貧血, グルコース-6-リン酸脱水素酵素の活性の欠乏

赤字活動グルコース-6-fosfatdegidrogenazы (G-6-FD) - 赤血球の最も一般的な遺伝子異常です, 溶血性危機の結果, 多数の薬物を服用に関連します 手段. 総報酬の状態を経験した患者の大部分において危機外, 個々のは、恒久的な場所溶血性貧血を有しているが.

G-6-PDの最初の記述赤字活性がで行われました 1956 G. 人では, 予防的抗マラリア薬のプリマキンを服用. かかわらず、これらの研究の 1957 G. これは、患者の赤血球中のG-6-PDの不足を発見しました。, 定期的に任意の薬を服用することなく、溶血性危機を観察します.

現在、より多くの説明 250 mutantnyh異なる形のG-6-FD. それらは、酵素の電気泳動移動度が異なります, グルコース-6-リン酸とnikotinamidadenindinukleotidfosfatu - メディアに関連したエゴ (NADF) 減少した親和性の結果がで不十分な酵素活性であります, 基質の濃度は、厳密に前の反応で、その形成の速度によって制限されている場合. 活性の欠如は、多くの場合、そのような、また存在する場合でも、例として、酵素の損失を意味していません. ほとんどの場合、不在または酵素活性の低下 - 非アクティブの病理学的な形で彼の患者の存在の結果.

構造遺伝子および遺伝子制御, G-6-FDのobuslovlivaûŝie合成, X染色体上に位置します, しかし、赤血球中のこの酵素活性の継承欠乏は常にX染色体と係合.

変異体には主に2つの形式があります, ここでのアミノ酸置換は、活性中心に関連していません, したがって、両方の広範囲の変異が正常です. 彼らは、電気泳動移動度が異なります, しかし、基材への親和性、彼らは同じようにしています. 現代の命名法では, これらのいずれかの形式, ヨーロッパでは一般的な, BBはフォームと呼ばれます, およびその他の, アフリカで発見 - A型. 現在記載され、他の変異型, また、機構パラメータによって互いに異なるなかった人, しかし、異なる電気泳動移動度を有します.

クラッチ酵素の床は、症候性疾患のある者のうち、男性の重要な優位性を与えます. これは、ホモ接合の雄で観察されます, 彼女のX染色体と母親から継承されたこの病理, ホモ接合女性 (両方の親から病気を継承) およびヘテロ接合の女性の一部, 表現の変異体の表現型と親から病気を継承.

よくあるG-6-PDの赤字活動は、ヨーロッパで発生, 地中海沿岸に位置, ギリシャ, イタリア, だけでなく、いくつかのラテンアメリカ諸国で, アフリカなど.

多分, 集落数の異常な遺伝子の非常に高い蓄積は近親結婚の習慣に寄与していること, これはホモ接合の女性の人口の蓄積につながります, 多くの場合、疾患の重篤な臨床症状を与えます, ヘテロ接合キャリアより, 出生ホモ接合男性の可能性を増大させます, また、広くこれらの場所熱帯熱マラリアで過去に使用.

現在の仮説によれば、, 人, G-6-PDの赤字と, 簡単に熱帯熱マラリアを容認せず、めったに疾患で死亡します. この仮説を支持して女性のヘテロ接合赤血球の中で寄生虫の不均等な広がりの事実であります. それが発見されました, 寄生虫のはるかに大きい量を含んで、正常細胞では, 欠損より. この疑惑の事実のための2つの説明があります。. これらの最初の: G-6-PDの赤血球赤字は寄生虫の影響に耐えることができないが、すぐに貪食マクロファージに分割します, ここで彼はマラリア原虫を殺しました. 別のビューには、寄生虫還元型グルタチオンの開発のためのneobhodmost示唆します, 赤血球欠損G-6-PDに低減された量.

病因と病理発生

薬物曝露の第一段階 - 体内での変換, 活性型への移行, 赤血球の膜の構造の変化を引き起こす可能性があります. 薬剤の活性型は、オキシヘモグロビンと反応. これは、過酸化水素の一定量を生成します.

中和にいくつかの部分の過酸化物を使用して、還元型グルタチオンペルオキシダーゼシステム, 還元反応は、グルタチオンを酸化されます.

健康な人では、急性溶血性危機は、薬物、かなりの量の導入と開発します (toksicheskaya線量). 危機はときに発生する可能性があります, 還元型グルタチオンのシステムが複雑に形成され、酸化型グルタチオンの過剰に対処することができないとき. グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼおよびNADP障害回復の欠乏に, グルタチオン還元酵素の正常な活性にもかかわらず、, 彼の回復に違反, いかなる通常の水素源がないため. 還元型グルタチオンは、薬物の従来の治療用量の酸化作用に抵抗することはできません. これは、ヘモグロビンの酸化につながります, ヘモグロビン分子のヘムの損失, グロビン鎖の沈殿. 赤血球由来の脾臓細胞は、ハインツをリリース. 同時に、赤血球の表面の一部を失っ, これは彼らの死につながります.

溶血性貧血の病因における, ソラマメの摂取に関連しました, より多くの無名の. Primahinovaya貧血 (favizm) これは、G-6-PDの唯一のいくつかの個体活性欠損を開発. 多分, 貧血の症状のための2つの酵素の欠陥の組み合わせを必要とします. 多分, それはいくつかの個々の有害物質を中和するの欠如であること, ソラマメ豆に含まれます, または代謝産物の形成, 赤血球のスルフヒドリル基に障害を引き起こします. 馬の豆の少量を受け、健康な個体では重度の溶血性貧血を引き起こします, 還元型グルタチオンの赤血球の存在下での代謝物の毒性効果を中和することができるので. この赤字の継承, 明らかに, 常染色体優性. 体内の有害物質の異常な変換の組み合わせで, ソラマメ豆に含まれます, G-6-PDショー臨床徴候の活性欠損ソラマメ中毒.

臨床症状

専門家は4つのクラスに赤血球中の活動のホモ接合とレベルの患者の臨床症状に応じて、G-6-PDの変異体を分割している者、.

一流 - [オプション], 慢性溶血性貧血を伴います.

2級 - G-6-PDの赤血球0-のレベルにオプション 10 % 基準から, 溶血性貧血の原因となるキャリッジには危機ではありません, そして、危機, 薬を服用またはソラマメを飲むに関連します.

第3種 - 赤血球10-60で活動レベルを有する変異体 % 基準から, 光は、臨床症状を観察することができます, 薬物の摂取に関連しました.

4年生 - 活動の正常または正常に近いレベルのオプション, 臨床病理学を伴いません.

出生時に、子供は溶血性貧血を持っています, 最初に関連します, G-6-PDの第二のクラスの欠乏.

赤血球中のG-6-PDの活性のレベルは、常に臨床症状の重症度と相関しません. 多くの実施形態では、第一のクラスは20~30決定されます % 酵素活性のレベル. 一方, 一部の患者では活動のゼロレベルでは臨床症状を示さありません. これが原因であります, 最初は, 酵素の性質を持つlutantnyh, 第二に, 最も可能性が高いです, 医薬品装置肝チトクローム患者の中和の速度で.

G-6-PDの活動の最も一般的な欠乏は、特別な挑発溶血性危機のない臨床症状を提供していません. ほとんどの場合、溶血性危機がスルホンアミドを受信した後に始まります (norsulfazola, streptotsid, sulьfadimetoksina, ナトリウムsulfatsil, etazola, biseptola), 抗マラリア薬 (プリマキン, xinina, akrihina), ニトロフラン薬 (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOK, nevigramona), イソニコチン酸の薬 (tuʙazida, ftivazida), PAS-ナトリウム, そして、ニトログリセリン.

G-6-PDの抗マラリア活性の欠乏からdelagilを割り当てることができます, サルファ剤の - ftalazol. 薬の数, 大きな用量で溶血性危機を引き起こします, 小用量でG-6-PDの不足活動で使用することができます. これらには、アセチルサリチル酸を含みます, amidopirin, fenatsitin, levomicetin, ストレプトマイシン, 抗糖尿病サルファ剤.

すべての薬, 溶血性危機を引き起こす可能性があります, ヘモグロビンの変性は分子状酸素で酸化触媒.

疾患の臨床症状は、薬物治療を開始してから第二または第三日に発生する可能性があります. まず、強膜のわずかな黄疸があります, 暗色尿. 重度の溶血性危機のこの期間中の薬物の終了時に発現しません. 治療が続けば、, 溶血性危機の4-5番目の日は、黒や茶色、時々尿のリリースで発生する可能性があります, 血管内溶血と関連しています. ヘモグロビンは、2-3によって低減することができます %.

重度の疾患に体温が上昇, 鋭い頭痛が表示されます, 四肢の痛み, 嘔吐, 時々 - 下痢. 息切れがあります, 血圧低下. 多くの場合、増加した脾臓, 時々 - 肝臓.

まれに、腎不全を発症します, 腎臓ろ過の急激な減少や血栓によって尿細管閉塞へ.

検査所見

血液分析では増加した網状赤血球と貧血を認めました. 骨髄へのシフトで白血球数が増加しています. 一部の患者では、, 特に小児で, 白血球数は、時として有効数字に上昇することができ (100 Tで 1 lであり、より). 不変の血小板数. 重度の溶血性危機の間クリスタルバイオレット赤血球で染色したときハインツ小体の多数を明らかにしました.

鋭い刺激赤い成長骨髄を明らかにしました. 遊離ヘモグロビンの血清の含有量を増加させます, 間接によるビリルビンの多くの場合、高レベル. ベンジジンサンプルと赤血球なしで、尿中のヘモグロビンの存在を明らかにしました, 時々ヘモジデリンを発見.

グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ溶血観察拘束の欠乏のいくつかの形態において、, T. それはあります. 溶血性危機改, にもかかわらず, 患者が薬を服用し続けていること, その原因と溶血性危機. 網状赤血球中の酵素活性のほぼ正常レベルにまで増加した数によって引き起こされる溶血の自己制限する機能. それのほとんどの形態では大幅に削減されます.

小児では、重度の溶血性危機はより頻繁に発生します, 成人より. G-6-PDの活動の著しい不足で時には彼らは、出生直後に発生. 新生児のこの溶血性疾患, 免疫学的紛争に関連していません. それはハードだけで発生する可能性があります, 溶血性貧血など, 母体と胎児のためにrezusnesovmestimostyu. 重度の神経学的症状を伴う核黄疸のおそらく存在.

この危機の病因は、研究されていません. それが見つかりません, これらの危機が原因で出生時またはそれらの原因酵素グルタチオンペルオキシダーゼの生理活性の欠如に自然に発生するかどうかは、子のへその緒を処理する際に、特定の防腐剤の使用であります. 多分, いくつかの薬を服用母親に関連するものは、時には危機.

ある場合には G-6-PDの活動の溶血性危機の欠乏は、感染症の背景に生じます: インフルエンザ, サルモネラ症, ウイルス性肝炎. 危機は、糖尿病におけるアシドーシスや腎不全のようにトリガすることができます.

G-6-PDの活性の欠乏を有する患者のわずかな割合は、一定の溶血性貧血を観察しました, 薬を服用に関連します. これらのケースでは、脾臓のわずかな増加があります, 網状赤血球含有量の高い適度な正色素性貧血, 骨髄およびビリルビンにerythrokaryocytes. 病気の悪化は、上記の薬を服用した後のいずれかで可能です, または感染症の背景に.

診断法

この疾患の診断のための基礎は、発端者及び家族におけるG-6-PDの赤血球の酵素活性の決意であります. 定性的方法, この目的のために使用, 最も簡単な方法のうちの2つをお勧めする必要があります.

メソッド バーンスタイン それだけでなく、すべての雄ヘミ接合でG-6-PDの活性の欠乏を診断することができます, ホモ接合女性, しかし、いくつかはヘテロ接合女性におけるこの酵素の欠乏の程度を推定. この方法は、いくつかを識別することが可能です 50 % ヘテロ接合の女性. この方法の利点は、フィールド条件の集団のマススクリーニングにおける使用のためのその適合性であります.

この方法は、再構成された染料2,6-ジクロロときの漂白に基づいています. NADP-Hを形成するために、グルコース6-リン酸およびNADPの再構成のG-6-PD酸化の存在下で. この物質は、フェナジンメトサルフェートを復元, 今度は2,6-ジクロロを復元します. フェナジンメトサルフェートは、色素にNADPHから電子の非常に積極的なキャリアとして反応に作用. 数時間フェナジンメトサルフェート反応が進行せず, そして、フェナジンメトサルフェートの存在下で変色がで発生15- 30 M.

試薬.

1. ソリューションNADP: 23 MG NADPに溶解 10 mlの水.
2. グルコース-6-リン酸の溶液 (G-6-F): 152 グルコース-6-リン酸のナトリウム塩のmgの中に溶解させ 10 mlの水. グルコース-6-リン酸のバリウム塩は、以前にナトリウム塩に変換されなければなりません. このように秤量 265 グルコース-6-リン酸のmgのバリウム塩, 中に溶解し 5 mlの水, 加えます 0,5 ミリリットル 0,01 M塩酸溶液と 1 乾燥硫酸ナトリウムmgの. 沈殿物を遠心分離し. 上澄み液を中和しました 0,01 M水酸化ナトリウム溶液および蒸留水で調整 10 ミリリットル.
3. フェナジンメトサルフェートソリューション: 2 中に溶解フェナジンメトサルフェートmgの 100 mlのトリスバッファ 0,74 M; pH値 8,0.
4. 2,6-ジクロロフェノールの染料溶液 (ナトリウム塩): 14,5 染料のMGに溶解し 100 トリス - 塩酸mlの緩衝液 (0,74 M; pH値 8,0). 緩衝液から調製されます 1,48 単にMトリスgidroksimetilaminometanaを伴います (42,27 のD 250 mlの水) と 1,43 塩酸のM溶液 (2 アンプルfiksanala, 含まれています 0,1 EQ, 水で調整 135 ミリリットル). K 230 mlのトリスgidroksimetilaminometala追加しました 110 塩酸のミリリットル, pHをに調節します 8,0 そして水を加え 460 ミリリットル.

適用する前に、試薬の混合物: 1 いいえ. NADPソリューション (1), 1 いいえ. 溶液G-6-P (2), 2 いいえ. フェナジンメトサルフェートソリューション (3) と 16 いいえ. 2,6- dihlorfenolinodofenolaのソリューション (4).

メソッド.

チューブ, 含まれています 1 mlの蒸留水, 貢献します 0,02 血液のミリリットル.

追加された溶血の発症後 0,5 mlの試薬. 結果はを通じて考慮されます 30 M. この反応は、染料の完全漂白と、正常とみなされています. どこ, 色素の変色がない場合 (これは、青緑色のIカラー強烈です), 応答が大幅に陽性と評価されます. 色の強度が減少した場合, しかし、青緑色です, 反応はポロ陽性とみなされます. どこ, 明らかな変色があった場合に, しかし、対照群と比較した場合には、緑がかったままでした, プラスマイナスなどの反応について.

Rezkopolozhitelnye陽性反応 ヘミ接合男性とホモ接合の女性に起こります. 時々、ヘテロ接合の女性が陽性反応を与えます, ほとんどのプラスマイナス. ほかに, プラスまたはマイナスの反応は時々病気や薬の背景に酵素活性の一部の減少と完全に健康な人で観察されます. プラスマイナスの反応は、あなたが女性で溶血性貧血の存在が疑われる場合にのみ考慮されるべきである、と酵素定量法の活性をチェックします, グルコース-6-リン酸脱水素酵素の活性の欠乏. それは考慮に入れ、プラスマイナスされるべきではないマススクリーニングでの反応.

偽陽性反応 それにより、実際に貧血を有する患者において発現させることができます, 何 0,02 血液のミリリットル, 管に導入, これらは、赤血球の少量を含有し, 従って, 酵素の少量. この場合には、蒸留水を含むチューブは、2つまたは3つのピペットに追加されるべきです (上 0,02 ミリリットル) 血, チューブの色に染料を添加する前に、コントロールと異なりません.

蛍光スポットの方法 ボイトラー иミッチェル 特定の蛍光に基づいて、それは、長波長紫外線ではNADPを減少しました (440 - 470 NM), 固定点で視覚的に評価.

試薬.

1. Tris-HCl緩衝液 0,5 M; pH値 8,0: 60,55 トリスに溶解 800 mlの蒸留水, 加えます 20 濃HCl mLの, pHに調整 8,0 経由 2 M HCl及び水を補充 1 ミリリットル; ストアへの解決策 36 4℃での日.
2. グルコース-6-リン酸の溶液 20 M: 6 mgのナトリウムグルコース-6-リン酸に溶解されました 1 mlの蒸留水; 食べます 2 4℃での日.
3. ソリューションNADP 10 M: 8 MG NADPに溶解 1 mlの蒸留水; 食べます 10 温度での日 4 °C.
4. サポニンの水溶液 1 % 食べます 20 温度での日 4 °C.
5. 酸化型グルタチオンの溶液 (10 ミリリットル): 2,4 グルタチオンのMGに溶解し 1 mlの蒸留水; 食べます 10 4℃での日.

メソッド.

間違いなく準備ができてインキュベーション混合物の前に, 混合 1 いいえ. グルコース-6-リン酸の溶液, 1 いいえ. OVER-F溶液, 2 いいえ. サポニン溶液, 5 いいえ. バッファ 1 いいえ. グルタチオン溶液. 血 (0,01 ミリリットル) バイアルまたは細胞血球凝集ボードで導入され、追加 0,2 mlのインキュベーション混合物. スルー 15 分マイクロピペットは、一滴のインキュベーション混合物を選択しました (0,02 ミリリットル) 各試料から10〜12 mmの直径のスポットの形でクロマトグラフ紙にそれらに適用されます. スポットは、室温で空気中で乾燥させ、そして蛍光を評価するために紫外線を閲覧しました. コントロールは、既知の正常な血液のサンプルです. 品質管理試薬は、血液が含まれていません.

結果の評価.

蛍光の欠如は活動がないに対応, 蛍光の存在 (強い青色の輝き) - 活性の存在, ほのかな輝き - 反応中間体. 実験方法の条件に従うことは、偽陰性の結果を与えるものではありません. 偽陽性診断のソースは、重度の貧血から調査することができます, しかし、はるかに少ない程度に, Bersteinの方法より. でも重度の貧血で中間反応を観察しました, 蛍光のない不足.

G-6-PDは、ヘミ接合性およびホモ接合性の患者においてのみならず、活性の低下を識別することを可能にするの活性を決定するための定量法を用いて, しかし、女性のヘテロ接合体の中. なぜなら, 網状赤血球数及び色成分は、酵素活性のレベルに影響を与えること, それを考慮にこれらの指標を取って、結果を修正することをお勧めします.