Наследственный пиропойкилоцитоз

Наследственный пиропойкилоцитоз — своеобразная, редко встречающаяся наследственная гемолитическая анемия, связанная с нарушением структуры белка мембраны эритроцитов. Характеризуется выраженным внутриклеточным гемолизом и пониженной резистентностью эритроцитов к изменению температуры.

Этиология и патогенез пиропойкилоцитоза

У больных пиропойкилоцитозом обнаружен дефект структуры спектрина. Белок нестабилен, имеет тенденцию к повышенной агрегации. Количество спектрина при пиропойкилоцитозе уменьшено.

Клинические проявления и лабораторные показатели пиропойкилоцитоза

У детей раннего возраста выявляются резко выраженная желтушность, значительное увеличение селезенки и увеличение печени. Содержание гемоглобина снижается до 3,1—3,41 ммоль/л (50—55 г/л), количество ретикулоцитов повышается до 30 %, в периферической крови обнаруживается значительное количество эритрокариоцитов. В мазках крови выявляются микросфероциты, отмечают ся выраженный анизоцитоз, пойкилоцитоз, фрагментация эритроцитов, значительно выраженная базофильная пунктация эритроцитов. Осмотическая резистентность их понижена. Обнаруживается значительный аутогемолиз с частичной коррекцией глюкозой. Активность исследованных ферментов нормальная, патологии структуры гемоглобина не выявлено.

Характерной особенностью заболевания является повышенная чувствительность эритроцитов к небольшому нагреванию. При повышении температуры до 48 °С эритроциты резко деформируются. Появляется выраженная фрагментация пойкилоцитов. В норме такая деформация наступает при 52—55 °С. При пиропойкилоцитозе в эритроцитах выявляется большое количество ионов кальция, отмечается их повышенное проникновение внутрь эритроцитов и замедленное выведение.

Метод определения осмотической резистентности эритроцитов до и после суточной инкубации

Определение осмотической резистентности может производиться как свежих эритроцитов, так и эритроцитов, инкубированных в течение суток при температуре 37 °С в стерильных условиях.

Реактивы.

1. Основной раствор, осмотически соответствующий 10 % раствору хлорида натрия.

2. Na₂HPO₄ — 27,31 г.

3. NaH₂PO₄ — 4,86 г.

4. NaCl — 180 г. Все реактивы растворяют в 2 л воды; pH полученного раствора должен быть 7,4. Раствор может храниться в закрытой посуде в холодильнике в течение нескольких месяцев. Из него готовят 1% раствор, из которого приготавливают все остальные: 0,85; 0,75; 0,65; 0,55; 0,5; 0,45; 0,4; 0,35; 0,3; 0,25 и 0,1 %. Можно приготовить сразу по 100 мл рабочих растворов разных концентраций и хранить их в течение 2 недель в холодильнике.

Методика. В две стерильные пробирки, содержащие по 2 капли гепарина, наливают по 1,5 мл крови.

Одну пробирку помещают на сутки в термостат, кровь во второй исследуют в день взятия.

По 5 мл раствора хлорида натрия (1 %) и всех рабочих растворов разливают в центрифужные пробирки. К каждой пробирке пипеткой от гемометра добавляют по 0,02 мл перемешанной крови. Пробирки оставляют при комнатной температуре на 30 мин, затем центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин. Сливают верхний слой из каждой пробирки и колориметрируют на медицинском колориметре при зеленом светофильтре в кювете с длиной оптического пути 1 см против надосадочного слоя пробирки, содержащей 1 % раствор хлорида натрия.

За 100 % гемолиз принимают оптическую плотность в надосадочном слое пробирки, содержащей 0,1 % раствор хлорида натрия (в таблице).

Пример.

В 0,1 % растворе хлорида натрия оптическая плотность равна 0,65, в 0,4 % — 0,22.

0,65 — 100 % гемолиз

0,22 — x

x=(0,22*100)/0,65=34%

Вторую пробирку, помещенную в термостат, извлекают через 24 ч и исследование повторяют.

Диагностическое значение

При микросфероцитарной гемолитической анемии наблюдается понижение осмотической резистентности эритроцитов. Гемолиз наблюдается уже в 0,7—0,65 % растворах хлорида натрия У некоторых больных микросфероцитозом выявить понижение осмотической резистентности эритроцитов в свежей крови не удается, однако в инкубированной крови она резко понижается. Гемолиз может начаться в концентрации раствора хлорида натрия 0,85 %.

При талассемии, а также при некоторых видах несфероцитарной гемолитической анемии осмотическая резистентность эритроцитов повышается. Гемолиз может начаться в 0,35 или 0,3 % растворе хлорида натрия.

Определение осмотической резистентности эритроцитов необходимо проводить во всех случаях наличия внутриклеточного гемолиза. Желательно исследовать осмотическую резистентность не только свежей крови, но и инкубированной в течение суток.