発作性夜間血色素尿症 – 病気マルキミケーレ

発作性夜間血色素尿症 - 比較的まれな後天性溶血性貧血, 赤血球の構造の変化に接続されています。, 好中球の顆粒球や血小板. 血管内溶血の兆候を伴って発生します, ヘモグロビン尿が観察される場合, gemosiderinuriya, 血漿遊離ヘモグロビンレベルの増加. この病気は、末梢静脈や内臓の血管の血栓症によって合併することがよくあります。.

発作性夜間ヘモグロビン尿症の病因と病因

この病気の最初の説明は、 1882 G. に詳しく説明されていました 1928 G.

この病気の一般的な名前は、 発作性夜間血色素尿症 (PNG), しかし、それは病気の本質とよく一致していません, 実際の発作はなく、ヘモグロビン尿が常に観察されるわけではないため、.

ヘモシデリン尿を伴う血管内溶血は、PNH に加えて、多くの形態の自己免疫性溶血性貧血でも観察されます。, 風邪の抗体も同様, 特に熱溶血素を含む形態では, 一部の遺伝性溶血性貧血と同様に, 赤血球膜の構造の違反に関連する.

マルキアファバ・ミセリ病はさまざまな年齢で発生します. 赤血球の破壊が増加する原因は、赤血球自体の欠陥です.

PNH患者の赤血球, 上で述べたように, 補体の作用に最適な条件を作り出すときに、補体によって簡単に破壊されます, またはホエーが酸性化した場合, または、スクロース培地中に低濃度のイオンを生成して赤血球周囲の補体の濃度を高めることによって. PNH患者の赤血球は凝集素などの抗体の影響に対する感受性が増加しています, と, 特に, 溶血素.

PNHでは、赤血球だけが影響を受けるわけではありません, 患者の白血球と血小板も. PNH患者の血小板と白血球 血清の酸性化と同様に補体の影響に対する感受性が増加している, イオン強度の低いスクロースを含む培地中で. イソ凝集素の作用に対して何倍も敏感です, ドナーの血小板や白血球よりも. このようにして, 血小板と白血球は同じ膜欠陥を持っています, 赤血球と同じ.

赤血球表面の免疫グロブリンを検出します, 白血球と血小板を分析し、それによって PNH が自己攻撃性疾患のグループに属していることを証明することは、最も感度の高い方法では不可能です.

PNH には 2 つの独立した赤血球集団が存在するという説得力のある証拠があります。. 健康な人の中で最も耐性のある細胞である網赤血球は、PNH では最も脆弱であることが判明しました。. これは、ことを示しています, 病的な赤血球集団は成熟するまで生き残れないということ, そして、より古い成熟赤血球は健康な、またはほぼ健康な集団に属します。.

IN 1970 ムラート女性の赤血球の研究で, PNHに苦しんでいる, 発見した, 何が含まれていますか, 健康なムラート女性のように, G-6-PD の 2 つの通常の電気泳動バリアント; オプションA, アフリカの人々の間で一般的, そしてオプションB, ヨーロッパ人口の特徴. 溶血後に判明した, 病的な赤血球には G-6-PD の変異体が 1 つだけ含まれている, 正常な赤血球は両方の G-6-PD の電気泳動変異体を持っています. 従って, 溶血した赤血球は単一の細胞から始まります.

この事実は、赤血球の 2 つの集団が存在することを非常に確実に示しています。, 機能的な違いだけではない, として, 例えば, 小球状赤血球症において, 出身地によっても: 言い換えると, 病的な細胞クローンの存在を確認します, T. それはあります. 体細胞突然変異. 赤血球膜病変の正体, 好中球と血小板は、, 病理学的情報は細胞によって受信される可能性が最も高い, 幹の隣に, T. それはあります. 骨髄造血前駆細胞. 芽腫の増殖は PNH では典型的ではありません. PNHを背景とした急速な白血病の発症の孤立した症例のみが記載されている。. それにもかかわらず, 我々は仮定することができます, PNH は血液系の良性腫瘍の変異体であること, 長期間腫瘍の増殖を引き起こさない, 他の形態の白血病の特徴.

PNHにおける補体感受性の発現メカニズムはまだ不明である.

解糖系酵素の活性とペントースリン酸回路に大きな変化はありません.

PNHでは、赤血球アセチルコリンエステラーゼの活性が低下します。, おそらく赤血球膜の構造の破壊が原因であると考えられます, 酵素は膜の表面にあるため、損傷を受けると簡単に破壊されます。. 既知の, アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の使用は赤血球の生存に影響を及ぼさないこと. ただし、アセチルコリンエステラーゼ活性の低下は他の形態の溶血性貧血でも観察されます。, したがって、補体感受性の増加という現象の説明にはなりません。- テルノスティ.

証拠があります, 不飽和脂肪酸の量が増加していることを示します, リン脂質の構成成分, 赤血球膜. 可能性は排除されない, 脂質の変化は、赤血球膜の構造における他の変化を反映しているだけであるということ. ドデシル硫酸ナトリウムの存在下でポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用して PNH 患者の赤血球の膜タンパク質を研究したところ、次のことが確立されました。, 多くの画分でタンパク質含有量が対照と大きく異なること.

PNHにおける血栓性合併症の病因における主な役割は、赤血球の血管内破壊と凝固因子の刺激に与えられます。, 赤血球の分解中に赤血球から放出される. PNHでは、主に網赤血球が破壊されます。, それであってもよいです, これは、他の形態の溶血性貧血とは対照的に、この病気における血栓性合併症の頻度を説明するはずです, 重度の血管内溶血を伴う.

発作性夜間ヘモグロビン尿症の臨床症状

病気はほとんどの場合徐々に始まります. 患者は脱力を訴えます, 沈滞, 目まい. 強膜の亜硬膜性が時々認められる. 頭痛が最初の訴えとなることが多い, さまざまな場所の腹痛. 血栓形成が増加する傾向があるため、患者は医師の診察を受ける必要がある. ヘモグロビン尿症がこの病気の最初の症状であることは非常にまれであり、一部の患者では PNH がまったく存在しない場合があります。. 場合によっては、2〜3年後、あるいはその後に初めて現れることもあります。 10 病気の発症から数年後.

PNH の特徴的な兆候の 1 つは腹痛の発作です。. そのローカリゼーションは大きく異なる場合があります. 危機以外の腹痛, 通常, 観測されていません. 嘔吐を伴うことが多いです. 最も可能性が高いです, PNH患者の腹痛は腸間膜血管の血栓症と関連している.

末梢血管血栓症 (すべての最も - 上下肢の静脈, まれ - 腎血管) 発作性夜間血色素尿症の特徴的な症状として、. で 12 % APGの患者は血栓性静脈炎を観察しました. 血栓性合併症は、この疾患の死亡の最も頻繁な原因であります.

患者の客観的な研究は、多くの場合、少し偏見注目蒼白を引き付けます. 多くの場合、顔のむくみがあります, 時には過度の膨満感. 脾臓および肝臓のわずかな増加, それはPNGの標準値ではありませんが、.

発作性夜間ヘモグロビン尿症は血管内溶血の徴候を特徴とします。, その中で最も重要なのは、遊離血漿ヘモグロビンの増加です。. この症状は、PNH のほぼすべての患者で定期的に観察されます。. ただし、遊離血漿ヘモグロビンの増加の程度はさまざまであり、, 研究が病気のどの期間に実施されたか. 危機時にはこの数値が大幅に増加する, 血漿メタルブミンの量も増加します.

遊離血漿ヘモグロビンのレベルは、その時点での溶血の程度によって異なります。, ハプトグロビン含有量, 尿中のヘモグロビンの濾過の程度とヘモグロビン-ハプトグロビン複合体の破壊速度. 軽度の溶血の場合、血漿中の遊離ヘモグロビンのレベルは腎臓フィルターでろ過するには不十分です。. したがって、ヘモグロビン尿症はこの病気の必須の症状ではありません。. 放出されたヘモグロビンはネフロン尿細管を通過する際に部分的に破壊され、尿細管上皮に沈着します。. これがヘモジデリンが尿中に排泄される理由です.

ヘモシデリンは、発作性夜間ヘモグロビン尿症患者の大多数で尿中に排泄されます。. ヘモシデリン尿がすぐには現れないこともあります. これは重要です, しかし、PNH特有の疾患の兆候ではありません.

発作性夜間ヘモグロビン尿症の検査パラメータ

PNH 患者のヘモグロビン含有量は 1.86 ～ 3,1 ミリモル/リットル (30-50 G / L) 寛解時にはさらに正常値まで低下します.

PNH患者の赤血球数 ヘモグロビンの減少レベルに応じて減少します. カラーインデックスは長期間にわたって統一に近い状態を保ちます. どこ, 患者が尿中にヘモシデリンとヘモグロビンの形で大量の鉄を失った場合, 鉄レベルは徐々に減少します. 患者の約半数で低いカラーインデックスが観察される. ヘモグロビンPレベルが上昇している人もいます, 特に増悪の期間中.

かなりの割合の患者で 網赤血球含有量の増加, しかし比較的低い (2 - 4 %). PNH の白血球数はほとんどの場合減少します。. 多くの患者では、1 人あたり 1.5 ～ 3 G です。 1 L, ただし、場合によっては 0.7 ～ 0.8 G に減少します。 1 L. 白血球減少症, 通常, 好中球顆粒球の数の減少により観察される. PNH の白血球数は正常であるか、1 日あたり最大 10 ～ 11 G まで増加することがあります。 1 L.

PNHでは、好中球顆粒球の貪食活性が低下します。.

血小板減少症 PNHでもよく見られます, ただし、血小板の機能状態は正常です. 多分, これは、この病気における出血性合併症の稀性を説明しています。, 血小板数は時々大幅に減少しますが、1日あたり最大10〜20Gです 1 L. 通常、ほとんどの患者の血小板数は 50 ～ 100 G です。 1 L. 血小板数が正常であっても、発作性夜間ヘモグロビン尿症の診断が除外されるわけではありません。.

骨髄検査では 症状が検出される, 主に溶血性貧血の特徴 - 正常な数の骨髄核球による造血赤芽球の刺激. 多くの患者では巨核球数がわずかに減少しています.

PNHの血清鉄レベル これは、疾患の段階に依存します, 血管内の溶血と造血活動の程度. どこ, 患者が持続的または頻繁なヘモグロビン尿症を患っている場合, 持続的なヘモシデリン尿症と同様に, 体内の鉄分, それゆえ, そして血清中の血清が減少します, 時には非常に重要な. PNH は形成不全の兆候から始まることもあります. PNH患者の体内の鉄貯蔵量は依存する, 片側, 尿中の鉄の損失から, 一方、赤血球生成の強さについては. したがって、鉄欠乏は発作性夜間ヘモグロビン尿症の診断徴候とはみなされません。.

PNHの血清ビリルビン値 ほとんどの場合、軽度の上昇または正常です, 主に間接的な原因で. 平均して、ビリルビン含有量は 22 ～ 28 μmol/l です。. これは、考慮されるべきです, ヘモグロビンの血管内分解中に、ヘモグロビン-ハプトグロビン複合体が形成される, これも最終的には分解されてビリルビンを形成します.

PNH 患者の中には、再生不良性貧血の症状から始まる人もいます。.

発作性夜間ヘモグロビン尿症の診断

発作性夜間ヘモグロビン尿症では、赤血球膜の構造が破壊されます。, これは、補体の影響に対する感受性の増加として現れます。. このような感度の上昇は、Hem テストのいずれかを使用して検出されます。, またはより感度の高いショ糖検査. ただし、多くの場合、, 主に溶血素の形の自己免疫性溶血性貧血, スクロース検査では偽陽性の結果が出る可能性がある. 溶血素はそれ自身の赤血球の表面に固定されており、スクロース培地中の補体の存在下で赤血球を破壊します。, 一方、PNHは抗体の影響を受けずに補体によって細胞を破壊することを特徴としています。.

自己免疫性溶血性貧血の溶血素の形態を除外するには、上記の方法を使用し、患者の血清と単一ドナーの赤血球を用いたクロススクロース試験を使用して溶血素を研究することが推奨されます。, その逆ではありません, 慣習的に. PNHの場合、直接検査は陽性です, そしてクロスはマイナスです. 溶血素の形態では、AIHA は陽性として観察されます。, および陰性のクロステスト. このような場合には、両方の血清を使用する第 3 バージョンのスクロース検査を使用することをお勧めします。, そして患者の赤血球. この変異体の溶血の程度は、PNH では最小であり、溶血素型の AIHA では最大です。. この結果は、溶血素型の自己免疫性溶血性貧血患者の血清中の抗体の抗原に対する特異性が高いことによってのみ説明できます。, 患者の赤血球中に大量に存在する, ドナー赤血球よりも. これらの患者におけるスクロース検査の直接陽性は、, 多分, 赤血球上に固定抗体が存在する場合.

赤血球凝集凝集法による溶血素の検出 他の人が正しい診断を下せるよう支援します. 患者からの血清はドナー血清として使用できません。, 溶血素が含まれている場合、結果が偽陽性となる可能性があるため. 否定的な結果が生じる可能性があります, PNH患者の血清または肝硬変患者の血清が補体の供給源として使用される場合, 多発性関節リウマチ, 全身性エリテマトーデスおよびその他の疾患, 補体レベルが低下する場合. スクローステストとヘムテストは目立たなくなります, 患者の採血時に抗凝固剤としてヘパリンが使用された場合, クエン酸ナトリウムではありません. 溶血危機の後、ヘムテストとスクローステストの強度は低下します, しかし同時にネガティブにはならない.

発作性夜間ヘモグロビン尿症に対して Derviz と Bialko によって修正された Bing 法による血漿中の遊離ヘモグロビンの測定

この方法は、過酸化水素の存在下、酸性環境下でヘモグロビンがベンジジンと反応して緑色を形成する能力に基づいています。, 最初に青に変わる, そして赤紫へ. 色の濃さはヘモグロビンの量に比例します.

試薬.

1. 緩衝酢酸溶液 0,1 M, pH値 4,6: 27,22 酢酸ナトリウムgを溶解 1 リットルの水 (0,2 Mの溶液); 別のメスフラスコで準備します 1 L 0,2 M酢酸溶液; ミックス 480 ml溶液No. 1 と 520 ml溶液No. 2.
2. 過酸化水素 0,3 % ソリューション (使用前にペルヒドロールを希釈して調製します。 100 時間).
3. ベンジジン塩酸塩 0,1 % ソリューション: 50 塩酸ベンジジン mg を酢酸緩衝液 35 ～ 40 ml に溶解します。, 溶液を加熱して 80 ウォーターバス中で °C、冷却後、酢酸緩衝液で調整します。 50 ミリリットル.

濾して濃い色のボトルに入れ、室温で保管してください。 7 日. 試薬が黄ばんでいると使用できません, すぐに暗くなる場合は、アルコールからベンジジンを再結晶する必要があります。.

メソッド.

研究用の血液は、乾燥した針で静脈からシリコン処理されたチューブに採取されます。, 抗凝固剤を含むもの. 抗凝固剤を含む血液は、以下の範囲で遠心分離されます。 10 分で 1500 /分. 血漿を分離した後、再度遠心分離します。 10 分で 8000 白血球沈降のrpm.

試験管に注ぎます 4 mLの酢酸緩衝液, 2 過酸化水素ml, 2 ml ベンジジン i 0,04 試験血清 ml を混合し放置する 3 M, 次に、光路長に合わせてキュベットに注ぎます。 1 cm、緑色フィルターを使用して補正溶液に対して測光. 青色の強度は 4 ～ 5 分で増加します, したがって、測定は連続して 3 ～ 5 回繰り返され、最大読み取り値が記録されます。. 5〜6分後、血清の色はライラックブラウンの色合いになります。, 光学濃度が減少し始める. 特定された 2 つの最大光学濃度結果の平均が取られます。.

補償ソリューション, からなります 6 mLの酢酸緩衝液, 8 過酸化水素ml, 3 ベンジジン溶液 ml 0,06 等張性塩化ナトリウム溶液のミリリットル, サンプルと同時に作成.

検量線はヘモグロビン溶液から得られます。. 血液中, ヘモグロビン溶液を調製するために採取される, その内容を測定する (医療用比色計または医療用屈折計で). 一定濃度のヘモグロビン溶液を調製します。 1 G / L, より低濃度の溶液がそれから調製されます: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 と 0,2 G / L. 得られた各溶液から次の値を追加します。 0,04 混合物にml 4 mLの酢酸緩衝液, 2 ベンジジン溶液 ml 2 過酸化水素ml.

溶血液原液 (1 G / L) 検量線の場合は冷たく保つ必要があります, 低濃度の作業溶液は研究の直前に調製する必要があります。.

通常、中 1 l 血漿には含まれています 0,0005 ミリモル/リットル (0,01-0.04 G) ヘモグロビン.

発作性夜間ヘモグロビン尿症における尿中ヘモジデリンの測定

ヘモグロビンの分解中に、ヘモグロビンの鉄は尿細管の上皮に吸収され、ヘモジデリンの一部になります。. このような場合、尿細管の落屑した上皮細胞にはヘモジデリンの粒子が含まれています。.

遠心分離後の尿沈渣を注意深く検査すると、特別な染色をしなくてもヘモジデリン粒子が確認できます。. ただし、汚れるとよりはっきりと目立ちます Perlのメソッド.

メソッド.

尿を遠心分離後、上層を吸引します。, 新たに調製した溶液を沈殿物に加える 1 % 黄色い血の塩と 1 % 塩酸溶液 (同量を混合する 2 % 塩酸と黄血塩の溶液). 後に 10 撹拌後 1 分後、混合物を遠心分離し、沈殿物を検査します。. ヘモジデリンの粒が青くなる.

分光光度法による血漿メトマルブミンの測定

試薬.

1. リン酸等張緩衝液 (pH値 7,4): ミックス 18 ミリリットル 0.15 Mリン酸二水素ナトリウム溶液 (24,4 g НаН2Р04 上 1 リットルの水) と 82 ミリリットル 0,15 Mリン酸水素ナトリウム溶液 (21,3 ああ、いや₂AFTER₄ オン 1 リットルの水).
2. ハイドロサルファイトナトリウム.
3. 苛性ソーダ溶液 1 M.
4. ヒト血清アルブミン溶液 (40 G / L).
5. ジェミンソリューション (5 MG / 100ミリリットル); ヘミンを少量の水酸化ナトリウムに溶解することにより直ちに調製されます。, その後: 血清アルブミン溶液で必要量にする.

メソッド.

K 2 mlの血清または血漿を加える 1 緩衝等張溶液 ml, pH値 7,4. 混合物を遠心分離する 30 1200〜1500 rpmで最小. 光学密度は次のように決定されます。 569 NM. 次に、希釈した血漿を試験管に入れ、約 100 ml の血漿を入れます。 5 乾燥硫酸水素ナトリウム mg. スルー 5 同じ波長で光学濃度を最小再測定する. 2 つの光学密度の差は、メトマルブミンの光学密度に対応します。. メトヘマルブミン濃度は校正グラフを使用して決定されます.

校正グラフは次のように導出されます。. ヘミンとアルブミンの溶液を、次の量で試験管に移します。 0,01 へ 0,1 G / L (から 0,2 へ 2 ミリリットル). あの試験管の中で, 溶液の量が少ない場合 2 ミリリットル, 合計して 2 アルブミン溶液 ml. 次に追加します 1 リン酸等張緩衝液 ml. 混合物を次の温度で遠心分離します。 1500 /分, そして光学濃度を測定します. 測定値の差をヘミンの量に応じてプロットします。.

通常、ヘマルブミンは血漿中に存在しません. 血管内溶血の場合に出現します。, 例えば, 発作性夜間ヘモグロビン尿症または自己免疫性溶血性貧血の溶血素型を伴う, ハプトグロビンが存在しない場合でも, ヘムがアルブミンに結合するとき.

発作性夜間ヘモグロビン尿症のヘム検査

ケム検査は、新鮮な血清補体の存在下での pH 低下に対する PNH 患者の赤血球の抵抗力の低下に基づいています。.

試薬.

1. 塩酸溶液 0,2 N.
2. アンモニア溶液 0,04 %.

メソッド.

5— 6 血液のミリリットル. シュウ酸ナト​​リウムまたはクエン酸ナトリウムは抗凝固剤として使用されます。. 同時に、同じグループのドナーから 15 ～ 20 ml の血液が採取されます。. 赤血球は患者とドナーの血液中の血漿から分離されます.

ドナーの血清が注入されます 0,5 6本のチューブにml, そのうちの2つは上に置かれます 20 一定温度の水浴中で分 56 血清補体を不活性化するための℃, 残りの4本の試験管は室温に放置します. 患者の赤血球は等張塩化ナトリウム溶液で 2 回洗浄されます。, 次に、同じ溶液に一定の割合で懸濁します。 1:1.

研究デザインを表に示します.

それぞれの試験管の中身を混ぜ合わせる, に置かれた 1 サーモスタットの温度での時間 37 °C, そして遠心分離しました.

ブランクサンプルの場合 0,05 患者とドナーの赤血球は別々に追加されます 0,55 等張性塩化ナトリウム溶液のミリリットル.

遠心分離後、溶血の程度を目視で評価できます。. 各チューブ内の溶血の程度を定量化する 4,7 ミリリットル 0,04 % アンモニア溶液が加えられる 0,3 ml表層, そして空のサンプルを入れた試験管に入れます - 0,3 初期血清 ml.

特定するには 100 % 溶血から 4,7 mlのアンモニア溶液を加える 0,3 赤血球懸濁液 ml (0,05 患者の赤血球 ml 0,55 等張性塩化ナトリウム溶液のミリリットル).

溶液の光学密度は医療用比色計で測定され、測定値は赤血球を含まないアンモニア溶液の光学密度と比較されます。:

% 溶血=((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

ここで E₁ — 試験サンプルの光学濃度; IS₂— ブランクサンプルの光学濃度; IS₃— 光学濃度 100 % 溶血物.

通常は、それ以上ではありません 5 % 赤血球.

Hem テストは次の場合に陽性とみなされます。, さらに溶血したら 6 % 赤血球.

При пароксизмальной ночной гемоглобинурии и гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии гемолизируется иногда до 50—80 % 赤血球. Для этих заболеваний характерен гемолиз лишь в присутствии неинактивированной сыворотки крови (пробирка № 2). Если инактивация сыворотки не предотвращает гемолиз (пробирка № 3), можно предположить наличие другой формы гемолитической анемии или ошибку в постановке исследования.

Для разрушения эритроцитов больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией при pH среды 6,5 требуется обязательное присутствие комплемента, содержащегося в свежей сыворотке крови.

Сахарозная проба при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Сахарозная проба основана на том, что эритроциты больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией и гемолизиновой формой аутоиммунной гемолитической анемии разрушаются в растворах с низкой ионной силой в присутствии комплемента.

試薬.

1. Раствор сахарозы: 9,42 сахарозы растворяют в 0,005 М фосфатном буфере; pH値 6,2 (91 ミリリットル 0,005 М NaH₂AFTER₄ と 9 ミリリットル 0,005 М Na₂HPO₄).
2. Реактив для определения концентрации гемоглобина: 200 мг красной кровяной соли растворяют в 1 л дистиллированной воды, туда же добавляют 0,5 мл ацетонциангидрина.

メソッド.

Кровь у больного берут из вены в две пробирки — сухую (8—10 мл) и с антикоагулянтом (2 - 3 ミリリットル). В качестве антикоагулянта используют цитрат натрия. Эритроциты из пробирки с антикоагулянтом дважды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия. После отмывания и отсасывания надосадочной жидкости к 0,4 мл эритроцитов добавляют 0,25 等張性塩化ナトリウム溶液のミリリットル.

Одновременно берут кровь у донора той же группы крови в две пробирки — с антикоагулянтом (2—3 мл), ее обрабатывают так же, как кровь больного, и в сухую (8 - 10 ミリリットル) для получения сыворотки. После отделения донорской сыворотки 0,5 мл ее помещают в водяную баню при температуре 56 °C 30 мин для инактивации комплемента. Сыворотку крови донора следует брать в день опыта и сохранять на холоде. Схема исследования приведена в таблице.

Пробирки помещают в термостат на 30 分で 37 °C, а затем центрифугируют в течение 10 分で 2000 об/мин и оценивают степень гемолиза.

Для этого в пробирки наливают по 3,4 мл реактива для определения концентрации гемоглобина и 0,6 мл над- осадочного слоя из каждой пробирки. スルー 10 мин измеряют оптическую плотность раствора в пробирках при 540 нм на медицинском рефрактометре (спектрофотометре) или медицинском колориметре (фотоколориметре ФЭК-М) при зеленом светофильтре, сравнивая полученные данные с оптической плотностью раствора для определения гемоглобина. Берется среднее из двух показаний каждого опыта. Расчет производится по формуле:

% гемолиза в пробирке=((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

ここで E₁ — оптическая плотность раствора в пробирке № 1; IS₅ — оптическая плотность раствора в пробирке № 5, необходимая для исключения окраски самой сыворотки; IS₈ — оптическая плотность раствора в пробирке № 8, где произошел 100%-й гемолиз.

Для перекрестной сахарозной пробы (пробирка № 2) 100%-й гемолиз исследуется в пробирке № 7.

結果の評価.

В норме в пробирке № 1, содержащей эритроциты исследуемого больного, гемолиз не превышает 2—3 %.

При пароксизмальной ночной гемоглобинурии и гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии (AIGA) в этой пробирке гемолиз превышает 6 % В контрольных пробирках — № 4, содержащей эритроциты больного и инактивированную сыворотку крови донора, пробирке № 5, содержащей эритроциты и сыворотку крови донора, と数 6, содержащей вместо сыворотки изотонический раствор хлорида натрия — гемолиз не должен превышать 1—2 %.

Перекрестная сахарозная проба (пробирка № 2) при гемолизиновой форме АИГА обычно положительная (при наличии гемолизинов в сыворотке крови), но она может быть и отрицательной. В пробирке № 3 (эритроциты и сыворотка крови больного) гемолиз наблюдается как при ПНГ, так и при гемолизиновой форме АИГА. При пароксизмальной ночной гемоглобинурии максимальный гемолиз обнаруживается в обычной сахарозной пробе (пробирка № 1), менее выраженный — в пробе с собственными эритроцитами больного (пробирка № 3); отсутствует гемолиз в перекрестной сахарозной пробе (пробирка № 2).

При гемолизиновой форме АИГА наиболее выраженный гемолиз выявляется в пробе с собственными сывороткой крови и эритроцитами больного (пробирка № 3), несколько менее выраженный — в пробирке № 1. В пробирке № 2 гемолиз отмечается часто, но отсутствие его не исключает гемолизиновую форму АИГА.