Anemia, associada à deficiência de ácido fólico

Seja qual for a anemia por deficiência de ácido fólico razão é caracterizada pelo aparecimento nos megaloblastos medula óssea, destruição intramedular erythrokaryocytes, patsitopeniey, macrocitose e hipercromia glóbulos vermelhos e, por vezes - transtornos mentais.

Folic (pteroilglutaminovaya) ácido (vitamina B₉) É composto de três componentes:

• anel de pteridina;
• Ácido P-aminobenzóico (juntos, constituem ácido pteroievuyu);
• ácido glutâmico.

O peso molecular do ácido fólico - 441. O ácido fólico é activo sob a forma de derivados de ácido tetrahidrofólico. Teor de ácido fólico em formas diferentes no corpo humano é de cerca de 5-10 mg. Stocks em violação de sua receita no corpo pode estar esgotada sobre 4 do mês.

A necessidade diária de ácido fólico é 100-200 microgramas, Gravidez, anemia hemolítica, que aumenta muitas vezes.

A quantidade total de ácido fólico na dieta com o pleno poder de 500-600 microgramas por dia. Folato - folatos contidas em quantidades consideráveis ​​no fígado, levedura, espinel, carne. Mais 50 % ácido fólico, em alimentos, Ele pode quebrar quando cozido.

O ácido fólico é absorvida no intestino delgado superior. A capacidade do intestino para absorver o ácido fólico é muito maior do que o requisito diário.

O ácido fólico participa na síntese de bases de pirimidina e purina,, juntamente com metilcobalamina - a síntese de timidinm nofosfata uridinmonofosfata. Coenzimas folato Mais envolvidos em uma série de reações. Em particular, tetrahidrofolato participa na síntese de histidina ácido glutâmico.

A etiologia e patogénese da anemia durante a deficiência de ácido fólico

Deficiência de ácido fólico, bem como défice de cobalamina, Ele conduz ao desenvolvimento da anemia megaloblástica.

A má absorção de folato observado em indivíduos, ressecção do intestino delgado, especialmente jejuno, bem como no longo prazo, tendo anticonvulsivos, tais como difenil-hidantoína (difenina) e fenobarbital (luminal). A absorção do ácido fólico é quebrada quando o canal de entrada e doença celíaca. Deficiência de ácido fólico, bem como défice de cobalamina, observada a síndrome da alça cega. Descrito raros casos de distúrbios hereditários de transporte de ácido fólico, através da parede do intestino e no fluido cerebrospinal. A absorção de outras substâncias sem sofrer.

Deficiência de ácido fólico em recém-nascidos observada em prematuridade, violação da absorção intestinal, O leite de cabra alimentada, contendo uma pequena quantidade de ácido fólico.

Uma má absorção significativa de ácido fólico pode ocorrer em pacientes, alcoólicos.

Aumento do consumo de ácido fólico durante a gravidez podem levar a uma deficiência de ácido fólico, No entanto, nos países desenvolvidos hoje é raro. Deficiência de ácido fólico em mulheres grávidas ocorrem quando a má nutrição, a presença de anemia hemolítica, usar uma grande quantidade de álcool pré-gravidez.

As manifestações clínicas da deficiência de folato

Deficiência de ácido fólico em crianças e mulheres jovens. Ao mesmo tempo, os pacientes queixam-se de fraqueza geral, tontura. Ao contrário de deficiência de cobalamina ferida na língua raramente observada. Parestesias, e outros sinais de funicular myelosis desaparecidas. Esclera muitas vezes ikterichnost.

Em contraste com o déficit de deficiência de cobalamina de ácido fólico é gistaminoupornaya raramente observada Akhil, gastratrophia, Embora a diminuição da secreção gástrica é frequentemente.

Para a deficiência de folato, bem como para a deficiência de cobalamina, caracterizada pelo aparecimento no sangue periférico macrocitose, megalócitos e megaloblastos, a presença de anemia hipercrômicas, redução do número de reticulócitos, plaquetas e leucopenia com mudança neutrophilic à esquerda e à direita. Na medula óssea - megaloblastos.

As alterações no sistema nervoso são diferentes das manifestações do B₁₂-A anemia por deficiência.

Provou, que as pessoas com epilepsia, Deficiência de ácido fólico leva a frequentes ataques, à sua maior gravidade. Isto é particularmente importante devido ao facto, que tomar anticonvulsivantes podem causar má absorção de folato. De acordo com a literatura, em indivíduos com deficiência de ácido fólico esquizofrenia provoca exacerbações, sintomas mais graves e um tratamento menos eficaz.

O diagnóstico diferencial da deficiência de cobalamina e ácido fólico

Para o diagnóstico diferencial da deficiência de cobalamina e ácido fólico é usado método de radioimunoensaio para determinação de ácido fólico no soro e em particular eritrócitos. O teor de cobalamina é determinada pelo método microbiológico. Como organismo de ensaio utilizado como Streptococcus faecalis e Lactobacillis casei. Normalmente, o teor de ácido fólico nas gamas de soro sanguíneo, De acordo com os autores, utilizando diferentes métodos de pesquisa, de 3 para 25 ng / mL, e eritrócitos - a partir de 100 para 425 ng / mL.

Na deficiência de ácido fólico diminui à medida que o nível de soro, e em eritrócitos. Teor de ácido fólico a deficiência kolabaminov no soro sangüíneo, muitas vezes sobe, e eritrócitos às vezes pode ser reduzida, embora o declínio, normalmente, um pequeno.

Para o diagnóstico de deficiência em ácido fólico, também é utilizada Load método histidina (15 g), em seguida, definir o conteúdo de ácido no formiminglutaminovoy urina. Normalmente, a maior parte das formas de histidina ácido glutâmico. Com a produção de urina ácido formiminglutaminovoy 1-18 mg. Na deficiência de ácido fólico para 8 horas após a sua introdução no corpo é libertado a partir da urina 20 para 1500 ácido formiminglutaminovoy mg. Um número significativo de ácido formiminglutaminovoy excretada na urina após a administração de histidina em pessoas, tratados com metotrexato. Na deficiência de cobalamina, cirrose hepática a excreção urinária de ácido aumenta formiminglutaminovoy, em menor grau, do que com um déficit de ácido fólico. Os níveis normais de urinário methylmalonic conteúdo ácido aumenta formiminglutaminovoy histidina ácido depois de receber provas de deficiência de ácido fólico, em vez da cobalamina.

Ela ajuda a diferenciar esses dois estados e estudo de radionuclídeos. Na deficiência de cobalamina, Trata-se de uma violação da secreção do fator intrínseco, absorção prejudicada de cianocobalamina marcada, uma deficiência de ácido fólico, é absorvida adequadamente.

Na deficiência de ácido fólico, a sua introdução no corpo leva a um teor mais elevado de reticulócitos, ao passo que a injecção de cianocobalamina (derivados) ineficaz. Folic methylcobalamin deficiência de ácido aumenta o nível de reticulócitos.

Definindo neutrófilos segmentação índice

Contar o número de neutrófilos, com 4 segmento e mais (Total 200 célula). Determinar a percentagem de células, com 5 segmentos e mais em relação à quantidade de células, com 4 segmento. O índice é determinada pela fórmula:

IS =(KS (5 e mais))/KS(4);

onde IC - índice de segmentação;

KS (5 e mais) - O número de neutrófilos segmentados (em 200 célula), em que o número de segmentos é igual 5 ou mais;

KS (4) - O número de neutrófilos segmentados, em que o número de segmentos é igual 4.

Normalmente, esse índice varia 2,5 para 25 %. Onde, quando excede 30 % (vibração 120%), Você pode falar sobre os neutrófilos hipersegmentação. É observada deficiência de ácido fólico, metilkoʙalamina, e uremia.

Determinação do ácido metilmalônico na urina por Giordio e Plaud

Reagentes.

1. A resina de permuta iónica Dowex-ZX4 (forma de cloreto, 200-400 Malha). A resina foi lavada com cinco volumes de água destilada 3 vezes, foi suspenso em dois volumes de água destilada e armazenado numa placa de escuro a 4 ° C.

2. Uma solução de para-nitroanilina 0,075 % preparada por dissolução 37,5 reagente mg 500 ml 0,2 Solução M de ácido clorídrico. Armazene em um pote escuro, Manteve-se estável durante vários meses à temperatura ambiente.

3.O tampão de acetato (pH 4,3) feita a partir de 1 Acetato de sódio M e 1 Solução M de ácido acético.

4.Diazoreaktiv: 4 ml 0,5 % solução de nitrato de sódio foi misturado com 15 ml para-nitroanilina. A mistura foi colocada num frigorifico a 4 ° C e a solução arrefecida foi adicionada 4 ml 0,2 Acetato de sódio M. Reagente estável a temperaturas 4 ° C durante um dia.

5.Padrão 0,05 Solução M de ácido metilmalônico: 295 ácido metilmalônico mg são dissolvidos em 50 ml de água.

Método

A urina foi recolhida num frasco de vidro e congeladas até o estudo. Para estudar a porção de carga da urina (20- 25 ml), descongelados, centrifugado, e o sobrenadante foi recolhido utilizando uma solução fraca de hidróxido de sódio ou ácido clorídrico para ajustar o pH 6,5.

Altura da coluna cromatográfica 20 cm e um diâmetro 1 cm foi cheio com resina Dowex-ZX4. A camada de resina deve estar dentro 3 cm. É passada através da resina 5 ml de urina, lavou-se com água destilada (2 × 50 ml a uma taxa de não mais do que 15 ml 1 de). Ácido metilmalónico pode ser eluída a partir da resina 20 ml 0,1 Solução M de ácido clorídrico. Mais 2 ml de eluído foram misturadas com 3 ml 1 Tampão acetato M, pH 4,3 num tubo de ensaio com uma rolha de vidro (15×2cm). À mistura é adicionada 3 ml diazoreaktiva frio, em que o pH é aumentado para 4,0. A mistura foi aquecida num banho de água a uma temperatura 94 ° C. 3 min e 2 ml 3 Solução de hidróxido de sódio M. O tubo foi então removido do banho de água, tapado e o conteúdo foi agitado. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente durante 10 min e a uma fotométrico 620 nm numa cuvete com um comprimento da trajectória 1 cm.

Como um controlo, uma mistura de, consiste em 2 ml 0,1 Solução M de ácido clorídrico, 3 ml e diazoreaktiva 3 ml de tampão de acetato. Solução padrão de ácido metilmalónico consiste dos mesmos componentes e 0,02 ml 0,05 Solução M de ácido metilmalônico. A absorvância das soluções foi medida sob as mesmas condições.

Índice de ácido metilmalônico (mg) por unidade de volume de urina (1 eu) determinado pela fórmula:

(É_Amostra-É_{ao controle})/(É_padrão-É_{ao controle})*A *((1000*T)/M)

em que E - absorvância de várias amostras;

A - a quantidade de ácido metilmalónico em um tubo de ensaio padrão, ml;

1000 - A quantidade de urina, tomadas para pesquisa, ml;

T - a quantidade de ácido clorídrico, tomado para eluição, ml;

H - o número do eluato, tomadas para pesquisa, ml.

Sob as condições acima mencionadas, a fórmula pode ser simplificada, como se segue::

(É_Amostra-É_{ao controle})/(É_padrão-É_{ao controle})*236

Onde, quando a quantidade de ácido metilmalónico na urina for maior do que 300 mg / l, deve ser re-misturado com fluido tampão de acetato e diazoreaktivom, mas ao invés 2 ml de eluato é aconselhável tomar 4- 10 vezes inferior e perfazer o volume de 2 ml 0,1 Solução de ácido clorídrico M. Ao calcular a diluição deve ser considerada.

Normalmente, por dia, com produção de urina 0,6-4,7 mg de ácido metilmalônico. Na deficiência de cobalamina excreção diária de ácido atinge methylmalonic 294 mg. Normalmente, a recepção 10 g valina não aumentar a depuração do ácido metilmalônico, deficiência de cobalamina aumenta a excreção do ácido metilmalónico.

Determinação do ácido metilmalônico na urina por Green

Reagentes.

1. Éter.
2. Etanol.
3. Uma solução de ácido clorídrico 0,1 M.
4. Sulfato de amônio.
5. Сильноосновная смола деацидит FF (200 malha, forma de cloreto).
6. Uma solução de nitrato de sódio 0,5 % (peso / volume).
7. Uma solução de para-nitroanilina (750 mg dissolvido em 1 eu 0,2 Solução M de ácido clorídrico).
8. Acetato de sódio 0,2 M.
9. O tampão de acetato 1 M, pH 4,3: misto 1 Solução de acetato de sódio M e 1 Solução M de ácido acético na proporção 16,35:33,9.
10. Uma solução aquosa de hidróxido de sódio 3 M.

UMA. Ácido metilmalônico solução padrão: 100 mg dissolvido em 100 ml de água, armazenado na geladeira.

B. Trabalhando ácido metilmalônico padrão: solução padrão diluída em 20 Tempo 0,1 Solução de ácido clorídrico M (1 ml do padrão e 19 ml de ácido clorídrico). Esta quantidade de methylmalonic equivalente ácido 100 ácido metilmalônico mg 1 condições de teste de urina l.

Para a preparação de diazoreaktiva misto 4 ml 0,5 % solução de nitrato de sódio e 15 ml para-nitroanilina. A mistura foi colocada num banho de gelo e adicionar 4 ml 0,2 Acetato de sódio M.

Método.

A urina foi coletada por um dia, mediu o seu volume e 10 ml de acidificada 1 Solução de ácido sulfúrico M a pH 2,0 ou ligeiramente inferior. Sulfato de amónio foi adicionado à saturação. A mistura foi colocada num funil de separação e extraiu-se três vezes com éter e etanol numa razão de 3:1. Para evitar a formação da mistura de emulsão extraído utilizado em excesso.

O extracto foi passado através de uma pequena coluna de cromatografia (1 – 1,5 cm de diâmetro), concluído 5 ml de resina. A coluna foi lavada 50 ml de água destilada. Ácido metilmalônico eluída 0,1 Solução de ácido clorídrico M. Após eluição seleccionado 2 ml eluato, W é adicionado ml de tampão de acetato e 3 ml diazoreaktiva.

Após a mistura, o tubo foi colocado num banho de água a uma temperatura 95 ° C 3 m. Em seguida, acrescentou 2 ml 3 Hidróxido de sódio M e uma vez rolha tubo fechado para minimizar o contato com o ar. Após arrefecimento, a absorvância foi medida ao comprimento de onda 620 eles. Para a peça em bruto em vez de usar o eluato 2 ml 0,1 Solução M de ácido clorídrico, e para a solução padrão - 2 ml de padrão de trabalho.