O estudo de coagulação do sangue

Métodos para o estudo do sistema de coagulação de sangue incluem os seguintes grupos:

1. Indicativo (geral), dando uma idéia sobre o estado de toda a cascata de coagulação como um todo e seus estágios individuais (inscrição pode ser feita visualmente ou por dispositivos individuais - koagulografa, tromboelastografia e outros.);
2. diferenciando déficit de fatores individuais - os testes de coagulação corretivas, Testes de mistura estudo de plasma sanguíneo do plasma sanguíneo de doentes com uma deficiência conhecida conhecida de certos factores;
3. quantificação de componentes individuais sobre a sua actividade funcional (testes de coagulação, estudos e outros substratos cromogénicos) e (ou) em marcadores imunológicos;
4. identificação de ativação intravascular da coagulação do sangue e fibrinólise de características funcionais ou marcadores moleculares tal ativação - para identificar fatores de coagulação activados em circulação, Desgranulação de plaquetas produto, divisão dos componentes de coagulação do sangue ou os seus metabolitos, surgimento de novos marcador antigénico fatores e seus complexos ativado, metabolização marcado componentes aceleradas de coagulação do sangue (reduzir o período de sua meia-vida em circulação).

Assim, quando se avalia o estado do sistema de coagulação sanguínea usa tanto o seu próprio método de coagulação (laboratório e instrumental), formando a base do processo de diagnóstico, e imunológico, Radionuclídeo e outros tipos de pesquisa. Em muitos casos, os componentes pode ser definida como uma actividade funcional, e imunologicamente - o teor do respectivo antigénio no sangue. O uso simultâneo dessas técnicas nos permite diferenciar as formas de patologia, relacionados com a falta de síntese do factor de coagulação respectivo (neste caso, a mesma que é reduzido a atividade funcional, e a quantidade de antigénio), e mofo, em que a molécula é sintetizada fator, mas é anormal e funcionalmente defeituosas.

Para se referir ao número das primeiras formas do fator correspondente é acrescentado o sinal "-" (por exemplo, VIII-, IX- e T. d.), ea segunda - sinal de " " (por exemplo, VIII , IX ).

Áspero (geral) testes de coagulação

Determinação do tempo de coagulação

Determinação do tempo de coagulação (Um método preferido de Lee-Branco) - Long usado bystrovypolnimy (à beira do leito) teste indicativo, permite identificar distúrbios hemorrágicos significativos, associada a um défice de factores de coagulação (além do Factor VII) ou com o efeito de anticoagulantes e fibrinolíticos. É usado como um guia para o teste e controlo sobre a heparina, eliminação da heparina sulfato de protamina. O teste é relativamente baixa sensibilidade, suas figuras são quebrados apenas com acentuada diminuição dos fatores de coagulação de plasma (abaixo 4-5 %), e, portanto, inadequado para a detecção de formas leves de hemofilia A e B, bem como alterações da coagulação quando angiohemofilia, Deficiência de Factor XI, precalicreína, e alto peso molecular cininogênio. Por estas razões, o teste não pode ser utilizado para pré-operatório: em teste normal desempenho (5-10 Minutos) você pode ter hemorragia pós-operatória profusa.

Tempo de recalcificação de plasma

Tempo de recalcificação Plasma - teste não-padronizado baixa sensibilidade, menos confiável para detectar hipocoagulação, do que todo o tempo de coagulação do sangue. Ele não pode ser recomendada para o diagnóstico de transtornos da hemostasia.

O tempo de tromboplastina parcial activada, o plasma

O tempo de tromboplastina parcial activada, o plasma (TTPA, teste de caulim-kefalinovыy) - Método altamente sensível, revelando o processo de coagulação do sangue quando você executar o mecanismo interno. Selectivamente sensíveis à deficiência de factores da coagulação de plasma (porque a falta de plaquetas e fatores 3 Plaquetas compensado administrado externamente ou Kefalonia eritrofosfatidom).

Ele é usado para monitorizar a terapia heparina, exame pré-operatório dos pacientes e assim por diante. d. Os valores padrão dependem das amostras utilizadas kephaline, na maioria dos casos até 37-50 (optimamente - 37-45).

Caulim plasma tempo

Caulim durante plasma - teste, semelhante ao anterior, mas sem a adição de plasma kephaline (eritrofosfatida), pelo que é não só sensível a uma deficiência de factores da coagulação de plasma, mas também à falta de factor de plaquetas 3 Plaquetas. Avaliação da actividade estimado deste factor pode ser efectuada por comparação do tempo de plasma de teste com elevado teor de caulino e de baixo de plaquetas (norma - com 57-70).

Nós não recomendamos o uso de componentes de fosfolipídios, dando em aPTT tempos de coagulação igual 55 s e mais, pois isso reduz muito a precisão e reprodutibilidade do teste de, incluindo a determinação quantitativa do factor VIII e IX.

Silicone plasma tempo

Silicone tempo de plasma - um tempo de recalcificação de plasma, resultando em uma agulha silikonirovaniya, microtubos, pipetok, t. é. com a ativação mínima contato. O teste é sensível ao estado-da ativação intravascular de hipercoagulabilidade da fase de contato do start-up (fatores XII e XI), no entanto, esta violação é revelado mais claramente através da definição do tempo de coagulação de sangue total de silicone (na base da Lee-branco ou tromboelastograficheskoy processo de registo cuvete siliconizada).

Os valores padrão depender do estudo silicone e determinado o sangue de pessoas saudáveis ​​para cada um de sua amostra em separado. Ao escolher de silicone é o melhor, que se estende para o maior grau de tempo de coagulação (plasma).

Prothrombin (thromboplastin) plasma tempo

Prothrombin (thromboplastin) plasma tempo (Tempo rápido, índice de protrombina) caracteriza a taxa de coagulação do plasma sanguíneo recalcified processo de arranque para dispositivo externo, t. é. adição de uma tromboplastina de cérebro humano (ou o coelho).

Tromboplastina activa padronizado em amostras mistas de normalidade (teste) plasma. A actividade de tromboplastina mais comumente usado com 12-18 (na técnica clássica com Kvika- 12-13). A tromboplastina mais fraco, Quanto maior o erro do método.

Sob tempo de protrombina normal de plasma teste revela um défice ou isolado cumulativo de complexo de protrombina - VII, x, V e II, a partir da qual três factores (VII, X e II) K-vitaminozavisimy e a sua actividade diminui sob a influência de anticoagulantes indirectas. A este respeito, o teste de protrombina é fundamental no controlo das cumarinas dosagem (neodikumarin, ou pelentan, sinkumar et ai.) e outras drogas neste grupo (fenilin).

O tempo de protrombina é normal com um déficit de fatores de mecanismo interno de ativação de protrombinase - fator XII, XI, IX, VIII (t. é. para todos os tipos de hemofilia e defeito Hageman), bem como a deficiência de pré-calicreína e quininogénio de elevado peso molecular (VM kininogena)

Na literatura o diferente designação dos resultados dos testes de protrombina. O mais conveniente especificar o estudo de tempo de protrombina de plasma de controlo e em segundo (dando a informação ea actividade de tromboplastina utilizado). Às vezes eu uso a relação entre esses dois valores, t. é. índice (Plasma estudo PV, de ,)/(MF plasma controle, de), (a taxa de 0,9-1,1).

Outra forma de avaliação deste indicador, que é o mais amplamente utilizado nos laboratórios, índice de protrombina é um cálculo da percentagem compilando as proporções aritméticas de feedback (norma - 90-110%), No entanto, este cálculo está errado, porque entre a concentração dos factores de coagulação e o tempo de coagulação não tem aritmética, uma dependência logarítmica. Além Disso, tempo de protrombina é sensível apenas para uma diminuição na taxa de coagulação abaixo 50 % seu tamanho normal. Em virtude deste conveniente utilizar a determinação do índice de protrombina Percentagem por curva de diluição (1:2, 1:4, 1:8 e T. d.) amostra mista de plasma normal. Essa curva é construída uma vez para tromboplastinas atividade inicial diferente (de 12 para 18 de) e é determinado pelo índice de protrombina dos pacientes estudados. A vantagem desta técnica reside no facto, que os resultados de todos os estudos, incluindo a dinâmica de funcionamento em dias diferentes, Ele não se relaciona com acidentais várias amostras de plasma sanguíneo normal, e em média os mesmos parâmetros padrão, resultando no método de erro significativamente reduzida. Índices, obtido pela proporção de diluição e curva de plasma normal, não correspondem uns aos outros. Isto deve ser considerado ao monitorar o efeito dos anticoagulantes indirectas, Para o índice a declinar convencional 50 % aproximadamente corresponde a uma redução do índice de diluição curva para 25-30% • A este respeito, a análise deve sempre especificar, Como é a relação de protrombina, que são os padrões de desempenho para a actividade da tromboplastina.

Tempo de trombina do plasma

Tempo de trombina do plasma, t. é. o tempo de coagulação de plasma citratado, adicionando-lhe uma actividade de trombina padrão, É um teste importante para a avaliação da fase final da coagulação do sangue. A inclusão deste indicador é importante para a correta interpretação de todos os outros testes de coagulação, Para violação da fase final da coagulação sanguínea deve inevitavelmente levar a um aumento do tempo de coagulação em todos os métodos acima referidos.

Na maioria dos casos, durante o teste, a trombina utilizada esta concentração de solução de trombina, que, quando misturada com um volume igual de coagulação do plasma de sangue para dar 12- 18 de, mas no reconhecimento disfibrinogenemy utilizado e as concentrações mais fracas (levando a uma redução de 30-35 com).

Tempo de trombina - Um indicador importante de diagnóstico, violação da sua observado como congénita, e quando o adquiriu comum (secundário) gipoprotrombinemii, na maioria disfibrinogenemy, bem como sob a influência de heparina, Fibrinólise produto (PDF) e outros inibidores de auto-montagem e antitrombinas monómeros de fibrina. Em virtude de este tempo de trombina em primeiro lugar e cada vez mais quebrado em DIC aguda e subaguda, que desempenha um papel importante para o diagnóstico rápido desta patologia.

Teste Autokoagulyatsionny

Teste Autokoagulyatsionny (Permissão) - A dois passos altamente sensível, Ele descreve o processo de coagulação sanguínea quando se iniciou o mecanismo interno. Como o aPTT, teste não é sensível a uma deficiência de factor VII, mas ao mesmo tempo o seu testemunho não depende do teor de fibrinogénio (fator I) no soro a testar, como ele difere de todas as outras amostras indicativas de coagulação.

Outra vantagem da ACT consiste em, que o sangue diluído investigado, o que aumenta substancialmente a sensibilidade do ensaio a uma deficiência de factores da coagulação e, Além Disso, execução do ACP não requer a utilização de caulino e kephaline, uma vez que a normalização da ativação de contato do fosfolípido e conseguiu o seu próprio hemolysate glóbulo vermelho investigado.

RESUMO ACP é, nisso 2 ml de solução hipotónica (0,222 %) O cloreto de cálcio é adicionada 0,1 ml de exame de sangue.

Neste hemolisado-mistura de cálcio é formado e protrombinase trombina, A actividade é determinada por adição sequencial 0,2 ml desta mistura aos 0,2 mL de plasma de teste (cada 2 min durante o primeiro 10 m, e depois - após cada 10 min durante 1 não).

O plasma é a fonte de fibrinogénio investigado, que testou a actividade da trombina produzida na mistura de. Como mostrado por numerosos estudos, ela pode ser substituída por plasma sanguíneo de indivíduos sãos ou solução de fibrinogénio. Neste caso, o fluxo de sangue do paciente é reduzida para 0.1-0,2 ml (Pode ser tomado a partir do dedo!), oque transforma teste autokoagulyatsionny em mikrokoagulyatsionny (MKT) e que torna muito conveniente para uso pediátrico, incluindo o estudo da hemostasia em recém-nascidos.

Atividade de coagulação no ACT e MKT inicialmente aumenta em pessoas saudáveis, geralmente atinge um máximo de 10 minutos, incubação da mistura de sangue-cálcio (KKS), Quando o substrato de coagulação do plasma ocorre a 10 ± 1. Em seguida, a atividade de coagulação começa a declinar KKS, É o que indica que a inactivação de trombina formada na mesma. Com Hemofilia, a ação da heparina e outra atividade de coagulação coagulação do KKS reduziu drasticamente, e as máximas se move a partir do 10º minuto em uma data posterior. Se houver um hipercoagulabilidade mais cedo e mais significativo aumento na actividade da trombina na CAC.

Na condução do ensaio num único tubo de ensaio (definição apenas 10 minutos de incubação KKS) ele pode ser utilizado para monitorizar a terapia heparina. A vantagem deste método de ensaio sobre o tempo de tromboplastina parcial é, que conseguiu igualar o impacto diferencial em diferentes cefalinas tempo de coagulação heparina.

ACP Com base (MKT) Ele desenvolveu um método simples e preciso do diagnóstico diferencial hemofilias.

Com referências citadas em tabelas de conversão indicações ACT (MKT) pode ser expressa como uma porcentagem e gráficos - autokoagulogrammy.

Para estimar o número de parâmetros gerais são amplamente utilizados coagulação do sangue e métodos instrumentais de investigação, principalmente utilizando várias koagulografov e tromboelastografia.

Tromboelastografia não só dá uma idéia dos parâmetros de tempo da coagulação do sangue ou plasma, mas também sobre a estrutura e as propriedades mecânicas dos coágulos formados. Nos últimos anos, o hardware e os métodos de registro introduzido padronização e phospholipid activação de contacto da coagulação. Coagulação também criado para a implementação em massa de testes de coagulação comuns - aPTT, protrombina, trombina e outra gravação automática dos resultados.

Os métodos de diferenciação de uma variedade de deficiência de factores de coagulação e a sua determinação quantitativa

A tabela seguinte mostra os dados, que o estudo preliminar de coagulação do sangue por meio de três testes básicos permite a distinção de défice grupo vários fatores de coagulação de plasma. Assim, retardando apenas no ensaio de coagulação de protrombina (Eu тип нарушения) sob as leituras normais de todas as outras características da deficiência hereditária de factor VII ou para reduzir o nível deste factor nas fases iniciais de desenvolvimento da icterícia obstrutiva ou nos primeiros 1-2 dias de tratamento com anticoagulantes de acção indirecta, Quando a supressão da síntese do factor VII é à frente na sua redução do desenvolvimento de todos os outros factores de coagulação K-vitaminozavisimyh.

Violação de apenas o mecanismo interno de coagulação, t. é. o tempo de tromboplastina parcial e os países ACP (II tipo), existe deficiência do fator XII, XI, IX, VIII, Villeʙranda (não em todas as formas), precalicreína e cininogênio VM. Destas, pelo defeitos hereditários fator de coagulação deficiências XII, precalicreína e cininogênio WM é extremamente raro e não é acompanhado de qualquer hemorragia, Considerando que a deficiência do factor VIII (A hemofilia A), IX (Hemofilia B) e fator de von Willebrand é muito comum (é melhor que 96 % todas as desordens hemorrágicas hereditárias) e é acompanhada por hemorragia grave. Entre eles, em primeiro lugar, e para realizar o diagnóstico diferencial mais.

Deficiência de Factor XI relativamente rara (cerca de 0,5-1,0 % Todos os hemofilias), prossegue com um sangramento muito leve (principalmente após lesões e operações) e ocupa uma posição intermediária entre o primeiro subgrupo de distúrbios assintomáticos e hemofilia e doença de von Willebrand.

Outro tipo de distúrbios caracterizados pela elongação como o tempo de tromboplastina parcial e o ACP, e tempo de protrombina. É uma característica de deficiência de factores V, X ou II ou para o complexo de deficiência de factores K vitaminozavisimyh (VII, x, IX, II), que é observado na icterícia obstrutiva e outras formas de deficiência de vitamina K-, e quando receber anticoagulantes indirectas.

E finalmente, como pode ser visto a partir desta tabela, possível violação do testemunho dos três testes (tipo IV), que é observado em hipo hereditárias e adquiridas- e disfibrinogenemiyah (nem todos), quando se toma anticoagulantes de ação direta (geparina, geparinoidov, hirudina et ai.), tratamento de activadores de fibrinólise e drogas defibriniruyuschimi (estreptoquinase, uroquinase et ai.), aparece no sangue e substâncias patológicas antitrombinas, conexão prevenção (montagem) fibrina-monomerov - paraproteinov, kryohlobulynov, imunocomplexos, bem como a coagulação sofisticado, causada por DIC. Assim, o tempo de trombina é muitas vezes perturbada, em maior medida, e um pouco mais cedo, do que outros testes.

Quando se tem em conta a duração da doença e a possibilidade de origem ou secundárias ligações com outras doenças hereditárias e medicamentos ou outros efeitos, a presença ou ausência de sangramento e seu tipo não pode identificar corretamente a gênese destes distúrbios de coagulação do sangue profundo.

Tudo testes de diferenciação são baseadas no princípio de correcção, t. é. para a determinação, na medida em que revelado um distúrbio da coagulação ou eliminado, reciprocamente, Ela persiste amostras de plasma sanguíneo ou produtos de sangue obtidas deficiência artificialmente claramente conhecida de um fator de coagulação.

Para este fim, laboratórios especializados para criar um conjunto de faktorodefitsitnyh plasma sanguíneo, recebendo-os de pacientes com um conjunto conhecido de profundidade (Menos 1 %) deficiência de cada fator e armazená-los em pacotes pequenos (de 0,5 ml) a uma temperatura - 30 ° C. Se necessário, estas amostras são descongeladas e utilizadas em testes de diagnóstico.

Plasma, sido acidentalmente ou descongelação permanece inutilizada, re-congelação não é sujeito a. Os testes de correcção não deve ser usado com inibidores de plasma imune de um factor. Os kits de diagnóstico de uma série de empresas contém amostras liofilizadas de plasma sanguíneo fatores de coagulação deficiente identificados (plasma substrato). No entanto, muitos distúrbios hemorrágicos raramente visto na prática clínica, a respeito de uso de componentes de sangue preparados artificialmente deficiência normais de certos fatores de coagulação, e plasma heterogénea (galinhas, patos e outras.).

A tabela a seguir fornece informações sobre o conteúdo de fatores de coagulação nos componentes sanguíneos, utilizado para a correção de testes de coagulação, dependendo dos termos do seu armazenamento. Usando esta tabela, fácil de decifrar evidência de qualquer um dos três principais testes de coagulação. As técnicas corretivas deste tipo utilizado testes, padronizada pelo contato e ativar phospholipid, t. é. caulim-kefalinovыe ou gemolizata primeneniem (em ACT).

Ensaios de mistura de plasma de sangue de pacientes com plasma, certamente conhecida deficiência de factor

Determine o tempo de tromboplastina parcial activada no plasma de teste, O plasma normal (ao controle) e fator claramente conhecida deficiência de plasma VIII (de pacientes com hemofilia A), IX (de hemofilia B), XI XII и. Em seguida, uma mistura de amostras de plasma de citrato investigado (7/10 o volume) e, sucessivamente, com cada um dos plasmas deficiente (3/10 o volume), uma vez que a deficiência do factor VIII e IX (as formas mais frequentes de patologia!).

À mistura foi adicionado caulino e cefalina, e pela 2 min submetido a uma recalcificação (a uma temperatura 37 ° C). Para a mistura, em que o tempo de tromboplastina parcial activada não é normalizada, Tem o mesmo defeito de coagulação.

Assim, se o paciente examinado o tempo de tromboplastina parcial é normalizada adicionando plasma do sangue de pacientes com uma deficiência conhecida conhecida do factor VIII, mas corrigido plasma sanguíneo de doentes com deficiência do factor IX, tem A hemofilia A.

Da mesma forma,, mas com base no tempo de protrombina diferenciar o complexo de protrombina défice (x, V, VII e II).

Teste de geração de tromboplastina

Para a diferenciação das violações do mecanismo interno da coagulação do sangue é mais frequentemente usado clássico teste de geração de tromboplastina a substituição de componentes de plaquetas, preparação das quais exige um investimento considerável de tempo e de sangue, Kefalonia prejudica teste de geração de tromboplastina são a sua bulkiness, a necessidade de preparar um grande número de reagentes, tempo significativo sobre a sua execução.

Teste Corretiva, com base na base do teste autokoagulyatsionnogo.

O diagnóstico rápido de problemas é teste corretiva bastante diferentes respostas, com base na segunda correcção, os mesmos componentes da autokoagulyatsionnogo teste baseado arterial normal.

Este ensaio é altamente fiável, velocidade e facilidade de implementação e requer pouco (não mais 0,5 ml) quantidade de exame de sangue, ele pode ser utilizado em doentes pediátricos.

Nele, tal como no ensaio de geração de tromboplastina, é utilizado para corrigir o plasma e o soro adsorvido velho, que re-centrifugado antes do estudo. Em três frascos derramado 2 ml 0,222 % e foram adicionados dois deles solução de cloreto de cálcio 0,1 ml adsorvido plasma normal (1-Eu frasco) e 0,1 ml de soro normal de idade (2-Eu frasco). Os outros três tubos para fazer 0,2 ml de plasma normal citrado. Em seguida, a todos os tubos com uma solução de cloreto de cálcio foi adicionada 0,1 ml de sangue de citrato do ensaio.

Exatamente 4 min de incubação, a mistura de a sua actividade de coagulação foi testada em plasma normal.

O declínio acentuado na atividade de coagulação apenas no primeiro tubo de ensaio (BaSO normais₄-plasma) Isto indica a presença da deficiência do factor IX paciente (Hemofilia B), Apenas no segundo tubo (O soro de idade) - Sobre a falta de fator VIII (A hemofilia A); Se a correção ocorre em ambos os tubos (igualmente forte), então, obviamente, há uma deficiência do factor XI ou XII (cm. Mesa. 14).

Este teste é altamente sensível, como o estudo está sendo realizado em um divorciado 20 sangue tempo em fator de compensação 3 Plaquetas Hemolisado. O único reagente empregue - solução hipotónica de cloreto de cálcio, fazer a amostra público.

Igualmente simples é o método de correcção de amostras, realizado com base de um teste para o factor de diferenciação deficiência de protrombina II, V и VII , x (na mesa).

A fim de separar a deficiência do factor VII e X, testes de coagulação adicionais realizadas com a adição da solução de plasma de sangue de veneno de cobra víbora estudado - medicação lebetoks (tal concentração de veneno escolhido, que, na presença de cloreto de cálcio e kephaline provoca a coagulação com 20-25; Todos os ingredientes são tomadas numa quantidade 0,1 ml e mistura) (A tabela abaixo).

Com a mesma finalidade, a preparação é utilizado veneno de víbora de Russell, habitação na Índia (preparação stipven).

O diagnóstico diferencial é completada, se necessário quantificar fatores escassos ou inibidores imunes específicas, Por que, métodos padronizados altamente sensíveis especiais. Estas técnicas de construção utilizadas curvas de diluição de amostras mistas de plasma sanguíneo normal com a deficiência de correção de fatores, em adição ao ensaio de. Estas curvas definem a actividade do factor de teste no plasma de pacientes.

Especialmente determinação quantitativa importante do factor de concentração VIII e IX, e ter seus inibidores em doentes com hemofilia A e B (especialmente antes e durante a cirurgia e terapia de reposição intensiva), bem como hemorragia pós-parto profusa adiada, quando é necessário diferenciar a DIC e uma doença rara - o aparecimento do factor VIII inibidor imune (ainda muito menos - Fator V).

Com profunda deficiência do fator XIII (uma patologia hereditária rara) Todos os testes de coagulação são normais, mas dissolver coágulos em 5M e ureia 7M.

Isso ajuda a diferenciar os vários deficiência de factores de coagulação também contribui para a extensão e, especialmente, termos de testes leituras normalizadoras para os pacientes após a administração intravenosa de hemoderivados, t. é. Ajustado na Vivo pelo Método A. 3. Barkagan.

Esta técnica é particularmente eficaz quando um grande diferença no factor de diferenciável da expectativa de vida em circulação. Assim, meia vida do complexo de protrombina duração varia de algumas horas (fator VII) a vários dias (fator II). Uma posição intermediária entre eles segurar X Factor (2-2,5 Dias) e V (12-18).

Portanto, após transfusões maciças de índice de protrombina jato de plasma aumenta com a deficiência do fator VII é muito curto, deficiência de Factor V - um pouco mais longo (cerca de 4-6 vezes), uma deficiência do factor X e, especialmente, II por um período mais longo (ao longo de 1-2 dias). É significativo, a este respeito, e o impacto da droga sobre o índice de protrombina PPSB (concentrado de factor VII, IX, X e II). Ele também normaliza brevemente deficiência de tempo de protrombina de factor VII e mais (muitas vezes!) A deficiência do factor X e II. Desde que esta droga não é fator V, Esta deficiência não for corrigida los.

Uma diferença semelhante é revelado na transfusão e terapia de substituição dos fatores de coagulação mecanismo interno (XII, XI, IX e VIII), que registrou um teste de tromboplastina parcial ativada.

De particular interesse é fator de correção de nível alto-falante VIII e aPTT leituras quando a terapia de transfusão de hemofilia A e doença de von Willebrand. A primeira dessas condições é detectado sangramento melhora imediatamente o máximo após a transfusão (spray, velozes!) Anti-hemofílico plasma ou a administração crioprecipitado, seguido por um bastante rápido (para 10-18 h) um declínio constante na sua, Considerando vWF é observada alguma atividade aumento de coagulação dentro de algumas horas após a transfusão, e depois seu declínio - muito mais lentamente, que. A este respeito, no tratamento da doença de von Willebrand é raramente utilizado mais transfusões de substituição, de hemofilia A.

Um estudo da actividade funcional dos factores e componentes da calicreína-quinina de coagulação e sistemas fibrinolíticos usando substratos cromogénicos

Os métodos baseiam-se no estudo da actividade de enzimas proteoliticas e os seus inibidores, envolvida na coagulação do sangue, formação fibrinólise e cininas, em intensidade e a taxa de clivagem especificamente sensíveis a estas enzimas péptidos, que é libertado durante a degradação do agente de coloração (b-нитроанилин).

O grau de coloração da mistura reaccional determinada por espectrofotometria, e a sua intensidade é julgado sobre a actividade das enzimas correspondentes (fator de coagulação, kallikreina, plasmina e outros.), e no processo de travagem - a actividade de inibidores da enzima.

Assim, por exemplo, acção de antitrombina III e a heparina pode ser avaliada por clivagem de substratos cromogénicos enfraquecendo o factor Xa ou trombina, e a actividade de α₂-antiplasmina - para a redução do substrato cromogénico de plasmina correspondente. Substratos cromogénicos ou ter uma designação numérica (por exemplo, s-2222), ou são encaminhados para o prefixo hromozinami Condensed, denota a enzima, à qual o substrato sensível (por exemplo, Chromozym PL - субстрат плазмина, Chromozym TH - субстрат тромбина, Chromozym PK - substrato pré-calicreína / calicreína, etc.. d.).

Substratos cromogénicos expandir as oportunidades de investigação sistema hemostático, mas não há suficiente disponível para muitos laboratórios. Alguns estudos, feito com a sua ajuda, Eles têm vantagens sobre os testes de coagulação convencionais e dar-lhes os resultados correspondentes; em outros casos, seu uso simplifica e acelera estudo, Isso torna mais precisa; em terceiro - estas técnicas têm um significado independente e não pode ser substituído testes de coagulação (por exemplo, determinação precalicreína).

Determinação imunológica dos componentes do sistema hemostático

Determinação imunológica dos componentes do sistema hemostático é levada a cabo por métodos:

• Immunoprecipitacii;
• Immunoelektroforeza;
• Radioimunoensaio e o outro com o anti-soros apropriados

Ao mesmo tempo que a substância no plasma sanguíneo de um antigénio de factor de coagulação (ou seus fragmentos), Não atividade funcional, que pode ser reduzido drasticamente com antigénio normal no plasma. Esta situação é típica para todos os casos, Quando sintetizada no organismo anormal (funcionalmente defeituoso) fatores, preservando a sua antigenicidade, mas sem a capacidade para participar na hemostase.

Isto permite-lhe distinguir entre a cessação completa da síntese de fatores relevantes e a formação de formas anormais.

No entanto, vários componentes do sistema hemostático só pode ser determinada imunologicamente.

Este grupo inclui tais estudos importantes, como a definição dos seguintes componentes:

• b-тромбоглобулина;
• A2-макроглобулина;
• proteína C e S;
• antigénios de factor VIII:C e VIII:R_memória;
• Fibrinólise produto (PDF);
• neoantigenov kompleksov trombina - antitrombina III e plasmina - antiplasmina;
• um certo número de outros ensaios.

Portanto, estudo imunológico complementar significativamente a avaliação funcional das diferentes componentes do sistema de hemostasia.

Testes de diagnóstico, com base na utilização de drogas como reagentes de venenos de serpentes

Foi estabelecida há muito tempo, que muitos venenos de serpentes contêm enzimas proteolíticas altamente ativos, causando a coagulação do sangue e do impacto sobre os diferentes elos da cascata de coagulação. Consequentemente, venenos de cobra e isolado a partir de coagulase-lhes amplamente utilizado para a detecção de distúrbios hemostáticos, A determinação quantitativa dos factores de coagulação, detecção e determinação quantitativa de complexos de monómero de fibrina solúveis (RFMK) e um número de outros estudos.

As amostras de veneno de cobra é frequentemente muito mais fácil e tornar o diagnóstico mais atempado de Hemostasia.

A tabela mostra os dados sobre o mecanismo de acção de toxinas na coagulação do sangue e as oportunidades de utilização em diagnóstico cada.

Esses recursos expandir ainda mais o uso simultâneo de vários venenos e testes de coagulação comum simples. Assim, por exemplo, a utilização simultânea de testes de coagulação com veneno de víbora e torna mais fácil diferenciar a deficiência de Fator VII efa, H-V e II (na tabela abaixo), e com uma correcção adicional filtrada plasma normal (fator de potência V e II) -defitsit Factores X e V.

Determinação dos anticoagulantes fisiológicos básicos

O mais importante é a determinação da actividade dos principais anticoagulantes fisiológicos - antitrombina III, uma redução, que pode ser determinada geneticamente (Trombofilia primário) ou secundário devido ao consumo intensivo (DIC, Trombose maciça) ou metabolismo acelerado (tratamento com heparina, L-asparaginase, contraceptivos sintéticas) e bloqueio de complexos imunes, paraproteinami, fiʙronektinom, proteínas de fase aguda.

Em qualquer caso, a redução na actividade da antitrombina III abaixo 60-65 % Ele suporta coagulação intravascular, Ele está a fazer o efeito anticoagulante da heparina menos pronunciada. No entanto, muito frequentemente entre o nível de antitrombina III e diminuição da sensibilidade à heparina não cumprimento da lei-.

Geralmente é um enfraquecimento da acção anticoagulante da heparina prevalece significativamente durante o grau de diminuição da actividade da antitrombina III. Provou, que défices em várias formas de sua afinidade de heparina antitrombina III pode variar em diferentes graus. Além Disso, diferentes fracções de heparina, a razão de que em medicamentos muito variáveis, também tem uma afinidade diferente para a antitrombina III. Portanto, na prática, é importante investigar tanto a actividade real de antitrombina III, e a sua capacidade para ligar sob a influência da acção rápida anticoagulante heparina.

A actividade anticoagulante da antitrombina III

A actividade anticoagulante da antitrombina III Ela é determinada pela capacidade do plasma de teste (divorciado - Método de Copley Winterstein ou desnaturação térmica desfibrinado a uma temperatura 56 ° C - métodos Loligera, Abildgaarda et ai.) para inactivar um certo período de entrada a partir do lado de fora da trombina. A actividade residual da trombina no plasma pode ser determinada pela sua actividade de coagulação (de fibrinogene, sulfato de bário de plasma adsorvido) ou por clivagem de um substrato cromogénico, sensível à trombina ou Factor Xa (como a antitrombina III e inactiva o factor).

A heparina-kofaktornaya aktivnosti

Actividade de cofactor de heparina contido no plasma antitrombina III longo período determinado por um teste de tolerância do plasma à heparina, que pode ser considerada como indicativa, porque dá uma grande variação entre os valores normais e se reproduzir o suficiente.

Muito mais precisos testes JOGO izvodimy, que investigar o efeito de diferentes concentrações de heparina no tempo de trombina no plasma estudo, contendo uma pequena quantidade de plaquetas. A comparação é realizada com prolongamento do tempo de trombina do plasma normal de controlo, às quais se juntam o mesmo amostras de heparina.

Assim, para ensaio de trombina pela heparina para estudar o plasma sanguíneo são adicionados para a quantidade de heparina, que prolongar o controlo de tempo de trombina com 15 para 32-35 com (baixa concentração) e até 95-110 (alta concentração de heparina). A partir desses dados, o índice de atividade é calculado antitrombinas plasma (AAP) e reserva anticoagulante plasma (CBA).

É também amplamente utilizadas técnicas semelhantes para estimar o grau de inactivação de trombina em testes de coagulação, e os substratos cromogénicos.

A detecção imunológica do antigénio da antitrombina III

A detecção imunológica do antigénio da antitrombina III Ele permite que você diferenciar entre diferentes tipos de trombofilia:

• com a síntese inadequada de antitrombina III (a redução dos níveis de marcador antigénico reduzida adequadamente actividade);
• com síntese de preservada anormais e funcionalmente defeituosas suas formas (o nível do marcador antigénico é muito maior, actividade de).

As proteínas C e S, тромбомодулин и um₂-macroglobulina determinada por métodos imunoenzimáticos.