Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemia, dovuta all'attività di deficit di piruvato chinasi di globuli rossi

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemia, Related deficit di eritrociti piruvato chinasi - una forma relativamente rara di anemia emolitica, che viene ereditato in modo autosomico recessivo, Dà manifestazioni cliniche in omozigoti, procede con segni di emolisi intracellulare, macrocitosi di eritrociti, basso contenuto di potassio. Ci sono più di 200 casi di portatori omozigoti di attività deficit piruvatkinaznoy.

Patogenesi

Piruvato chinasi è uno degli enzimi, concludendo glicolisi. Questo glicolisi link ATP formato nikotinamiddinukleotid. La maggior parte dei pazienti con carenza di piruvato chinasi attività viene ridotta nel contenuto dei globuli rossi di questi due metaboliti, In alcuni casi, il contenuto di ATP è normale, ma disturbato la stabilità di ATP durante l'incubazione. Normali livelli di ATP trovate a significativo reticolocitosi. Ciò è dovuto alla presenza di reticolociti e la possibilità di ATP mitocondriale non solo attraverso la glicolisi, ma anche per la fosforilazione ossidativa.

La conseguenza della carenza di piruvato chinasi È anche l'accumulo dei prodotti della glicolisi, formata in fasi precedenti - fosfofenolpiruvata, 3-fosfoglicerato, e soprattutto 2,3-difosfoglicerato. Piruvatanlaktata Contenuti diminuisce nei globuli rossi.

La mancanza di ATP in eritrociti deficit di piruvato chinasi Essa porta alla rottura della funzione dei globuli rossi pompa ATP-aznogo e alla perdita di ioni potassio, in cui la concentrazione di ioni di sodio negli eritrociti di non crescente. Questo provoca una diminuzione del contenuto di ioni monovalenti negli eritrociti, disidratazione della cellula e del suo ritiro. Questo fenomeno è chiamato dessikotsitoz. La diminuzione dei globuli rossi di acqua complica il processo di ossigenazione e di ossigeno rilascio dall'emoglobina. A questo proposito, certo ruolo compensatorio svolto da un accumulo significativo negli eritrociti di 2,3-acido difosfoglitserinovoy.

L'affinità dell'emoglobina per l'ossigeno è ridotto dalla sua interazione con 2,3-difosfoglicerato. Da qui, a concentrazioni più elevate di 2,3-difosfoglicerato restituisce ossigeno ai tessuti è facilitato.

Le manifestazioni cliniche dell'attività di carenza di piruvato chinasi

Le manifestazioni cliniche di attività chinasi carenza di piruvato dipendono dal grado di emolisi. In alcuni casi, aumentata emolisi si manifesta alla nascita ed è accompagnata dalla presenza di grave crisi emolitica, causando la necessità di trasfusioni di sangue per mantenere l'emoglobina a livelli sub-normale. In altri casi, la malattia può verificarsi quasi asintomatica con i primi segni di maggiore emolisi (sclera subikterichnost e pelle) di età compresa tra 17-30.

Generalmente; rispetto al microspherocytosis, deficit di piruvato chinasi ha un più grave.

Quasi tutti i pazienti con milza palpabile. Il leggero aumento dei suoi comunicati alcune anomalie portatori eterozigoti, anche se hanno l'anemia, generalmente, mancante. Un certo numero di pazienti possibile splenomegalia. Un aumento significativo nel fegato raramente. Nei pazienti con ulcere degli arti inferiori isolati identificati.

Indicatori di laboratorio di attività di carenza di piruvato chinasi

La maggior parte dei pazienti con deficit di attività piruvato chinasi osservata anemia moderata (4,34- 6,21 mmol / l, o 70-100 g / l), Tuttavia, durante la crisi emoglobina può essere ridotto a 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Contenuto eritrotsitov- 2.5-3.0 T 1 l. Crisi emolitica può essere causata da un'infezione. Ci sono casi di aumento di emolisi durante le mestruazioni.

I globuli rossi di pazienti con deficit di piruvato chinasi caratterizzata da macrocitosi con normohromiey, lieve anisocitosi e poichilocitosi. C'era una fiera policromatofilia. A volte trovato mishenevidnye globuli rossi e globuli rossi con bordi frastagliati o sotto forma di gelso, spesso identificato basofili eritrociti punktatsiya, Corpuscoli Jolly. Alcuni pazienti nel sangue periferico rivelato un numero significativo di erythrokaryocytes, durante la crisi, può essere aumentata fino a 60-70 %. ESR, numero di globuli bianchi, leukogram, conta piastrinica all'interno del range di normalità. Come con altre forme di anemia emolitica, nel midollo osseo ha rivelato una irritazione tagliente germe rosso emopoiesi.

Il livello di bilirubina, generalmente, aumentata a causa indiretta.

L'emoglobina plasmatica libera normale, ma può essere ridotto livelli di aptoglobina. Emosiderina nelle urine è assente. Contenuti di emoglobina fetale e dell'emoglobina A₂ all'interno della gamma normale.

Resistenza osmotica di carenza di eritrociti piruvato chinasi nella maggior parte dei casi normali, a volte ridotto dopo giorni di incubazione. Autogemoliz, generalmente, aggiornato a vari livelli. Ci sono casi di carenza di piruvato chinasi con autogemolizom normale. Nella segnalati casi di carenza di piruvato chinasi è stato di tipo II registrati autogemoliza, corregge l'aggiunta di ATP, e non correggere o leggermente correggere l'aggiunta di glucosio. Successivamente, molti casi sono stati descritti con deficit di tipo enzimatico I autogemoliza o nessuna. Pertanto, non è consigliabile applicare il metodo autogemoliza per la diagnosi differenziale delle anemie emolitiche. La durata della vita dei globuli rossi con carenza di attività piruvato chinasi è sempre accorciato.

Tipo eredità attività piruvato chinasi autosomica recessiva. Eterozigoti praticamente sani, Secondo diversi ricercatori, la gravità del deficit hanno spaziato da 50 a 70 % norme.

L'attività diagnostica di carenza di piruvato chinasi

La diagnosi di deficit di piruvato chinasi di globuli rossi può essere previsto per fornire in caso di anemia emolitica, scorre negli anni con l'aumento della milza, la mancanza di periferiche sangue strisci segni microspherocytosis, elliptotsitoza e stomatotsitoza.

Test qualitativi per determinare l'attività di piruvato chinasi. A tale scopo, il metodo è ampiamente utilizzato macchia fluorescente, basato su, che nel corso della reazione, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid ossidato e la fluorescenza scompare.

L'attività di piruvato chinasi in individui sani variava da 4,0 a 7,7 mmol (min / 1010 eritrociti) o 4,0 a 7,7 Potenza. La maggior parte dei omozigote attività enzimatica malattia meno 1 Potenza. Tuttavia, ci possono essere casi lieve calo dell'attività dell'enzima. La diagnosi di una rara forma di anemia emolitica è molto difficile, e una diagnosi può essere fatta solo nello studio della cinetica enzimatica.

La diagnosi differenziale di anemia emolitica, associata a carenza di piruvato chinasi

La diagnosi differenziale di anemia emolitica, associata a carenza di piruvato chinasi, necessario svolgere altre forme di anemia emolitica ereditaria.

Poiché la maggior parte dei pazienti con deficit di attività piruvato chinasi a differenza di individui, microspherocytosis sofferenza, elliptotsitozom, stomatocitozom, anemia emolitica, carrozza condizionata emoglobina instabile, e la malattia la talassemia è ereditata come autosomica recessiva, che questa patologia si trova solo nella stessa generazione e quasi mai visto tra i genitori.

Quando l'anemia ereditaria, carrozza condizionata emoglobina instabile, soprattutto nella malattia grave, a volte probando è il primo vettore della mutazione, e quindi la malattia viene trasmessa alla generazione successiva. Pertanto, la diagnosi differenziale deve essere effettuata con emoglobinopatie, carrozza condizionata emoglobina instabile, nonché recessivo anemia emolitica ereditaria, causato dalla carente attività di altri enzimi.

Essa svolge un ruolo di supporto stabilità emoglobina, elettroforesi Yego. Per escludere altri fermentopathia indagato l'attività di altri enzimi di eritrociti, e di escludere anemia emolitica autoimmune portato Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Metodo fluorescente per determinare l'attività da piruvatkiiazy Beutler

Reagenti.

1. Acido Fosfoenolpirovinogradnaya (sale tritsiklogeksilammoniynaya) 0,15 M soluzione di, neutralizzato a pH 7,0-8,0 0,2 Soluzione M di NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M soluzione di, neutralizzato (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M soluzione di, neutralizzato (0,1 ml).
4. Solfato di magnesio 0,08 M soluzione di (0,1 ml).
5. Tampone fosfato di potassio 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Acqua Distillirovannaya (0,62 ml). La miscela può essere conservato a - 20 ° C non è più di una settimana.

Metodo.

Per ricerche uso del sangue, preso con eparina o citrato di sodio. Si è centrifugato, aspirato e preparare al plasma 20 % sospensione di globuli rossi aggiungendo quattro volumi di soluzione di cloruro di sodio isotonica.

Sospensione di eritrociti in quantità 0,02 ml viene miscelato con 0,2 ml di reagente e incubate per 30 minuti a 37 ° C. Una goccia è stato posto sulla carta da filtro, e la navigazione nel fluoroscopio. Fluorescenza basale è stata rilevata subito dopo l'aggiunta degli eritrociti alla miscela prima dell'incubazione. Normalmente dopo 30 min di incubazione scompare, e l'attività dei resti carenza di piruvato chinasi. Questo è, NADH che reagisce sotto l'influenza della radiazione UV nella zona, vicino al visibile, considerando NAD non fluorescenza. Poiché la soluzione di cui sopra è instabile e facilmente degradato, richiede il monitoraggio. È necessario separare con attenzione lo strato di cellule bianche del sangue, poiché l'attività di piruvato chinasi carenza di eritrociti attività enzimatica nei leucociti può essere normale.