血管血小板止血の研究
止血のこのレベルでの違反は、出血や血栓症の傾向で発生する可能性があります, 研究方法を選択したかに応じて. ほかに, すべての研究方法の血小板 一次および二次に分け止血, テストまたは2行目, その場合にのみ適用されます, 使用したテストでは、違反が明らかになった場合. メイン (bazïsnım) 次のテストは、.
抵抗のためのサンプル (脆性) 毛細血管 - カフス, ジャー, angiorezistometriya
これらの試験から、最もアクセス、まだ十分に有益 サンプルKonchalovsky-ティラー-LEED.
推定は、出血の数及び大きさに作られて, 前腕の掌面上に形成されました (直径の円の中に 5 cm) 圧力カフショルダー12-13,3キロパスカルでの圧縮の5分後 (90-100 mmHgで. アート。). 結果はを通じて考慮されます 5 カフの除去後の分. 数点状出血より 10 微小血管の増加脆弱性へのポイント, それは、多くの場合、血小板減少症又は血小板機能違反angiotroficheskoyに関連付けられています. も考慮に出血の発生を取り、右の襟下.
Banochnayaサンプル 段に構築負圧で皮膚の同じ領域で行われている - から 20 キロパスカル (150 ミリメートル水銀柱. アート。) と下部. 業績の評価が点状出血を数え, 銀行に現れました.
毛細管出血の持続時間と大きさにサンプル
古典で デュークトライアル 3.5〜4ミリメートルの深さに穴を開け、彼女の光温暖化後の下部ローラ耳たぶ. 本研究では出血は通常、超えていません 4 M, 濾紙上の血液の滴は、比較的低く、約1-1.5分穿刺後以降急激に減少し始めます. 発現し血小板減少症 (もっと少なく 20 Tで 1 L) 血小板の機能障害と重度の出血時間は20〜40分に増加しました, 血液の汚れが非常に大きく、長期間の減少または波を減少させます, その後再び増加. デュークサンプルは十分な感度ではありません, u 2/3 thrombocytopathiesの患者には、通常の結果が得られます.
より高感度のテスト, 出血時間は、人工的に作成静脈鬱血の背景に調査されています, 対象の肩は、血圧を測定するためのカフ装置に重畳され、研究のために圧力をサポート, 同じ 5,3 キロパスカル (40 ミリメートル水銀柱. アート。). でこのような鬱血を背景に ボルクグレヴィンクサンプル-Vaaler 前腕ランセットの上部3分の掌面に横方向の切り込み深さを適用 1 MM 8-10ミリの長さ (出血時間の割合 - アップ 10 M), とアイビーらをサンプリング. 前腕ランセットに適用される同じ指穿刺3横深さから血液を描画します 3 ミリ (出血時間の割合 - アップ 7 M).
行っ同じ静脈鬱血を背景に に関する研究. と. Shitikova, 末節骨に刺す深さを適用することにより 3 ミリ, その後、指の先端がカップに浸し 5 等張性塩化ナトリウム溶液のmlおよび透過光でカウント出血時間 (この溶液を集中的血で染まっている場合, 指のフォローアップは、異なるカップに移動させ、). 失われた血液の量は、カップ内の液体の体積の増加によって決定されます (出血時間の割合 - アップ 4 M, 血液の量が失われた - から 0,01 へ 0,4 ミリリットル).
Tでの試験で. N. Shushkevich 失われた血液量は、アンモニアの色によって決定されます (0,04 %) , 血痕と紙を浸漬します, 医療測色計で測色することにより.
出血の持続期間の適応テスト, 異常な, 虐待の証拠は、血小板血管止血を表明しました, しかし、これらのサンプルの通常の結果の下に軽度に発現thrombocytopathyを排除するものではありません.
血小板の数を数えます
血小板の数を数えます (Goryaeva位相コントラストや色合いの下で計数室で、またはパーティクルカウンタの助けを借りて、) - 血小板減少症とthrombocytopathyを診断するための最も重要な方法, これらの細胞の量で連続的または断続的な減少を進め (異常ベルナール·スーリエ, メイアHegglinaなど。).
血小板数も示唆カウント, それは彼らのさらなる機能研究を行うことが可能であり、どのようにそれがなされるべきかどうか (予備濃縮血小板の有無にかかわらず, 測光法または微視的、など. D。).
血液塗抹標本中の血小板の大きさの検討 – trombotsitometriya
血液塗抹標本中の血小板の大きさの検討 (trombotsitometriya) それはあなたが試験の血液中の細胞の様々な集団の予備的な判断を行い、異常の数の情報を取得することができます, 血小板顆粒のと同様に飽和.
いくつかのthrombocytopathyで (ウィスコット·アルドリッチ症候群) 血小板は非常に小さくすることによって支配されています (へ 2 直径ミクロン), 一方、他のもの - 巨大なフォーム (異常ベルナール·スーリエ, メイアHegglina) - へ 8 m以上. これらの細胞の数の悪いthrombocytopathy顆粒であります (cm. 以下), 他人ながら - ガラス上に拡散血小板中の顆粒の集中に違反, その反応の違反、それらが物質を含有する顆粒の放出を構成します, 止血の実施に必要な. これらのすべてのプロパティ, と拡散及び形成プロセスへの血小板の能力, これらの細胞の構造の評価は、従来の走査型電子顕微鏡を用いて研究することができます, とノマルスキー光学系の干渉による.
血餅の退縮 定期的に重度の血小板減少症に違反 (未満30〜40でT 1 L) および血小板の質的劣勢のいくつかの形態で, 多くの場合 - グランツマン血小板無力trombotsitoasteniiと, 尿毒症thrombocytopathyなど.
血小板の研究接着凝集 (AAFT)
血小板の研究接着凝集 (AAFT) - 最もthrombocytopathyの検査診断の最も重要な要素. 現在、容易に実現可能と公的に入手可能な研究方法の数, 視覚含みます, 顕微鏡とハードウェア (凝集, マイクロフィルタなどがあります。) この関数を近似する登録は、次の手順を割り当てることができ.
ガラス上の血小板の保存方法 (またはフィルタ)
血小板数は、前のガラスビーズを用いたカラム又はガラスファイバピグテールを介して速度の標準にそれを通過した後の静脈血中で行いました; 血液から血小板の損失は、接着性の程度で判断されています.
複数の利用可能な, しかし多少精度が低いです, フラスコの内面と一定期間内にそれとの接触前後の血液中の血小板の数を決定するための方法, 一定速度で回転. 遅延血小板ミリポアフィルターを決定するためのより正確な方法 (細孔径 - 15〜20ミクロン). これらの試験では、評価は、上流と下流のフィルタの圧力勾配の増加に行うことができます (詰まった毛穴、および血小板凝集物は、このインデックスの増加をもたらします).
血小板の凝集を研究するための方法
溶血凝集試験 能力の溶血に基づいて赤血球を洗浄, 繁殖で調査 10-2 と 10-6, 彼自身の血漿中の凝集を引き起こすことが攪拌しながら, 血小板の多数を獲得しました (クエン酸血漿および溶血の体積比 - 1,0:0,2). アカウントに凝集の発生の時間を割いて (溶血-11-17と高濃度の割合, 低い - 40-54で) およびその重症度. プロセスのダイナミクスとその強度は、測光のように推定することができます (医療測色計, 緑色フィルタ, 攪拌) 任意のデザインagregografe.
グラフィック登録プロセスは、高希釈溶血を使用する場合 (10-6) これは、2つの波agregatogrammuを提供します, ここで第二波は、内因性の血小板凝集刺激物質の放出に関連 - ADP, カテコールアミン, トロンボキサンなど. この第二の波は放出の反応によって特徴づけられます, それは、血小板密な顆粒の非存在下で観察されていません (ストレージプール病) または反応に違反してリリースします (アスピリン様症候群など。).
溶血凝集試験は、任意の実験室で行うために利用可能です, それは特別な試薬を必要としません.
血小板凝集の視覚的微量の決意
その本質は事実にあります, silikonirovaniya静脈血で得られたことは、二重の容量を安定化 3,8 % クエン酸ナトリウム (比 2,4:0,6 ミリリットル), それを遠心分離し 6 分で 100 V / /分, そして、得られた多血小板血漿は、以下によって適用されます 0,02 ガラススライド上のmlおよび凝集剤の同じ体積で処理 - ADP, トロンビン, コラーゲン, ノルアドレナリンやristomycin. 研究における凝集剤の最終濃度は、血漿であるべきです:
- ADF 0,5*10-4 ミリモル/リットル;
- ノルアドレナリン - 0,015%;
- トロンビン - 0,125 U / mlの (コラーゲンの濃度は、経験的に選択されます).
下限としておそらくテスト, 凝集剤のより高い濃度. 濃度の選択は、様々な製剤の不平等な生産とサンプルの様々な活動の活性に応じて異なる場合があります, 関連していると正常血漿の各薬剤の濃度を事前に合わせて.
多血小板血漿凝集剤の混合物を、スライドをロッキングすることによって混合され、, 拡大鏡と暗い背景の「吹雪」としてユニットの出現時間を記録. 評価の結果は、血漿中の血小板の数を数え. そう, ADP-時間集計, で27-37秒から増加 400 Tで 1 62から75秒にL小板で 50 Tで 1 L, トロンビン凝集 - それぞれ、40から52は、79-します 106 から.
グラフィックの登録集約
同じ凝集剤の影響下での凝集のグラフィック登録 - 機能性血小板研究の非常に有益方法. 上で実行またはagregografah.
グラフィックスは、凝集の発症だけでなくを決定する登録すると, しかし、その強度 (最大の偏差曲線とエリアagregatogrammy), 凝集の第一および第二の波 - エピネフリンおよびADPの低濃度を使用して (それは解放の第二波の反応を記載します), および病理学的分解.
影響下のビジュアルまたはグラフィカル·研究血小板凝集ristomycin
とても 重要な影響下で視覚またはグラフィックの研究血小板凝集があるristomycin. 集計のこの種の違反 (0.8-1.0 mg / mlの最終濃度をristomycin) 最も一般的な出血性素因の一つで - 血管血友病 (フォン·ヴィレブランド病), ならびに血小板ベルナール·スーリエの異常とフォンビルブランド因子の合成阻害の特定の種類を取得 (尿毒症, 免疫抑制、およびそれ. D。).
血漿中のフォン·ヴィレブランド因子の定量決意
血漿中のフォン·ヴィレブランド因子の定量的な決意は、試験血漿の種々の希釈で、正常な血小板の凝集ホルマリン懸濁液をristomycin上に担持されるbestrombotsitarnoy.
この方法は、両方のこの因子の診断と二angiogemofnlii合成阻害に重要です, および内皮の重症度を評価します (血管炎, アテローム性動脈硬化症などがあります。) および血栓症の傾向, ここで、血液中のフォン·ヴィレブランド因子の含有量は、多くの場合、大幅に増加します.
フォン·ヴィレブランド因子のレベル それを合成する内皮細胞の能力を示します (減少aigiogemofilii) および内皮の血管炎の敗北の程度, アテローム性動脈硬化症および他の疾患, 血管の内側のライニングの敗北を進めます.
健康な個体の多血小板血漿中の固定通常の血小板については順次追加されます 0,2 % EDTA (0,5 ミリリットル 5 ml血漿) とにより 2 分 - 定着液 (20 ミリリットル 40 % ホルマリン 1000 mlのリン酸緩衝液 0,2 G EDTA, pH値 6,4).
混合物は、少なくともために 4°Cに保ちました 1 いいえ, その後、それを遠心分離にかけました, 上清を除去し, 血小板ペレットを再度懸濁溶液で洗浄しました (一冊 3,8 % クエン酸ナトリウム、および等張塩化ナトリウム溶液の5巻; pHをに調節します 7,4). ホルマリンでパックされた正常な血小板の調製した懸濁液 1 mlであり、-20℃で保存. 検量線は、正常血漿の希釈物を用いて構成されているbestrombotsitarnoy, 混合ホルマリン血小板ある標本. さらに、混合物を凝集ristomycin決定され. 検量線は、試験血漿中のフォン·ヴィレブランド因子の量によって決定されます. アジ化ナトリウムの保存液の少量の添加時に修正された血小板をより良く保存されています.
テスト, 血小板の自発的な凝集を反映
静脈血栓塞栓症の患者の研究において、 またはコア技術の血栓症および虚血の増加傾向は、テストを含みます, 血小板の自発的な凝集を反映, T. それはあります. 凝集剤を添加せずに、全血または血漿で発生します.
血液の塗抹標本で、この現象を特定するには、別途に存在する血小板の数の比は、それらの集合体に注意を引きます, 血小板とよりで構成3-5. 汚泥を表示するときにこの現象は、最高の明らかにされています, 豊富なtseitrifuによる- 多血小板血漿をドーピング (20分で-30 6000 /分), クエン酸塩またはEDTA、クエン酸溶液によって安定化さ. しかし、より安定した結果は、自発的な凝集を決定するための次のメソッドを提供します.
МетодウーHoak
に基づいて、呉Hoak法, 2本の試験管に入力された静脈からの血液, EDTAを含む溶液中で, およびその他の中 - EDTAと同じ溶液の混合物 4 % ホルマリン溶液. バイアルに落ち着くの内容物を混合した後 30 室温で分.
沈降凝集体が沈降する時には, そして個々の血小板は上清に残ります. 立って各チューブに上清中の血小板の数をカウントした後に. 通常、両方のバイアルの内容物における血小板の量の差は、10〜15を超えません %, 高められた自発的な集合で、それが増加します.
方法H. アンド. Tarasovoj
Hの方法に従って. アンド. Tarasovoj (1984) シェーカー上での撹拌の3分のAVC-1の速度で90〜100回の後に計数クエン酸処理凝集体中の全血からの血小板の減少 1 M.
入ったチューブ 0,5 血液のミリリットル, 振とうに供され, 導入 1 ミリリットル 1 % 等張性塩化ナトリウム溶液でホルマリン溶液. 第二の管を振とう制御を行いません, そして血液は、同じテストを、その中に含まれます 3 明はまた、ホルマリン溶液を導入しました.
両方の管の支持者で血 30 M, 上清を血小板の数でカウントされた後、. 通常、血小板の差は超えないカウント 20 %, 凝集上昇傾向で、それが増加します.
基本的なテストのアプリケーションでの違反の場合には, 血小板の止血を特徴付けます, 追加の試験を実施するために必要な範囲で動作. これらのうち最も重要なものは以下の通りです.
さらなる研究は、血小板の止血を決定します
これらの細胞の形態を検討して脊髄造影および骨髄trepanateにおける巨核球の数を研究
骨髄切片における巨核球の数の有意な増加, 通常、血液中の血小板の数が、多かれ少なかれ顕著な増加と組み合わせ, eritremiiで観察, 出血および本態性血小板増加症および他の骨髄増殖性疾患. 適度なmegakariotsitoz, 血小板減少症と組み合わせ, 血小板減少性紫斑病の特徴 (特発性血小板減少性紫斑病).
任意の起源の骨髄の形成不全と低形成は、骨髄切片における巨核球の含有量として減少した場合, 末梢血中の血小板数.
部分amegakariotsitoz観察欠乏trombotsitopoetina (先天性血小板減少症のまれな形態), 血液antimegakariotsitarnyhにおける抗体の出現, 巨核球の本質的な部分形成不全 (白血病の発症に先行してもよいです).
多くの巨核球で観察された形態学的および細胞化学的変化thrombocytopathy.
血小板の超微細構造の電子顕微鏡的研究
血小板の超微細構造の電子顕微鏡研究は、いくつかのthrombocytopathyの診断のために重要です, ここで見つからないか、非常に高い光学濃度の非タンパク質顆粒の量を減少させました (ADPを含みます, セロトニン, カテコールアミン, カルシウムなどがあります。), またはタンパク質α顆粒, thrombocytopathy数の典型的です, ストレージプールの疾患群で団結, 疾患または顆粒の不在.
また、収縮装置の欠陥を検出することができます。 (微小管系) リソソームおよび血小板.
ノマルスキー光学系の干渉により、電子顕微鏡および血小板の研究をスキャンする場合は、外国の表面上の血小板の固定に欠陥を検出することができます, 彼らは彼女を拡散します, 出芽, 集中して顆粒分泌, これは多くの種類の典型的なものであるthrombocytopathy.
immunoflyuorestsentによる抗血小板抗体の決意- 血小板懸濁液の免疫グロブリンにおけるション研究, これらのセルに関連付けられています – ディクソン法
この複雑な方法は、免疫性血小板減少症および非免疫を区別することができます.
しかし、それは許容できない鋭い血小板減少症を伴う疾患の最も顕著な形態であります, 関連免疫グロブリンの定義については十分に大きいが必要です (40-50 Tで 1 L) 血小板数.
ライフ標識自家血小板の定義
ライフ標識自家血小板の血小板減少症を定義すると、循環中の血小板の正常な寿命を区別することができます (約 9 ナイツ) これらの細胞の寿命が短いと病気のとフォーム.
最初は、最も一般的には、骨髄における血小板産生の減少と関連しています, 第二 - その加速死と, または抗血小板抗体の効果を持ちます (自己免疫性血小板減少症血小板寿命は数時間に短縮され、), 集中的な凝集体中の細胞の減少および播種性血管内凝固、または大規模な血栓症における血栓または (血小板減少症の消費量).
血小板凝集率の前後の血漿中の含有量の定量決意
膜リン脂質因子 - 因子の血小板凝集番号前後の血漿中の含有量の定量決意 3, α顆粒の内容 (antigeparinovogo要因 4, B-тромбоглобулина, 分裂促進因子、血小板) 非タンパク質顆粒高電子光学密度 (セロトニン, カテコールアミン, ADF), そして酸加水分解酵素.
これらの研究は、適切な構造および構成要素の血小板のコンテンツのアイデアを与えます, 集計時のプラズマ中への放出, ならびにvnutriso- sudistoy血小板活性化, 最終的な緻密α顆粒中の成分の濃度を増加させ、血漿中の血小板の放出を伴います (antigeparinovogo要因 4, B-тромбоглобулинаидр。).
血小板因子の定量的な研究方法はthrombocytopathyの数の同定のために重要です (障害保全顆粒とそのコンポーネント, これらの成分の放出反応の不全麻痺, 内部の激しいに血漿のコンテンツの増加- 血小板および他の血管接着および凝集。). いくつかのtrombotsitopatyは、膜率の低下、血小板含有量を特徴とします 3 血液凝固に関与するその可用性の違反.
血小板の生化学的特徴およびそれらの個々の構造の研究
血小板の生化学的特徴およびそれらの個々の構造の研究 - 間質, 顆粒, ミトコンドリアとt. D. 酵素欠乏の特定のタイプの血小板の病状および障害の異なる種類の接続を文書化することを可能にします (COX欠乏症, トロンボキサンなど), 膜リポタンパク質の構造に違反して, 凝集剤と通信するために必要な, とt. D.
同様の研究は、設備の整った研究室利用可能であり、従って一般的には適用されません.
