Методы обнаружения лейшманий в мазке костного мозга

Реактивы для обнаружения лейшманий

• Метиловый спирт, или абсолютный этиловый спирт, или смесь Никифорова (смесь равных количеств серного эфира и абсолютного этилового спирта).
• Фосфатный буфер pH 6,9—7,1, для приготовления которого смешивают 40 мл раствора КН₂РО₄ (9,078 г сухого вещества КН₂РО₄ в 1 л раствора) и 60 мл раствора Na₂PHO₄ (11,876 г сухого вещества в 1 л раствора).
• Азурэозин по Романовскому.

Методика обнаружения лейшманий в мазке костного мозга

Из костномозгового пунктата немедленно после взятия осторожно, чтобы не раздавить и не деформировать клетки,готовят тонкие мазки. Если пунктат плотный, делают отпечаток. При значительной примеси крови в пунктате из него выделяют на стекле маленькие беловатые жировые комочки, если они различимы, и готовят из них мазки.

Приготовленный мазок высушивают на воздухе, затем фиксируют, как мазки крови. Сухие фиксированные мазки могут храниться несколько дней.

На мазок наливают разведенный в буфере краситель Романовского (примерно 3—5 мл) и оставляют на 30— 50 мин. После окраски препарат споласкивают дистиллированной водой, высушивают и исследуют под микроскопом с иммерсионной системой.

Оценка результатов обнаружения лейшманий в мазке костного мозга

В разгар заболевания лейшмании обычно находятся в костномозговом пунктате в значительном количестве и поэтому обнаружить их легко. Однако на ранней стадии болезни и у леченых больных для того, чтобы выявить возбудителя, требуется длительный просмотр всего мазка (не менее 40 мин).

Лейшмании обнаруживаются в макрофагах либо внеклеточно в виде округлых или рисовидных телец диаметром 3—5 мкм. Цитоплазма окрашена в серовато-голубой цвет, а ядро — в красновато-фиолетовый. В цитоплазме размещается кинетопласт — округленное или палочковидное образование, окрашенное интенсивнее ядра.

За лейшмании иногда принимают кровяные пластинки или «осколки» клеток (комочки цитоплазмы, содержащие ядерное вещество), встречающиеся в мазках костного мозга, посторонние микроорганизмы (например, одноклеточные водоросли), попавшие в мазок во время окраски. В мазке они окрашиваются интенсивнее, чем лейшмании (темно-синяя цитоплазма и ярко-малиновое ядро), кинетопласт отсутствует.