Lo studio della coagulazione del sangue

Metodi di analisi della coagulazione del sangue includono i seguenti gruppi:

1. Indicativo (generale), dare un'idea della stato dell'intero cascata coagulativa nel suo complesso e le sue fasi individuali (registrazione può essere fatto visivamente o da singoli dispositivi - koagulografa, tromboelastografia e altri.);
2. differenziando deficit dei singoli fattori - test di coagulazione correttive, Prove miscelazione studio del plasma sanguigno plasma di pazienti con deficit notoriamente noto di alcuni fattori;
3. quantificazione dei singoli componenti sulla loro attività funzionale (test di coagulazione, studi e altri substrati cromogeni) e (o) sui marcatori immunologici;
4. identificazione di attivazione intravascolare di coagulazione del sangue e fibrinolisi sulle caratteristiche funzionali o marcatori molecolari tale attivazione - identificare circolanti fattori della coagulazione attivati, prodotti degranulazione piastrinica, frazionamento dei componenti della coagulazione del sangue o loro metaboliti, emergere di nuovo marcatore antigenica attivato fattori e dei loro complessi, metabolizzazione etichettato componenti accelerati di coagulazione del sangue (ridurre il periodo della loro emivita in circolazione).

Quindi, per valutare lo stato di coagulazione del sangue vengono utilizzati correttamente Metodo di coagulazione (laboratorio e strumentale), che costituiscono la base del processo diagnostico, e immunologica, Radionuclidi e altri tipi di ricerca. In molti casi, i componenti possono essere definiti come attività funzionale, e immunologicamente - il contenuto dell'antigene rilevante nel sangue. L'uso concomitante di queste tecniche ci permette di differenziare le forme di patologia, legati alla mancanza di sintesi del rispettivo fattore di coagulazione (in questo caso lo stesso che viene abbassato attività funzionale, e la quantità di antigene), e forme, in cui la molecola è sintetizzata fattore, ma è anormale e funzionalmente difettoso.

Per fare riferimento al numero delle prime forme del fattore rilevante è aggiunto il segno "-" (ad esempio,, VIII-, IX- e T. d.), e la seconda - segno "+" (ad esempio,, VIII +, IX +).

Ruvido (generale) test di coagulazione

Determinazione del tempo di coagulazione

Determinazione del tempo di coagulazione (Un metodo preferito di Lee-White) - Lunga usato bystrovypolnimy (al letto del paziente) prova orientativa, permette di individuare significativi disturbi emorragici, associata con un deficit di fattori della coagulazione (oltre Fattore VII) o con l'effetto di anticoagulanti e fibrinolitica. Viene utilizzato come guida per la prova e di controllo di eparina, eliminazione di eparina solfato di protamina. Il test è relativamente bassa sensibilità, le sue figure sono rotti solo in marcata diminuzione fattori della coagulazione del plasma (sotto 4-5 %), e quindi inadatto per la rilevazione di forme lievi di emofilia A e B, così come disturbi emorragici quando angiohemophilia, Carenza di fattore XI, prekallikrein, e ad alto peso molecolare chininogeno. Per queste ragioni, il test non può essere usato per pazienti preoperatori: in prova normale svolgimento (5-10 Minuti) si può verificare profuso sanguinamento postoperatorio.

Plasma tempo ricalcificazione

Plasma tempo ricalcificazione - test non standardizzati bassa sensibilità, meno affidabile per rilevare hypocoagulation, che per tutto il tempo di coagulazione del sangue. Non può essere raccomandato per la diagnosi di disturbi dell'emostasi.

Il attivata tromboplastina parziale tempo, plasma

Il attivata tromboplastina parziale tempo, plasma (APTT, Test caolino-kefalinovыy) - Metodo altamente sensibile, rivelando il processo di coagulazione del sangue quando si esegue il meccanismo interno. Selettivamente sensibile alla carenza dei fattori della coagulazione del plasma (a causa della carenza di piastrine e fattori 3 Piastrinica con compensazione somministrato esternamente o Cefalonia eritrofosfatidom).

E 'utilizzato per monitorare la terapia con eparina, visita pre-operatoria dei pazienti, ecc. d. I valori standard dipendono dai campioni kephaline utilizzati, nella maggior parte dei casi fino a 37-50 (in modo ottimale - 37-45).

Caolino tempo plasmatica

Caolino durante plasma - prova, simile al precedente, ma senza l'aggiunta di kephaline plasma (eritrofosfatida), per cui è sensibile non solo alla carenza dei fattori della coagulazione di plasma, ma anche alla mancanza di fattore piastrinico 3 Piastrina. Valutazione preventiva attività di questo fattore può essere effettuata confrontando il tempo del plasma di test caolino con alto e basso contenuto di piastrine (norma - 57-70 con).

Si sconsiglia l'uso di componenti fosfolipidi, dando in tempi di coagulazione aPTT pari a 55 s e più, in quanto ciò riduce notevolmente la precisione e la riproducibilità dei test, compresa la determinazione quantitativa del fattore VIII e IX.

Tempo di plasma in silicone

Silicone tempo di plasma - un tempo ricalcificazione al plasma, con un conseguente silikonirovaniya ago, microtubi, pipetok, t. è. con il minimo di attivazione contatto. Il test è sensibile allo stato di ipercoagulabilità dell'attivazione intravascolare della fase di contatto di avviamento (fattori XII e XI), tuttavia, questa violazione si rivela più chiaramente definendo il tempo di coagulazione del sangue intero silicone (sulla base del Lee-White o tromboelastograficheskoy processo di registrazione siliconato cuvetta).

Valori standard dipendono studio silicone e determinato il sangue di persone sane per ciascuna delle sue campione separato. Nella scelta silicone è il migliore, che si estende al massimo grado di tempo di coagulazione (plasma).

Protrombina (tromboplastina) tempo di plasma

Protrombina (tromboplastina) tempo di plasma (Quick time, indice di protrombina) caratterizza il tasso di coagulazione del plasma sanguigno ricalcificato processo di avvio per un dispositivo esterno, t. è. aggiungendo tromboplastina cervello umano (o coniglio).

Tromboplastina attiva standardizzato su campioni misti di normale (prova) plasma. L'attività tromboplastina più comunemente usato con 12-18 (in tecnica classica con Kvika- 12-13). La tromboplastina debole, maggiore è il metodo di errore.

Nel plasma normale prova del tempo di protrombina aiuta a identificare il deficit isolato o cumulato del complesso di protrombina - VII, X, V e II, da cui tre fattori (VII, X e II) K-vitaminozavisimy e la loro attività diminuisce sotto l'influenza di anticoagulanti indiretti. A questo proposito, il test di protrombina è fondamentale nel controllo delle cumarine dosaggio (neodikumarin, o pelentan, sinkumar et al.) e altri farmaci di questo gruppo (fenilin).

Il tempo di protrombina è normale con un deficit di fattori di meccanismo interno di attivazione del protrombinasi - fattore XII, XI, IX, VIII (t. è. per tutti i tipi di emofilia e difetti Hageman), nonché la carenza di prekallikrein e chininogeno ad alto peso molecolare (VM kininogena)

Nella letteratura il diverso designazione dei risultati dei test di protrombina. Il più opportuno specificare il tempo di protrombina di studio e di controllo del plasma in secondi (fornendo le informazioni e l'attività di tromboplastina usata). A volte uso il rapporto tra questi due valori, t. è. indice (PV plasma studio, da ,)/(Plasma di controllo MF, da), (il tasso di 0,9-1,1).

Un'altra forma di valutazione di questo indicatore, che è il più usato nei laboratori, indice di protrombina è quello di calcolare la percentuale compilando le proporzioni aritmetiche di feedback (norma - 90-110%), Tuttavia, questo calcolo è sbagliato, perché tra la concentrazione di fattori di coagulazione e non ha tempo di coagulazione aritmetica, una dipendenza logaritmica. Inoltre, Test protrombina è sensibile solo a una diminuzione fattori di coagulazione sotto 50 % la loro dimensione normale. In virtù di questo espediente per utilizzare la determinazione dell'indice di protrombina percentuale dalla curva di diluizione (1:2, 1:4, 1:8 e T. d.) campione misto di plasma normale. Tale curva è costruita una volta per tromboplastine diverse attività iniziale (da 12 a 18 da) ed è determinata dall'indice protrombina nei pazienti studiati. Il vantaggio di questa tecnica consiste nel fatto che, che i risultati di tutti gli studi, compresi eseguita in dinamiche in giorni diversi, non corrisponde a differenti campioni di plasma sanguigno casuale normale, e fare la media degli stessi parametri standard, con conseguente metodo errore significativamente ridotto. Indici, ottenuto dalla proporzione e diluizione curva del plasma normale, non corrispondono gli uni agli altri. Questo dovrebbe essere considerato durante il monitoraggio l'effetto degli anticoagulanti indiretti, Per l'indice scendesse convenzionale 50 % corrisponde approssimativamente ad una riduzione della diluizione curva di indice per 25-30% • A questo proposito, l'analisi dovrebbe sempre specificare, Come è il rapporto di protrombina, quali sono gli standard di prestazione per l'attività della tromboplastina.

Plasma tempo di trombina

Plasma tempo di trombina, t. è. il tempo di coagulazione del plasma citrato con l'aggiunta di un'attività standard di trombina, Si tratta di un test importante per la valutazione della fase finale della coagulazione del sangue. Contabilità per questo indicatore è importante per la corretta interpretazione di tutti gli altri test di coagulazione, per violazione della fase finale della coagulazione del sangue deve inevitabilmente ad un allungamento del tempo di coagulazione in tutti i metodi di cui sopra.

Nella maggior parte dei casi, durante la prova, trombina usato questa concentrazione di soluzione di trombina, che, mescolato con un volume uguale di plasma sanguigno per la coagulazione dà 12- 18 da, ma il riconoscimento disfibrinogenemy utilizzato e le concentrazioni più deboli (portando ad una riduzione di 30-35 con).

Tempo di trombina - Un indicatore diagnostico importante, violazione del suo osservata come congenita, e quando l'acquisizione comune (secondario) gipoprotrombinemii, in più disfibrinogenemy, così come sotto l'effetto di eparina, Fibrinolisi Prodotto (PDF) e altri inibitori della auto-assemblaggio e antitrombine monomeri di fibrina. In virtù di questo tempo di trombina in primo luogo e sempre disturbato DIC acuta e subacuta, che svolge un ruolo importante nella diagnosi rapida di questa patologia.

Test Autokoagulyatsionny

Test Autokoagulyatsionny (Autorizzazione) - Un altamente sensibile in due fasi, Esso descrive il processo di coagulazione del sangue, quando è iniziato il meccanismo interno. Come il aPTT, test non è sensibile ad una carenza di fattore VII, ma allo stesso tempo la sua testimonianza non dipende dal contenuto di fibrinogeno (fattore I) nel siero in esame, come si differenzia da tutti gli altri campioni indicativi della coagulazione.

Un altro vantaggio consiste nel ACT, che il sangue diluito indagato, che aumenta notevolmente la sensibilità del test ad una carenza di fattori della coagulazione e, Inoltre, attuazione del ACP non richiede l'uso di caolino e kephaline, poiché la standardizzazione dell'attivazione contatto di fosfolipidi e ha realizzato un proprio emolisato di globuli rossi indagato.

SINTESI ACP è, in tale 2 ml di soluzione ipotonica (0,222 %) Viene aggiunto cloruro di calcio 0,1 ml di esame del sangue.

In questo emolisato-calcio si forma miscela e protrombinasi trombina, L'attività viene determinata aggiungendo sequenzialmente 0,2 ml di questa miscela di 0,2 Test plasma ml (ogni 2 min durante la prima 10 m, e poi - dopo ogni 10 min per 1 no).

Il plasma è la fonte del fibrinogeno indagato, che ha testato l'attività risultante in una miscela di trombina. Come dimostrato da numerosi studi, esso può essere sostituito da plasma sanguigno di esseri umani sani o soluzione di fibrinogeno. In questo caso, il flusso di sangue del paziente è ridotta a 0.1-0,2 ml (Può essere preso dal dito!), cosa trasforma prova autokoagulyatsionny in mikrokoagulyatsionny (MKT) e lo rende molto conveniente per uso pediatrico, compreso lo studio dell'emostasi nei neonati.

L'attività di coagulazione in ACT e l'ILC aumenta inizialmente in persone sane di solito raggiunge un massimo di 10 minuti, incubazione della miscela di calcio nel sangue (CCF), Quando si verifica il substrato coagulazione del plasma a 10 ± 1. Poi l'attività di coagulazione KKS comincia a declinare, Si indica che l'inattivazione della trombina formata in essa. Con Emofilia, l'azione di eparina e altre attività di coagulazione coagulazione del KKS drasticamente ridotto, e le mosse dal massimo al 10 'su una data successiva. Quando ipercoagulativo osservato prima e più significativo aumento dell'attività della trombina a CCS.

Nell'effettuare un test in vitro (definizione soli 10 minuti di incubazione, il CCR) può essere utilizzato per monitorare la terapia con eparina. Il vantaggio di questo metodo per testare il tempo di tromboplastina parziale attivata è, che livellato il diverso impatto su diverse cephalins tempo eparina coagulazione.

ACP Based (MKT) sviluppato un metodo semplice e accurato emofilie diagnosi differenziale.

Con i riferimenti citati nella conversione indicazioni tabelle ACT (MKT) può essere espresso in percentuale e graficamente - autokoagulogrammy.

Per stimare il numero di parametri generali sono ampiamente utilizzati coagulazione del sangue e metodi strumentali di indagine, principalmente utilizzando vari koagulografov e tromboelastografia.

Tromboelastografia non solo dà un'idea di parametri temporali della coagulazione del sangue o plasma, ma anche sulle proprietà meccaniche della struttura e formata coaguli. Negli ultimi anni, l'hardware e le modalità di registrazione introdotto standardizzazione e fosfolipidi contatto attivazione della coagulazione. Coagulazione anche stato creato per l'esecuzione di massa di test comuni della coagulazione - aPTT, protrombina, trombina e altra registrazione automatica dei risultati.

Metodi di differenziazione di vari carenza dei fattori della coagulazione e la loro determinazione quantitativa

La tabella seguente mostra i dati, che lo studio sperimentale di coagulazione del sangue con tre prove di base permette di deficit distinzione gruppo vario plasma fattori della coagulazione. Così, rallentando solo in protrombina test di coagulazione (I Tipo нарушения) quando tutte le altre indicazioni di caratteristica normale di un deficit ereditario del fattore VII o per ridurre il livello di questo fattore nelle prime fasi di sviluppo di ittero ostruttivo o nei primi 1-2 giorni di trattamento con anticoagulanti di azione indiretta, Quando la soppressione della sintesi di fattore VII è avanti nella sua riduzione sviluppo di tutti gli altri fattori di coagulazione K-vitaminozavisimyh.

La violazione del solo meccanismo interno della coagulazione, t. è. attivata tempo di tromboplastina parziale e gli ACP (II tipo), non vi è carenza di fattore XII, XI, IX, VIII, Villeʙranda (non in tutte le forme), prekallikrein e chininogeno VM. Di questi difetti di deficit del fattore XII di coagulazione ereditari, prekallikrein e chininogeno WM è estremamente rara e non è accompagnato da alcun sanguinamento, mentre il deficit di fattore VIII (Emofilia A), IX (Emofilia B) e il fattore di von Willebrand è molto comune (è maggiore di 96 % tutti i disturbi ereditari della coagulazione) ed è accompagnata da emorragie gravi. Tra di loro, in primo luogo e per condurre la diagnosi differenziale ulteriormente.

Carenza di fattore XI relativamente rara (circa 0,5-1,0 % Tutti emofilie), procede con una emorragia molto mite (per lo più dopo gli infortuni e operazioni) e occupa una posizione intermedia tra il primo sottogruppo di disturbi asintomatici e emofilia e malattia di von Willebrand.

Un altro tipo di disturbi caratterizzati da l'allungamento come il tempo di tromboplastina parziale e l'ACP, e tempo di protrombina. È caratteristico per carenza dei fattori V, X o II, sia per un complesso deficienza di fattore K vitaminozavisimyh (VII, X, IX, II), che si osserva in ostruttivo e altre forme di K-carenza vitaminica, e quando si ricevono anticoagulanti indiretti.

Da ultimo, come si può vedere da questa tabella, possibile violazione della testimonianza delle tre prove (IV tipo), che si osserva in ipo ereditarie ed acquisite- e disfibrinogenemiyah (non tutti), quando prende anticoagulanti di azione diretta (geparina, geparinoidov, irudina et al.), trattamento di fibrinolisi e farmaci attivatori defibriniruyuschimi (streptochinasi, urochinasi et al.), appare nel sangue e sostanze patologiche antitrombine, collegamento prevenzione (montaggio) fibrina-monomerov - paraproteinov, kryohlobulynov, immunocomplessi, nonché la sofisticata coagulazione, causata da DIC. Così tempo di trombina è spesso disturbato in misura maggiore, e un po 'prima, rispetto ad altri test.

Se si tiene conto della durata della malattia e la possibilità di origine o secondarie legami ereditari con altre malattie e farmaci o altri effetti, la presenza o l'assenza di sanguinamento e il tipo non può identificare correttamente la genesi di questi disturbi profondi della coagulazione del sangue.

Tutto test di differenziazione sono basati sul principio di correzione, t. è. per determinare, la misura in cui ha rivelato un disturbo della coagulazione o eliminato, al contrario, Non campioni prelevati su plasma sanguigno o emoderivati ​​ottenuti artificialmente carenza chiaramente noto di un fattore della coagulazione.

A tal fine, laboratori specializzati per creare un insieme di faktorodefitsitnyh plasma sanguigno, inducendole da pazienti con una serie nota profonda (Di meno 1 %) carenza di ciascun fattore e memorizzarli in piccoli pacchetti (da 0,5 ml) temperatura - 30 ° C. Se necessario, tali campioni sono scongelati e usati in test diagnostici.

Plasma, stato accidentalmente disgelo o rimanere inutilizzato, ri-congelamento non è soggetto a. I test di correzione non deve essere usato con inibitori plasma immunitario di un fattore. I kit diagnostici di un certo numero di imprese contiene campioni liofilizzati di plasma sanguigno fattori della coagulazione carente identificati (substrato del plasma). Tuttavia, molti disturbi emorragici raramente visto nella pratica clinica, per quanto riguarda l'uso di componenti del sangue artificialmente preparati normale carenza di alcuni fattori della coagulazione, e plasma eterogenea (polli, anatroccoli e altri.).

La seguente tabella fornisce informazioni sul contenuto dei fattori della coagulazione nei componenti del sangue, utilizzato per la correzione dei test di coagulazione, a seconda delle condizioni del loro stoccaggio. Usando questa tabella, facile decifrare prova di qualsiasi dei tre principali test di coagulazione. Le tecniche correttive di questo tipo utilizzato test, standardizzato da contatto e l'attivazione di fosfolipidi, t. è. caolino-kefalinovыe o gemolizata primeneniem (in ACT).

Prove miscelazione plasma sanguigno di pazienti con plasma, ha certamente noto carenza di un fattore

Determinare il tempo di tromboplastina parziale attivata nel plasma di prova, Plasma normale (controllo) e la carenza del fattore VIII chiaramente noto plasma (dei pazienti con emofilia A), IX (di emofilia B), XI e XII. Poi, una miscela di campioni di plasma citrato indagato (7/10 il volume) e successivamente con ciascuno dei plasmi carenti (3/10 il volume), poiché carenza di fattore VIII e IX (le forme più frequenti di patologia!).

Alla miscela è stato aggiunto caolino e cefalina, e 2 min sottoposto ad un ricalcificazione (ad una temperatura 37 ° C). Alla miscela, dove il tempo di tromboplastina parziale attivata non è normalizzata, Ha lo stesso difetto di coagulazione.

Così, se il paziente esaminando attivato tempo di tromboplastina parziale viene normalizzato aggiungendo plasma di pazienti con carenza nota noto di fattore VIII, ma corretto plasma sanguigno di pazienti con deficit di fattore IX, ha Emofilia A.

Analogamente,, ma in base al test differenziare protrombina complesso protrombinico carenza (X, v, VII e II).

Test di generazione Thromboplastin

Per la differenziazione di violazioni del meccanismo interno della coagulazione del sangue è più spesso utilizzato classico test di generazione tromboplastina la sostituzione dei componenti delle piastrine, cui preparazione richiede notevoli investimenti di tempo e di sangue, Cefalonia svantaggi generazione di test tromboplastina sono il suo ingombro, la necessità di preparare un gran numero di reagenti, tempo significativo sulla sua attuazione.

Test correttiva, basata sulla base del test di autokoagulyatsionnogo.

La diagnosi rapida dei problemi è risposte diverse di test abbastanza correttiva, basato sulla seconda correzione, gli stessi componenti della prova standard autokoagulyatsionnogo base di sangue.

Questo test è molto affidabile, rapidità e facilità di implementazione e richiede poco (non più 0,5 ml) quantità di esame del sangue, esso può essere utilizzato in pazienti pediatrici.

Esso, come nella prova generazione tromboplastina, utilizzato per la correzione del plasma adsorbito e siero vecchio, che ri-centrifugata prima dello studio. In tre fiale riversato 2 ml 0,222 % soluzione di cloruro di calcio e due erano aggiunti 0,1 ml adsorbiti di plasma normale (1-I VIAL) e 0,1 vecchio siero normale ml (2-I VIAL). Gli altri tre tubi per pipette 0,2 ml di plasma normale citrato. Quindi a tutti i tubi con la soluzione di cloruro di calcio è stato aggiunto 0,1 ml di sangue citrato del test.

Esattamente 4 min di incubazione, la miscela della sua attività di coagulazione è stato testato su plasma normale.

Il forte calo l'attività di coagulazione solo nella prima provetta (normale BaSO₄-plasma) Esso indica una carenza paziente di fattore IX (Emofilia B), Solo nel secondo tubo (Siero da vecchio) - Il deficit di fattore VIII (Emofilia A); Se la correzione avviene in entrambi i tubi (altrettanto forte), poi, ovviamente, vi è una carenza di fattore XI o XII (cm. Tavola. 14).

Questo test è altamente sensibile, come lo studio è stato condotto in una divorziata 20 al momento della compensazione di fattore sangue 3 Platelet Emolisato. L'unico reagente impiegato - soluzione ipotonica di cloruro di calcio, rendendo campione pubblico.

Altrettanto semplice è il metodo di campioni di correzione, effettuata sulla base di un test per carenza di protrombina fattore di differenziazione II, V и VII +, X (sul tavolo).

Al fine di separare il deficit del fattore VII e X, test di coagulazione aggiuntive eseguite con l'aggiunta della soluzione studiata plasma sanguigno veleno di vipera - serpente farmaco lebetoks (tale scelta una concentrazione di veleno, kephaline che in presenza di cloruro di calcio provoca la coagulazione con 20-25; Tutti gli ingredienti sono prese in quantità 0,1 ml e mescolare) (La tabella che segue).

Con lo stesso scopo il preparato è utilizzato Russell veleno di vipera, che abita in India (preparazione stipven).

La diagnosi differenziale è completato, se necessario, attraverso la quantificazione dei fattori scarsi o inibitori immunitarie specifiche, Perché i metodi speciali altamente sensibili, standardizzati. Queste tecniche di costruzione utilizzate curve di diluizione di campioni misti di normale plasma sanguigno con il deficit di correzione dei fattori, in aggiunta al test. Queste curve definiscono l'attività del fattore di controllo nel plasma di pazienti.

Specialmente importante determinazione quantitativa della concentrazione del fattore VIII e IX, e la presenza di inibitori in pazienti con emofilia A e B (soprattutto prima e durante l'intervento chirurgico e la terapia sostitutiva intensiva), così come rinviata emorragia post-partum profusa, quando è necessario differenziare la DIC e una rara patologia - l'emergere di fattore VIII inibitore immunitario (ancora molto meno - Fattore V).

Con profonda carenza di fattore XIII (una patologia ereditaria molto rara) tutti i test di coagulazione sono normali, ma dissolvere i coaguli di 5M e 7M urea.

Essa aiuta a differenziare la carenza di vari fattori della coagulazione rappresentano anche la portata e la, particolarmente, termini di letture di normalizzare i test per i pazienti in seguito a somministrazione per via endovenosa di emoderivati, t. è. Rettificato in vivo secondo il metodo A. 3. Barkagan.

Questa tecnica è particolarmente efficace quando una grande differenza nella speranza di vita fattore differenziabile in circolazione. Così, metà complesso protrombinico durata di vita varia da poche ore (fattore VII) a diversi giorni (fattore II). Una posizione intermedia tra portarli X Factor (2-2.5 Giorni) e V (12-18).

Pertanto, dopo massicce trasfusioni di aumenti dell'indice plasma jet protrombina con deficit del fattore VII è molto breve, deficienza di fattore V - alquanto più lungo (circa 4-6 volte), una deficienza di fattore X e, particolarmente, II per un periodo più lungo (oltre 1-2 giorni). E 'significativo a questo proposito e l'effetto sulla droga indice di protrombina PPSB (concentrato di fattore VII, IX, X e II). Ha anche normalizza breve tempo di protrombina, deficit VII fattore, e più durevole (molte volte!) deficit di fattore X e II. Dal momento che questo farmaco non è fattore V, Questa carenza non li viene corretta.

Una differenza simile si rivela in trasfusionale e della terapia sostitutiva della coagulazione Fattori meccanismo interno (XII, XI, IX e VIII), che ha registrato un test di tromboplastina parziale attivata.

Di particolare interesse è fattore di correzione del livello dei diffusori VIII e aPTT letture quando la terapia trasfusionale di emofilia A e malattia di von Willebrand. Viene rilevato La prima di queste condizioni immediatamente massimo sanguinamento miglioramento dopo la trasfusione (spray, veloce!) Antihemophilic plasma o amministrazione crioprecipitati, seguito da un abbastanza rapido (per 10-18 h) un costante declino nel suo, considerando vWF si osserva una certa attività aumento di coagulazione nel giro di poche ore dopo la trasfusione, e poi il suo declino - molto più lentamente, di. A questo proposito, nel trattamento della malattia di von Willebrand è raramente usato trasfusioni di sostituzione, di emofilia A.

Uno studio della attività funzionale di fattori di coagulazione e componenti del callicreina-chinina e sistemi fibrinolitico che utilizzano substrati cromogeni

I metodi sono basati sullo studio dell'attività degli enzimi proteolitici e dei loro inibitori, coinvolti nella coagulazione del sangue, formazione fibrinolisi e chinina, in intensità e il tasso di clivaggio specifico sensibile a questi enzimi peptidi, che viene rilasciato durante la degradazione del colorante (b-нитроанилин).

Il grado di colorazione della miscela reagente determinato con la spettrofotometria, e la sua intensità viene giudicato sulla attività degli enzimi corrispondenti (fattore di coagulazione, kallikreina, plasmina e altri.), e impedire il processo - l'attività di inibitori enzimatici.

Così, ad esempio,, effetto di eparina e antitrombina III può essere valutata mediante scissione di substrati cromogeni indebolire il fattore Xa o trombina, e l'attività di α₂-antiplasmina - per la riduzione del corrispondente substrato cromogenico plasmina. Substrati cromogeni o hanno una designazione numerica (ad esempio,, s-2222), o di cui un hromozinami prefisso abbreviato, che denota l'enzima, per cui il substrato sensibile (ad esempio,, Chromozym PL - субстрат плазмина, Chromozym TH - субстрат тромбина, Chromozym PK - prekallikrein substrato / callicreina, etc.. d.).

Substrati cromogeni estendono le funzionalità dello studio del sistema emostatico, ma non è sufficiente a disposizione molti laboratori. Alcuni studi, realizzato con il loro aiuto, Hanno vantaggi rispetto test di coagulazione convenzionali e dare loro i risultati corrispondenti; in altri casi, il loro uso semplifica e velocizza studio, Lo rende più accurata; in terzo - queste tecniche hanno un significato autonomo e non possono essere sostituiti test di coagulazione (ad esempio,, Definizione prekallikrein).

Determinazione immunologica delle componenti del sistema emostatico

Determinazione immunologica delle componenti del sistema emostatico viene effettuata con metodi:

• Immunoprecipitacii;
• Immunoelettroforesi;
• Radioimmunoassay e l'altro con gli antisieri appropriati

Il contenuto previsto di antigene nel plasma sanguigno di un fattore di coagulazione (o suoi frammenti), non attività funzionale, che possono essere drasticamente ridotti con l'antigene normale nel plasma. Questa situazione è tipica per tutti i casi, Quando sintetizzato nel corpo anormale (funzionalmente difettoso) Fattori, preservando la sua antigenicità, ma manca la capacità di partecipare emostasi.

Ciò consente di distinguere tra la completa cessazione della sintesi di fattori rilevanti e la formazione di forme anomale.

Tuttavia, alcuni componenti del sistema emostatico possono essere determinate solo immunologicamente.

Questo gruppo include tali importanti studi, come la definizione dei seguenti componenti:

• b-тромбоглобулина;
• a2-макроглобулина;
• proteine ​​C e S;
• antigeni fattore VIII:C e VIII:R_memoria;
• Fibrinolisi Prodotto (PDF);
• neoantigenov kompleksov trombina - antitrombina III e plasmina - antiplasmina;
• un certo numero di altri test.

Pertanto, lo studio immunologico completano significativamente la valutazione funzionale dei vari componenti del sistema di emostasi.

Test diagnostici, basato sull'utilizzo di farmaci come reagenti da veleni di serpente

È stato da tempo stabilito, che molti veleni di serpente contengono enzimi proteolitici molto attivi, provocando la coagulazione del sangue e l'impatto sui diversi anelli della cascata della coagulazione. Di conseguenza, veleni di serpente e isolati da coagulasi loro ampiamente utilizzati per il rilevamento di disturbi emostatici, Determinazione quantitativa dei fattori della coagulazione, individuazione e la quantificazione di fibrina solubile complessi monomero (RFMK) e una serie di altri studi.

Campioni di veleno di serpente è spesso molto più facile e rendere più rapida la diagnosi di disturbi dell'emostasi.

La tabella riporta i dati sul meccanismo d'azione dei veleni coagulazione del sangue, e utilizzare le funzioni diagnostiche di ciascuna di esse.

Queste funzionalità espandere ulteriormente l'impiego simultaneo di diversi veleni e semplici test di coagulazione comune. Così, ad esempio,, l'uso simultaneo di test di coagulazione con veleno di vipera efa, e lo rende facile distinguere tra deficit di fattore VII, H-V e II (nella tabella sottostante), e con un'ulteriore correzione del plasma normale filtrato (fattore di potenza V e II) -defitsit X Factor e V.

Determinazione delle anticoagulanti fisiologici di base

La più importante è la determinazione dell'attività dei principali anticoagulanti fisiologici - antitrombina III, una diminuzione determinabile geneticamente (Trombofilia primaria) o secondaria a causa del consumo intensivo (DIC, Trombosi Massive) o il metabolismo accelerato (trattamento con eparina, L-asparaginasi, contraccettivi sintetici) e il blocco di complessi immuni, paraproteinami, fibronectina, proteine ​​della fase acuta.

In ogni caso, la riduzione dell'attività dell'antitrombina III sotto 60-65 % Supporta coagulazione intravascolare, Si sta facendo meno pronunciato effetto anticoagulante dell'eparina. Tuttavia, molto spesso tra il livello di antitrombina III e diminuita sensibilità ad eparina legge conformità.

Di solito è un indebolimento dell'azione anticoagulante dell'eparina sostanzialmente predomina il grado di diminuzione dell'attività dell'antitrombina III. Dimostrato, che i deficit in varie forme della sua antitrombina III affinità eparina può variare in diversi gradi. Inoltre, diverse frazioni di eparina, il rapporto di cui in medicamenti molto mutevoli, hanno anche una differente affinità per l'antitrombina III. Pertanto, in pratica, è importante investigare sia l'effettiva attività dell'antitrombina III, e la sua capacità di trasformare sotto l'influenza di azione rapida anticoagulante dell'eparina.

L'attività anticoagulante dell'antitrombina III

L'attività anticoagulante dell'antitrombina III Si è determinata dalla capacità del plasma di prova (divorziato - Il metodo o Copley Winterstein defibrinato denaturazione termica ad una temperatura 56 ° C - metodi Loligera, Abildgaarda et al.) inattivare per un certo periodo di input da trombina dall'esterno. L'attività residua trombina in un plasma può essere determinata per la sua attività di coagulazione (di fibrinogene, solfato di bario plasma adsorbito) o mediante scissione di un substrato cromogenico, sensibile in trombina o Fattore Xa (come antitrombina III inattiva questo fattore).

Eparina-kofaktornaya aktivnosti

Attività cofattore eparina contenuta nel plasma antitrombina III periodo più lungo determinato da un test di tolleranza del plasma all'eparina, che possono essere considerati come indicativi, perché dà una molto ampia dispersione dei valori normali e riprodursi abbastanza.

Molto più accurato test GIOCO izvodimy, che ha studiato l'effetto di diverse concentrazioni di eparina in trombina plasma studio tempo, contenente una piccola quantità di piastrine. Il confronto viene effettuato con l'allungamento del tempo di trombina di controllo plasma normale, a cui si aggiungono gli stessi campioni eparina.

Così, trombina eparina-test per studiare il plasma sanguigno vengono aggiunti alla quantità di eparina, che prolungare il controllo del tempo di trombina con 15 a 32-35 con (bassa concentrazione) e fino a 95-110 (alta concentrazione di eparina). Da questi dati, l'indice di attività è calcolato antitrombine plasma (AAP) e riserva anticoagulante plasma (CBA).

È inoltre ampiamente usato tecniche simili per stimare il grado di inattivazione della trombina in test di coagulazione, ei substrati cromogeni.

Rilevazione immunologica dell'antigene di antitrombina III

Rilevazione immunologica dell'antigene di antitrombina III Esso consente di distinguere tra i diversi tipi di trombofilia:

• con la sintesi inadeguata di antitrombina III (ridotti livelli di marcatore antigenico adeguatamente ridotta attività);
• con la sintesi conservato di anormali e funzionalmente difettosi sue forme (il livello di marcatore antigenico è molto più alto, attività di).

Proteine ​​C e S, тромбомодулин и un₂-macroglobulin determinati con metodi immunoenzimatici.