Metodi per la rilevazione di Leishmania nel raschiatura dei tessuti colpiti da isolamento di coltura pura

Quando si semina raschiando il tessuto malato del paziente ad uno specifico mezzo nutritivo Leishmania moltiplicare e possono essere rilevati mediante microscopia.

Reagente

Среда W.W.W. per la coltivazione di Leishmania (14 g agar, 6 g di cloruro di sodio, di 150 ml di sangue coniglio defibrinato, preso direttamente dal cuore prima di preparare medio, 900 ml di acqua distillata). In acqua distillata è stato aggiunto cloruro di sodio e agar. Il pallone contenente il terreno è stato riscaldato fino alla completa fusione del agar, e 20-30 min sterilizzato in uno sterilizzatore a vapore a 147,1 kPa (15 a).

Raffreddato a 56 ° C agar aggiunto sangue coniglio defibrinato sterile, agitata ruotando il matraccio e riempito in pipetta sterile 4 tubi ml. Flask agar sangue durante erogazione è un bagno d'acqua a temperatura 58 ° C. I tubi con le punte medie.

Dopo la solidificazione del agar, vengono poste in un incubatore per un giorno 37 ° C per il controllo della sterilità e la ricezione del condensato liquido. Se sono ottenuti non è sufficiente, prima della semina in fiale sterili, è possibile aggiungere su 1 Un ml delle seguenti soluzioni: 0,85 % cloruro di sodio, 1 % soluzione peptone, Soluzione Hanks, lattoalbumina idrolizzato o altri supporti di nutrienti in concentrazioni isotoniche.

Metodi di rilevamento Leishmania in raschiamenti di tessuti affetti da isolamento di coltura pura

Quando si seleziona una cultura seguire attentamente le regole di sterilità. L'area di prova della pelle è pulito con un batuffolo di cotone, inumidito 70 % alcol.

Dopo evaporazione dell'alcool la punta di un bisturi sterile oftalmica incisione lunghezza tubercolo 2-3 mm. Dal fondo del taglio con pipetta Pasteur sterile non raschiando tessuto. Il conseguente calo di liquido sieroso ematica è stato trasferito in una provetta con l'ambiente. La manipolazione è effettuata più volte, materiale semina ogni volta che un nuovo tubo. Tappi per le orecchie inclusi in paraffina o messi loro cappucci in gomma e collocato in un incubatore a 22-24 ° C.

Valutazione dei risultati

Colture vengono esaminati al microscopio su base giornaliera per identificare l'agente eziologico. Esplora farmaci nativi, preparato con il metodo di gocce schiacciate, с объективом 40×40. I risultati sono considerati negativi semina, se in 40 giorni patogeno non è stato trovato. Le culture sono allungate Leishmania (10-12 Micron con cablaggio).

L'applicazione del metodo colturale è molto utile quando tubercoloide forma di leishmaniosi, diagnostica che altri metodi possono essere meno efficaci.