O diagnóstico de infertilidade causada imunologicamente

Durante uma vida longa casado sem o uso de contraceptivos, e na presença de micro-região das mucosas nos órgãos genitais pode ocorrer gradualmente detectar antigénios de imunização de espermatozóides. O exame físico dos cônjuges, que consiste em uma união estéril, não pode determinar a causa da infertilidade em 15/10 % casos. É neste grupo de cônjuges inférteis na aplicação de métodos especiais de investigação canal cervical segredo, Os anticorpos do plasma de sémen e de esperma de soro são muitas vezes detectados (ASAT), Utiliza testes qualitativos e quantitativos da pesquisa imunológica.

Teste Postkoytalnыy (FCT)

Teste Postkoytalnыy (FCT) Refere-se a imunoensaio qualitativo. Um resultado negativo indica a ausência de espermatozóides no segredo canal cervical, mas você não pode identificar a causa da sua ausência.

Método. Pelo número de espermatozóides móveis no segredo canal cervical, obtido após o coito, estabelecer a extensão das violações de sua capacidade de penetração com infertilidade ou imunidade a eles muco do canal cervical.

A FCT é necessário realizar as seguintes condições: O estudo deve ser realizado no período de ovulação, que revelou colpocitológicos ou outro método, após cônjuges abstinência anteriores dentro de 2-3 dias.

A metodologia do. Após o coito normal para uma mulher 30 minutos deve deitar de costas, dobrar os joelhos. Douching e limpeza do proibida, precisam apenas penso higiénico, que é removido durante a captura para o estudo de muco do canal cervical. Após 2-4 horas, admissível e após 6-10 horas (Tempo, decorrido antes do estudo, indicado na análise) após a relação sexual colo do útero exposto usando um espelho Cuzco e muco endocervical aspirados ou seringa de tuberculina (sem agulha), uma pipeta com um bulbo de borracha, ou cateter de polietileno.

Ao lavar o instrumento não deve ser utilizado desinfectantes, como eles afetam a mobilidade do esperma. Uma gota do muco resultando do canal cervical é transferida para uma lamela de vidro aquecida, lamela revestido, Território lubrificados com parafina líquida a vazar. Formulação imediatamente mikroskopiruyut (ocular 7X, Objetiva de 40X), determinar o número ea natureza dos motilidade espermática. A droga pode ser detectada com motilidade progressiva de espermatozóides activa, movimento oscilatório (o fenômeno de balanço) e fixada.

Aceitou fornecer cinco tipos de conclusões FCT.

• Excelente (normas relevantes): em cinco campos de visão até 15-20 com espermatozóides ativos mobilidade progressiva e mais. Sperm com o fenômeno de oscilação é inferior a 25 %.
• Satisfatório: em cinco campos de visão para cima 10 espermatozóides ativos mobilidade progressiva e menos 25 % esperma com o fenômeno de balanço.
• Pobre: Menos 5 espermatozóides em cinco campos de visão.
• Menos: ausência de esperma.
• Duvidoso: em cinco campos de visão mais 5 espermatozóides ativos-móveis e muito mais 25 % o fenômeno de balanço.

Quando o quinto tipo de FCT freqüentemente observado incompatibilidade imunológica entre os cônjuges, por conseguinte, necessário determinar a ACAT. Para identificar ACAT endocervical segredo, plasma, sêmen ou soro sanguíneo e exibi-los (Aglutinação ou imobilizados) Ela exige a nomeação de imunoensaios quantitativos.

A PBC negativo estudos de começar com uma definição de penetrar (penetração) a capacidade do esperma por meio de teste de penetração (Sex) e susceptibilidade à secreção de esperma do canal cervical usando um contacto de teste de esperma e muco cervical (TKSTSS).

Teste Penetracionnyj (TP)

O comprimento capilar fina 10 Ver digitado durante a ovulação muco do canal cervical. Uma extremidade aberta do capilar fecha argila, e a segunda é colocada num tubo de ensaio com um ejaculado teste fresco (não mais 3 horas após a ejaculação). Com argila no capilar é ligado ao tubo na posição vertical. A amostra é incubada num banho termostatizado a uma temperatura 37 ° C. 1 não. Na qualidade do ejaculado é julgado por a profundidade de penetração do esperma no muco do canal cervical. Existem três tipos de GEE.

• Afirmativo - A profundidade de penetração (a maior distância em centímetros, viajou pelo menos esperma único) acima 5 cm; o número de espermatozóides no ponto de máxima penetração mais 5 na mira, e o número de espermatozóides móveis no terço superior do capilar é maior do que 50 %.
• Duvidoso - Uma profundidade de penetração até 5 Exibir menos contagem de esperma 5, a sua mobilidade no terço superior das atinge capilares 50%.
• Menos - A profundidade de penetração do esperma atinge 1 cm.

A capacidade dos espermatozóides para penetração Ele depende da fase do ciclo menstrual. Ela começa a surgir a partir do nono dia do ciclo menstrual,, ativar gradualmente, atinge a sua expressão máxima durante o período de ovulação, mantida a este nível durante dois dias, e, em seguida, diminui gradualmente.

Sémen de contacto teste e muco cervical (TKSTSS)

Na corrediça é colocada uma pequena gota de muco a partir do canal cervical, tomadas de mulheres durante a ovulação, e um número do mesmo tamanho de gota ejaculado. Ambas as gotas são cobertas com uma tampa de vidro, que é ligeiramente pressionado para baixo para, juntou-se a uma queda. A droga é colocada numa câmara húmida (Placa de Petri com cotonete umedecido) e incubou-se num termostato a uma temperatura 37 ° C. 1 não.

Sob essas condições, espermatozóides normais penetrar no segredo do canal cervical normal, como pode ser visto ao microscópio com uma ampliação de 200X. Para explicar a reação perto da fronteira entre dois meios conta o número de penetrar o segredo do esperma canal cervical em dois campos adjacentes de vista.

Com excelente TKSTSS em dois campos de visão revela mais 25 espermatozóides móveis ativamente no fenômeno do balanço menos 25 %. Se TKSTSS satisfatória em dois campos de visão revelou mais 15 esperma ativamente móveis, TKSTSS em baixo - menos de 15. A TKSTSS penetração ausente negativo, se questionável - um fenômeno de oscilação excede 25 %.

Neste ensaio, como em PCT, o fenômeno de balanço, superior 25 %, provável, Ele indica a presença de ACAT e requer a nomeação de imunoensaios quantitativos.

Usando sêmen e secreções cervicais homens inférteis e férteis de canais em várias quantidades de usar TKSTSS identificar marido infértil.

• Exemplo 1. Tomado um canal secreto do colo do útero em mulheres e homens casais inférteis controle ejaculação saudáveis. Excelente TKSTSS indica uma fraca capacidade de penetração dos espermatozóides de seu marido, e da suscetibilidade da secreção normal do canal cervical.
• Exemplo 2. Tomado segredo completo da mulher saudável canal cervical e seu marido ejaculado de casais inférteis. Bad TKSTSS indica uma fraca penetração de esperma.
• Exemplo 3. Mulheres endocervicais casais inférteis secretas tomadas e homens controle ejaculação saudáveis. Bad TKSTSS indica inferioridade canal cervical segredo, que, obviamente, não penetram espermatozóides normais.

Testes imunológicos quantitativas

Mikroagglyutinatsionny teste Friberg

Mikroagglyutinatsionny teste Friberg (TF) suficientemente sensível e está disponível para os laboratórios de diagnóstico clínico. Usando TF pode determinar a presença de ACAT e de aglutinação em vários materiais título (ejaculado plasma, extratos de muco do canal cervical e no soro de ambos os cônjuges).

Reagentes:

1. Salina tamponada com fosfato (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Óleo Vazelinovoe.

Equipamento: microscópio, seringa de tuberculina, mikroagglyutinatsionnye pipetter 1 ml, capacidade micropipeta 0,1 ml.

Método. Soro de teste de sangue é inactivada por incubação numa incubadora a 56 ° C. 30 m. Ejacular, obtidos por masturbação, imediatamente diluído para que o FSB, a concentração de esperma foi 40 milhão. em 1 ml.

Por causa do material (ejaculado plasma, extrair o segredo do canal cervical ou soro) prepara-se uma série de diluições 1:4 para 1:128 utilizando-se como um líquido para diluição FSB. Em poços com mikroagglyutinatsionnyh óleo de parafina plaquetas seringa de tuberculina com uma agulha é introduzida (sob óleo vazelinovoe) As pequenas gotas de cada diluição do material de ensaio. Depois de cada amostra é lavada quatro vezes a seringa. Em cada diluição é adicionado à 5 vezes menor queda de ejaculado, e pela 4 h à temperatura ambiente detectada aglutina. Última reprodução, pelo que sob um microscópio com uma ampliação de 100X detectada 3 aglutinam sob revisão e mais, aglutinação título corresponde ACAT.

Teste Spermoimmobilizuyuschy Izodzhima (SIT).

Título sérico ACAT imobilizante, plasma ou no sémen extracto canal cervical secreta é definido pelo número de espermatozóides móveis, na presença de antigénios (esperma).

Componentes.

1. Ejacular, que é produzido e preparado de modo semelhante, para TF usando FSB; motilidade exceder 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya soro de cobaias.

3. De soro humano imune (ICHs), dando na presença de complemento através de 1 h de incubação imobilização 90 % esperma.

4. Soro humano normal (NCHS), inactivado por aquecimento a uma temperatura 56 ° C. 30 m.

5. Soro inactivado Teste, plasma e sêmen extrair canal cervical segredo.

Método. Para avaliar a actividade do complemento imobilizar o primeiro tubo é introduzido 0,5 ml de solução de cloreto de sódio isotónica, para determinar as alterações na mobilidade do esperma sem ASAT o segundo tubo de ensaio - 0,5 ml NHS, controle de imobilização terceiro tubo - 0,5 ml de ICHS e para determinar a ACAT imobilizar o tubo 4 - 0,5 ml de soro, ou plasma do ejaculado, extrato ou secreção endocervical.

Em seguida, cada tubo é introduzido por 0,1 ml complemento. A última coisa a todos os tubos é adicionada 0,05 ml de suspensão de esperma, em uma concentração 40 milhão. em 1 ml. Tripé tubos foram colocados numa incubadora a uma temperatura 37 ° C 1 não. Os tubos são retirados do forno e cuidadosamente agitado para reflectir assente esperma aglutinadas.

Para avaliar os resultados sob microscópio de alta ampliação (400x) calculada a percentagem de espermatozóides móveis de uma gota da proveta, depositado sobre uma lâmina de vidro e cobertas com uma tampa. Da mesma forma, ele define a porcentagem de espermatozóides móveis nas gotículas de os tubos de ensaio com o SNS e do ICHS. O resultado da reacção em conta pela fórmula

SIT = K / A

onde K - o número de espermatozóides móveis no controle com a ICHS e do SNS;

Sobre - o número de espermatozóides móveis em um tubo de ensaio (teste de soro, ou plasma do ejaculado, ou o segredo do canal cervical).

Com SIT média<2 o teste é negativo (número de células de espermatozóides móveis no controlo e nos tubos de ensaio de aproximadamente a mesma), Se o índice de CTI>2 - O teste é positivo, t. é. no material (soro, plasma ou sêmen extrair canal cervical segredo) são imobilizados ACAT.

• Exemplo 1. Controle de solo para ICHS - 10 % espermatozóides móveis. O segundo controle com o NHS - 80% espermatozóides móveis. Os dois controlos junto - 90 % espermatozóides móveis. No tubo de ensaio - 80 % espermatozóides móveis.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

O teste é negativo, imobilizado ausente ACAT.

• Exemplo 2. No tubo de ensaio - 40 % espermatozóides móveis, No entanto, no controle, no Exemplo 1.

KN = 90/40 = 2,2

O teste positivo. Não é o anticorpo imobilizado (ASAT), através do qual a motilidade de espermatozóides reduzida significativamente.