna gemoglobinurii. Em 12 % Pacientes APG observados throm. Complicações tromboembólicas são a causa mais freqüente de morte nesta doença.

Quando um objetivo estudar do paciente muitas vezes notável palidez com um leve toque de želtušnym. Muitas vezes há inchaço facial, por vezes excessiva plenitude. Talvez um ligeiro aumento no baço e no fígado, Enquanto não é típico de APG.

Para paroxística noturna gemoglobinurii é caracterizada por sinais de hemólise intravascular, o mais importante dos quais é a hemoglobina livre do plasma aumentado. Este tópico periodicamente quase todos os pacientes do APG. No entanto, o grau de aumento da hemoglobina livre de plasma varia e depende, em que período de estudo de doença. Durante a crise de esta proporção aumenta significativamente, Também tem havido um aumento no número de plasma metal′bumina.

Nível de hemoglobina livre do plasma depende do grau de hemólise no momento, conteúdo gaptoglobina, grau de filtração de hemoglobina na urina e a velocidade do complexo hemoglobina destruição — haptoglobina. No caso de um pequeno grau de hemólise gratuito hemoglobina em níveis de plasma não será suficiente para filtrá-la através do filtro de rim. Portanto, hemoglobinúria não é doença de sintoma obrigatório. Quando passando através do nefronov de canalículos secretado pela hemoglobina é parcialmente destruída e depositados no epitélio tubular. Esta é a razão da hemossiderina urina.

Fornecido com hemossiderina urina na esmagadora maioria dos pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna. Gemosiderinuriâ às vezes não aparece imediatamente. Este é um importante, Mas não específicas para PNG sinal de doença.

Parâmetros de laboratório em paroxizmalna noite gemoglobinurii

Hemoglobina em pacientes com HPN varia de 1,86 — 3,1 mmol / L (30-50 G / l) e ainda mais baixa ao normal durante remissões.

O número de eritrócitos em pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna diminui o nível de redução de hemoglobina. Um período mais longo de indicador de cor permanece próximo unidade. Onde, Se o paciente perde uma quantidade significativa de ferro com urina sob a forma de hemossiderina e hemoglobina, os níveis de ferro está diminuindo gradualmente. Indicador de cor baixa é observada em aproximadamente metade dos pacientes. Alguns deles têm elevados níveis de hemoglobina (P), especialmente no período de exacerbação.

Uma grande parte dos pacientes conteúdo aumento de reticulócitos, Mas a relativamente baixa (2- 4 %). O número de leucócitos em PNG na maioria dos casos reduzido. Em muitos pacientes é de 1,5-3 gramas 1 eu, Mas às vezes reduzida a 0,7-0,8 g 1 eu. Leucopenia, normalmente, Há, reduzindo o número de granulócitos neutrófilos. Às vezes, sangue no APG normal ou alta — até 10-11 g 1 eu.

Quando APG reduz a atividade fagocítica dos neutrófilos de granulócitos.

Trombocitopenia também comumente visto em PNG, No entanto, o estado funcional das plaquetas no normal. Provavelmente, Isto explica a raridade de complicações hemorrágicas quando esta doença, Embora às vezes contagem de plaquetas é reduzida significativamente — até 10-20 g 1 eu. Geralmente em plaquetas de pacientes mais 50-100 g 1 eu. Contagem de plaquetas normal não exclui o diagnóstico de paroxística noturna gemoglobinurii.

No estudo da medula óssea sintomas detectados, principalmente a característica de anemia hemolítica é uma hematopoiese germe de irritação vermelha no mielokariocitov número normal. Em alguns pacientes tem uma ligeira redução no número de megacariócito.

O nível de ferro sérico em PNG Ele depende da fase da doença, grau de hemólise intravascular e a atividade de sangue. Onde, Se os pacientes têm Hemoglobinúria constante ou freqüente, bem como a constante gemosiderinuriâ, o conteúdo de ferro no corpo, e, portanto, e diminui no soro, às vezes muito significativamente. Às vezes PNG começa com sinais de hipoplasia do. Ferro lojas no corpo do paciente dependem da APG, um lado, da perda de ferro na urina, e, por outro lado, a intensidade da eritropoiese. Portanto, você não pode levar ferro deficiência diagnóstico sinal paroxística noturna gemoglobinurii.

Nível de bilirrubina de soro em PNG na maioria dos casos, fora de foco aumentado ou normal, principalmente através de indiretas. O teor médio de bilirrubina é 22-28 μmol/l. Deve ser tido em conta, que quando hemoglobina hemoglobina formado decaimento complexo de vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj, Quem e eventualmente também rompe com a formação de bilirrubina.

Alguns pacientes com doença de hemoglobinúria paroxística noturna começa com quadros de anemia aplástica.

Diagnóstico de paroxística noturna gemoglobinurii

Se paroxística noturna gemoglobinurii estrutura de eritrócitos está quebrada, como refletido em um alto grau de sensibilidade para os efeitos do seu complemento.. Esta hipersensibilidade é detectada utilizando amostras ou Hema, ou mais sensíveis saharoznoj amostras. Em alguns casos, no entanto,, particularmente na forma de gemolizinovoj de anemia hemolítica auto-imune, amostra de saharoznaâ pode dar um resultado falso-positivo. Gemoliziny são fixos na superfície de seus próprios glóbulos vermelhos e na presença de complemento em saharoznoj quarta-feira destruiu sua, Enquanto o PNG é caracterizada pela destruição das células komplementom sem exposição aos anticorpos.

Para excluir o formulário gemolizinovoj anemia hemolítica auto-imune estudo recomendado hemolisinas conforme descrito acima e usando Cruz-saharoznoj com amostras de soro de eritrócitos de odnogruppnogo o paciente e do doador, e não vice-versa, Como é habitual. Quando a amostra direta APG é positiva, e Cruz-negativo. Quando gemolizinovoj forma AIGA pode ocorrer como um positivo, e Cruz-amostra negativa. Nesses casos, é aconselhável usar as terceira opção saharoznoj amostras — usando ambos soro, e células vermelhas do sangue do paciente. O grau de hemólise nesta variante o mínimo quando PNG e máxima gemolizinovoj forma de AIGA. Explicar que tal resultado só pode ser anticorpos altamente específicos do soro do paciente gemolizinovoj formulário de anemia hemolítica auto-imune ao antígeno, disponível em grandes quantidades nas hemácias de doentes, do que nas hemácias do doador. Saharoznaâ amostra positiva direto desses pacientes está associado, provavelmente, com a presença de eritrócitos fixados anticorpos.

Deteção de hemolisinas método agregatgemagglûtinacii e outro ajuda colocar o diagnóstico certo. Não pode ser usado como um soro de pacientes, Como é o caso de gemolizina resultado de conteúdo não pode ser ložnopoložitel′nym. Um resultado negativo pode ocorrer, Se a fonte usa o soro complemento APG ou cirrose hepática de soro, Artrite reumatóide, Lúpus eritematoso sistêmico e outras doenças, em qual complemento nível diminui. Saharoznaâ que amostra e amostra Hema torna-se menos pronunciada, Se você está tomando sangue de um paciente, como a anticoagulante heparina é usada, ao invés de citrato de sódio. Depois da intensidade da crise hemolítica Hema e saharoznoj amostras de amostras é reduzido, Mas eles não se tornam negativos.

A definição de hemoglobina livre plasma no método de modificação do Bing Derviz e Bâlko com paroxística noturna gemoglobinurii

O método baseia-se na capacidade de hemoglobina que reagem com ácido-benzidina quarta-feira, na presença de peróxido de hidrogênio com a formação de coloração verde, primeiro rolamento em azul, e então em um vermelho-arroxeadas. A intensidade é proporcional ao número de hemoglobina.

Reagentes.

1. O tampão de acetato 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g de acetato de sódio dissolvido em 1 l de água (0,2 Solução M de); em um outro bulbo de medição Cook 1 eu 0,2 Solução de ácido uksousnokisloy M; misto 480 ml não. 1 e 520 ml não. 2.
2. Peróxido de hidrogênio 0,3 % solução (Prepare-se antes de usar, criando uma solução em 100 Tempo).
3. Solânokislyj benzidina 0,1 % solução: 50 benzidina de solânokislogo mg dissolvida em 35-40 ml de tampão de acetato, aquecer a solução para 80 ° C em banho-maria e após arrefecimento, trazer o buffer de acetatnym para 50 ml.

Balão de filtro e armazenar no escuro à temperatura não superior 7 dias. Reagente amarelada é inadequado, Potemnenii rápido, você deve perekristallizovat′ benzidina do álcool.

Método.

Sangue para estudos de agulha seca de veias em um tubo de silikonirovannuû, contém qualquer anticoagulante. Sangue com anticoagulante centrifugado sem mais 10 minutos a 1500 / Min. Após a separação de seu plasma Centrifugue novamente 10 minutos a 8000 RPM para deposição de leucócitos.

No tubo de teste está cheia. 4 ml de tampão de acetato, 2 ml de peróxido de hidrogênio, 2 benzidina ml e 0,04 ml de soro teste é misturado e deixar decantar 3 m, em seguida, despeje no comprimento do percurso óptico Cuvette 1 Ver e fotometriruût contra uma solução de compensação no visor verde. A intensidade da coloração azul aumenta durante 4-5 minutos, Portanto, a medição de repetir 3 - 5 vezes seguidas e gravar as leituras máximos. Após 5-6 minutos para colorir o soro torna-se violeta-marrom matiz, e o valor de densidade óptica começa a diminuir. Dois identificados resultados máximos da densidade óptica do médium é tomada.

Solução de compensação, consiste em 6 ml de tampão de acetato, 8 ml de peróxido de hidrogênio, 3 benzidina ml e 0,06 ml de solução de cloreto de sódio isotónica, Prepare-se ao mesmo tempo com.

Exposição da curva de calibração em uma solução de hemoglobina. No sangue, tomadas para solução de hemoglobina, medir o seu conteúdo (no kolorimetre médico ou médica refraktometre). Preparar uma solução de concentração de hemoglobina 1 g / l, de la preparar soluções de concentração mais baixa: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 e 0,2 g / l. Cada solução resultante adicionar 0,04 ml de uma mistura 4 ml de tampão de acetato, 2 benzidina ml e 2 ml de peróxido de hidrogênio.

A principal solução gemolizata (1 g / l) para a calibração curva deve ser armazenada em tempo frio, e trabalhando com concentrações inferiores de soluções deve ser preparada imediatamente antes do exame.

Normalmente, no 1 litros de plasma sangüíneo contém 0,0005 mmol / L (0,01-0,04 G) Hemoglobina.

Definição de urina de hemossiderina com paroxística noturna gemoglobinurii

A degradação da hemoglobina é adsorvido de epitélio tubular renal de ferro e é parte de hemossiderina. Sluŝennye células do epitélio tubular renal nestes casos contenham grãos de hemossiderina.

Um estudo cuidadoso de sedimento de urina depois de hemossiderina grão de centrifugação visível e sem coloração especial. No entanto, eles se destacam mais claramente quando colorindo Método Perlsa.

Método.

Depois da centrifugação a camada superior de urina chupado, a corrente de ar adicionar solução de svejeprigotovlenny 1 % Amarelo de sal do sangue e 1 % ácido clorídrico (Misture quantidades iguais de 2 % solução de ácido clorídrico e sal sangue amarelo). Depois 10 minutos após a mistura, a mistura é centrifugada e o sedimento está olhando. Hemossiderina grãos de coloração azul.

Determinação de plasma metgemal′bumina método espectrofotométrico

Reagentes.

1. Izoosmotičeskij de tampão de fosfato (pH 7,4): misto 18 ml 0.15 Digidrofosfata de sódio solução M (24,4 g YaN2R04 na 1 l de água) e 82 ml 0,15 Hidrogênio de sódio solução M (21,3 g NaH₂APÓS₄ em 1 l de água).
2. Bissulfito de sódio.
3. Hidróxido de sódio 1 M.
4. Solução de albumina de soro humano (40 g / l).
5. Solução gemina (5 mg / 100 ml); Prepara-se imediatamente pela dissolução de gemina em pequenas quantidades de soda cáustica, e depois: trazê-lo até a quantidade necessária de solução de albumina de soro.

Método.

K 2 ml de soro ou plasma de sangue é adicionado 1 ml de solução de izoosmotičeskogo zabuferernogo, pH 7,4. A mistura é centrifugada 30 minutos a 1200-1500 rpm. Determinar a densidade óptica, a 569 nm. Então, se diluídos plasma é colocado em um tubo de ensaio e adicionar aproximadamente 5 mg secas sulfato hidratado de sódio. Através Dos 5 min, repetidamente, medir a densidade óptica no mesmo comprimento de onda. A diferença entre a densidade óptica de dois valores corresponde a densidade óptica do metgemal′bumina. Concentração de Metgemal′bumina determinada pela programação de calibração.

Gráfico de calibração exibição como segue. Transferência de albuminom de gemina solução nos tubos em quantidade de 0,01 para 0,1 g / l (de 0,2 para 2 ml). Esses tubos, onde a quantidade de solução menos 2 ml, adicionar até 2 albumina ml. Em seguida, adicione em 1 ml izoosmotičeskogo de tampão de fosfato. Centrifugue a mistura no 1500 / Min, e em seguida medir a densidade óptica. A diferença entre as dimensões é aplicada ao gráfico, respectivamente número de gemina.

No plasma de sangue normal gemal′bumin está faltando. Parece que no caso de hemólise intravascular, por exemplo, Se forma paroxística noturna de gemoglobinurii ou gemolizinovoj de anemia hemolítica auto-imune, bem como em ausência de gaptoglobina, Quando hemo vincula a albumina.

Hema julgamento no paroxizmalna noite gemoglobinurii

Hema julgamento baseado em diminuir a resistência das células vermelhas do sangue de pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna para pH inferior a quarta-feira na presença de soro fresco de complemento.

Reagentes.

1. Uma solução de ácido clorídrico 0,2 n.
2. Solução de amoníaco 0,04 %.

Método.

De Viena tomar 5- 6 ml de sangue. Como anticoagulante usado citrato de sódio ou oxalato. Ao mesmo tempo levar 15-20 ml de sangue do doador do mesmo grupo. Separar os glóbulos vermelhos do plasma sanguíneo do paciente e do doador.

Soro do doador é derramado 0,5 ml em tubos de seis, Ponha os dois 20 min em um banho de água com uma temperatura de 56 ° C para inativar o complemento de soro, os outros quatro tubos de ensaio são deixados à temperatura ambiente. Vermelho sangue células do paciente duas vezes lavado izotoniceski solução de cloreto de sódio, Então suspenziruût a mesma solução na proporção 1:1.

Diagrama do estudo são apresentados na tabela.

Mistura o conteúdo de cada tubo de ensaio, Coloque sua 1 h no termostato à temperatura 37 ° C, e então centrifugado.

Para idle amostrados 0,05 m células vermelhas do sangue do paciente e do doador é adicionado separadamente para o 0,55 ml de solução de cloreto de sódio isotónica.

Após a centrifugação, o grau de hemólise pode ser estimado pelo olho. Para quantificar o grau de hemólise em cada tubo de 4,7 ml 0,04 % Adicionar a solução de amoníaco 0,3 camada de superfície do ml, Mas o tubo de ensaio com fuga ociosa — 0,3 ml do soro de referência.

Para identificar 100 % hemólise de 4,7 Adicionar o ml de solução de amoníaco 0,3 mL de suspensão de eritrócitos (0,05 paciente de eritrócitos ml em 0,55 ml de solução de cloreto de sódio isotónica).

Densidade óptica da solução é medida na kolorimetre médica e comparar as leituras com solução de amônia densidade óptica sem glóbulos vermelhos:

% hemólise =((É₁-É₂)/É₃)*100;

onde E₁ -densidade óptica de analisar a sonda; É₂-amostra em branco de densidade óptica; É₃-densidade óptica 100 % gemolizata.

Normalmente, não mais do que gemoliziruetsâ 5 % eritrócito.

A amostra é considerada positiva a Hema em caso, Se gemoliziruetsâ mais 6 % eritrócito.

Em paroxizmalna noite gemoglobinurii e gemolizinovoj forma de anemia hemolítica auto-imune gemoliziruetsâ às vezes até 50-80 % eritrócito. Para estas doenças são caracterizadas por hemólise apenas na presença de soro neinaktivirovannoj (-Não. 2). Se a inativação do soro não impede a hemólise (-Não. 3), Podemos supor a existência de outras formas de anemia hemolítica ou um erro na configuração de pesquisa.

Para a destruição das células vermelhas do sangue de pacientes com hemoglobinúria paroxística noturna quarta-feira no pH 6,5 requer a presença obrigatória do complemento, contido no soro fresco.

Teste de Saharoznaâ com paroxística noturna gemoglobinurii

Baseia-Saharoznaâ exemplo a, que células vermelhas do sangue de pacientes com forma paroxística noturna de Hemoglobinúria e gemolizinovoj de anemia hemolítica auto-imune são destruídas em soluções de baixa força iônica na presença de complemento.

Reagentes.

1. Solução de sacarose: 9,42 sacarose dissolvida em 0,005 Tampão de fosfatnom M; pH 6,2 (91 ml 0,005 NaH M₂APÓS₄ e 9 ml 0,005 M at₂HPO₄).
2. Reagente para determinação da concentração de hemoglobina: 200 sal de sangue vermelho mg dissolvido em 1 água destilada de l, Lá adicionar 0,5 atsetontsiangidrina ml.

Método.

Sangue em um paciente leva de Viena para dois tubos está seco (8-10 ml) e com anticoagulante (2- 3 ml). Como uso de anticoagulante citrato de sódio. Hemácias de tubos de colheita de sangue com anticoagulante lavam duas vezes izotoniceski solução de cloreto de sódio. Após a extração de branqueamento de capitais e sobrenadante para 0,4 eritrócitos ml adicionar 0,25 ml de solução de cloreto de sódio isotónica.

Ao mesmo tempo a tirar sangue de um doador do mesmo grupo de sangue em dois tubos — com anticoagulante (2-3 ml), Trata-se da mesma forma, como o sangue do paciente, e seco (8- 10 ml) para obter o soro. Após a separação do soro do doador 0,5 ml que é colocado em um banho de água a uma temperatura 56 ° C 30 min para inactivação do complemento. Soro do doador deve levar a experiência diária e manter no frio. Esquema de estudo é dado na tabela.

Os tubos são colocados no termostato na 30 minutos a 37 ° C, e então centrifugar para 10 minutos a 2000 rpm e avaliar o grau de hemólise.

Para fazer isso, o tubo de ensaio é derramado 3,4 ml de reagente para a determinação da concentração de hemoglobina e 0,6 ml na- sedimentos de cada tubos de ensaio. Através Dos 10 min medir a densidade óptica da solução em tubos com 540 NM na saúde refraktometre (Espectrofotómetro) ou kolorimetre médica (DEC fotokolorimetre-m) Quando um verde viseira, comparando os dados obtidos com a solução de densidade óptica para determinação da hemoglobina. Leva a média das duas leituras de cada experiência. O cálculo é feito de acordo com a fórmula:

% hemólise in vitro =((É₁-É₅)/(É₈-É₅))*100

onde E₁ -densidade óptica da solução em um teste de tubo não. 1; É₅ -densidade óptica da solução em um teste de tubo não. 5, necessário excluir o soro para colorir; É₈ -densidade óptica da solução em um teste de tubo não. 8, onde 100% hemólise.

Para amostras de cruz-saharoznoj (-Não. 2) 100%-hemólise de th in vitro é investigado não. 7.

Avaliação dos resultados.

In vitro normal não. 1, contém células vermelhas sondou o paciente, hemólise não ultrapasse 2-3 %.

Na paroxizmalna noite gemoglobinurii e gemolizinovoj forma de anemia hemolítica auto-imune (AIGA) neste vitro hemólise excede 6 % Em tubos de ensaio-não. 4, contendo o sangue do paciente e inaktivirovannuû de soro do doador, tubo de ensaio # 5, contendo hemácias e doador de soro, e Número 6, contendo soro em vez de solução isotônica de cloreto de sódio — hemólise não deve exceder 1-2 %.

Julgamento de cruz-saharoznaâ (-Não. 2) Quando gemolizinovoj a forma da AIGA geralmente positivo (na presença de hemolisinas no soro), Mas pode ser negativo. Não in vitro. 3 (células vermelhas do sangue e o soro do paciente) hemólise, como observado no APG, e em gemolizinovoj a forma da AIGA. Em paroxizmalna hemólise máxima de noite gemoglobinurii é detectado na amostra normal saharoznoj (-Não. 1), menos pronunciado — com sua própria paciente de célula de amostra (-Não. 3); Sem hemólise na amostra da Cruz-saharoznoj (-Não. 2).

Quando gemolizinovoj a forma da AIGA mais pronunciado a hemólise é detectada em uma amostra com seu próprio sangue soro e eritrócitos do doente (-Não. 3), pouco menos pronunciada — não in vitro. 1. Não in vitro. 2 hemólise é observada com freqüência, Mas a sua falta não exclui a forma gemolizinovuû AIGA.