La diagnosi di infertilità immunologicamente causato

Durante una lunga vita sposata senza l'uso di contraccettivi, e in presenza di micro-regione delle mucose negli organi genitali può avvenire gradualmente macchiare antigeni di immunizzazione di spermatozoi. L'esame fisico dei coniugi, consistente in un matrimonio sterile, non è possibile determinare la causa della sterilità nel 10-15 % casi. E 'in questo gruppo di coniugi infertili quando l'applicazione di metodi speciali di un'indagine segreta canale cervicale, anticorpi plasmatici di sperma e spermatozoi siero vengono spesso individuati (ASAT), Utilizza test qualitativi e quantitativi della ricerca immunologica.

Test Postkoytalnыy (FCT)

Test Postkoytalnыy (FCT) Si riferisce a immunologico qualitativo. Un risultato negativo indica l'assenza di spermatozoi nel segreto canale cervicale, ma non è possibile identificare la causa della loro assenza.

Metodo. Per il numero di spermatozoi mobili nel segreto canale cervicale, ottenuto dopo il coito, stabilire l'entità delle violazioni della loro capacità di penetrazione con infertilità o immunità ai loro muco del canale cervicale.

FCT è necessario eseguire le seguenti condizioni: Lo studio deve essere condotto nel periodo di ovulazione, che ha rivelato colpocytologic o un altro metodo, dopo precedenti coniugi astinenza entro 2-3 giorni.

La metodologia del. Dopo la consueta coito per una donna 30 minuti deve distendersi sulla schiena, piegare le ginocchia. Douching e la pulizia del proibito, Basti tovagliolo sanitario, che viene rimosso durante la cattura per lo studio di muco del canale cervicale. Dopo 2-4 ore, ammissibile e dopo 6-10 ore (tempo, trascorso prima che lo studio, indicato nell'analisi) dopo il rapporto sessuale cervice esposto utilizzando uno specchio Cuzco e muco endocervicale aspirato o una siringa tubercolina (senza ago), una pipetta con un bulbo di gomma, o catetere di polietilene.

Quando si lava lo strumento non deve essere utilizzato disinfettanti, in quanto influenzano la motilità degli spermatozoi. Una goccia di muco risultante del canale cervicale è trasferita ad un vetrino riscaldato, coprioggetto rivestito, Territorio lubrificati con paraffina liquida fuoriuscita. Formulazione subito mikroskopiruyut (oculare 7X, Obiettivo 40X), determinare il numero e la natura della motilità spermatica. Il farmaco può essere rilevato con spermatozoi attivi motilità progressiva, moto oscillatorio (il fenomeno di oscillazione) e fissa.

Accettati forniscono cinque tipi di conclusioni FCT.

• Eccellente (norme rilevanti): in cinque campi di vista fino a 15-20 con spermatozoi attivi progressiva della mobilità e più. Sperma con il fenomeno di oscillazione è inferiore 25 %.
• Soddisfacente: in cinque campi di vista su 10 spermatozoi attivi progressiva mobilità e meno 25 % sperma con il fenomeno di oscillazione.
• Povero: Di meno 5 spermatozoi in cinque campi di vista.
• Meno: assenza di spermatozoi.
• Dubbioso: in cinque campi di vista più 5 spermatozoi attivi-mobili e altro 25 % il fenomeno di oscillazione.

Quando il quinto tipo di FCT spesso osservato incompatibilità immunitaria tra coniugi, pertanto necessario determinare la ACAT. Per identificare ACAT endocervicale segreto, plasma, liquido seminale o siero di sangue e visualizzarle (agglutinazione o immobilizzato) Si richiede la nomina di immunodosaggi quantitativi.

Un PBC negativo studi iniziano con una definizione di penetrare (penetrazione) la capacità dello sperma tramite test di penetrazione (Fri.) e suscettibilità alla secrezione sperma del canale cervicale usando un contatto di prova di spermatozoi e muco cervicale (TKSTSS).

Test Penetracionnyj (TP)

La lunghezza del capillare sottile 10 Vedere digitato durante l'ovulazione muco del canale cervicale. Una estremità aperta del capillare chiude argilla, ed il secondo viene posto in una provetta con un test eiaculato fresco (non più 3 ore dopo l'eiaculazione). Con argilla nel capillare è collegato al tubo verticalmente. Il campione viene incubato in un termostato a temperatura 37 ° C. 1 no. Sulla qualità del liquido seminale è giudicato dalla profondità di penetrazione degli spermatozoi nel muco del canale cervicale. Ci sono tre tipi di gas a effetto serra.

• Affermativa - La profondità di penetrazione (la maggiore distanza in centimetri, viaggiato almeno singolo spermatozoo) sopra 5 cm; il numero di spermatozoi nel punto di massima penetrazione more 5 in vista, e il numero di spermatozoi mobili nel terzo superiore del capillare è maggiore 50 %.
• Dubbioso - Una profondità di penetrazione fino a 5 Vedi meno numero di spermatozoi 5, la loro mobilità nel terzo superiore delle portate capillari 50%.
• Meno - La profondità di penetrazione raggiunge sperma 1 cm.

La capacità degli spermatozoi di penetrazione Essa dipende dalla fase del ciclo mestruale. Comincia a emergere dal 9 ° giorno del ciclo mestruale,, a poco a poco l'attivazione, raggiunge la sua massima espressione nel periodo di ovulazione, tenutosi a questo livello per due giorni, e poi diminuisce gradualmente.

Sperma a contatto di prova e muco cervicale (TKSTSS)

Sulla diapositiva è mettere una piccola goccia di muco dal canale cervicale, preso dalle donne durante l'ovulazione, e un numero delle stesse dimensioni di goccia eiaculato. Entrambe le gocce sono coperti con un vetro di copertura, che è leggermente premuto per, unita ad una goccia. Il farmaco viene posto in una camera umida (Capsula di Petri con un batuffolo di cotone inumidito) e incubate in termostato a una temperatura 37 ° C. 1 no.

In queste condizioni, lo sperma normale penetrare il segreto del normale canale cervicale, come si può vedere al microscopio a 200 ingrandimenti. Per tener conto della reazione vicino al confine tra due mezzi conta il numero di penetrare il segreto del canale cervicale spermatozoi in due campi adiacenti di vista.

Con eccellente TKSTSS in due campi di vista rivela più 25 spermatozoi attivamente motile nel fenomeno di oscillazione meno 25 %. Se TKSTSS soddisfacente in due campi di vista rivelato più 15 sperma attivamente motile, TKSTSS in bassa - meno di 15. Una penetrazione TKSTSS assente negativo, se discutibile - un fenomeno di oscillazione supera 25 %.

In questo test, come in PCT, il fenomeno di oscillazione, superiore 25 %, probabilmente, Si segnala la presenza di ACAT e richiede la nomina di immunodosaggi quantitativi.

Utilizzando lo sperma e le secrezioni cervicali uomini sterili e fertili di canale in varie quantità per uso TKSTSS identificare marito sterili.

• Esempio 1. Preso un canale segreto della cervice nelle donne infertili e controllo coppie ejaculate uomini sani. Eccellente TKSTSS indica una capacità di penetrazione debole degli spermatozoi del marito, e la suscettibilità di normale secrezione del canale cervicale.
• Esempio 2. Preso segreto pieno di cervicale canale sana donna e suo marito sperma delle coppie infertili. Bad TKSTSS indica una penetrazione debole di sperma.
• Esempio 3. Taken donne endocervicale segreti coppie sterili e controllo ejaculate uomini sani. Bad TKSTSS indica inferiorità segreto canale cervicale, che ovviamente non penetrano spermatozoi normale.

Quantitative test immunologici

Mikroagglyutinatsionny prova Friberg

Mikroagglyutinatsionny prova Friberg (TF) sufficientemente sensibile ed è disponibile per i laboratori di diagnostica clinica. Utilizzando TF può determinare la presenza di ACAT e agglutinazione titolo in vari materiali (eiaculato plasma, estratti di muco del canale cervicale e nel siero di entrambi i coniugi).

Reagenti:

1. Tampone fosfato salino (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Olio Vazelinovoe.

Attrezzatura: microscopio, siringa per tubercolina, mikroagglyutinatsionnye pipetter 1 ml, Capacità micropipetta 0,1 ml.

Metodo. Siero esame del sangue viene inattivata tramite incubazione in un incubatore a 56 ° C. 30 m. Eiaculare, ottenuto con la masturbazione, immediatamente diluito in modo che la FSB, la concentrazione di spermatozoi era 40 milione. in 1 ml.

A causa del materiale (eiaculato plasma, estrarre il segreto del canale cervicale o siero) si prepara una serie di diluizioni 1:4 a 1:128 utilizzando come liquido per la diluizione FSB. In pozzi con mikroagglyutinatsionnyh olio di paraffina Planchettes siringa per tubercolina con un ago viene introdotto (sott'olio vazelinovoe) Piccole gocce di ogni diluizione del materiale di prova. Dopo ogni campione viene lavato quattro volte la siringa. In ogni diluizione viene aggiunto alla 5 volte più piccoli goccia di liquido seminale, e 4 h alla temperatura ambiente rilevata agglutinati. Ultimo allevamento, per cui sotto un microscopio a ingrandimento 100X rilevato 3 agglutinare in fase di revisione e di più, agglutinazione titolo corrisponde ACAT.

Test Spermoimmobilizuyuschy Izodzhima (SIT).

Siero ACAT immobilizzante titolo, estratto di plasma o seme segreto canale cervicale è impostato per il numero di spermatozoi mobili in presenza di antigeni (sperma).

Componenti.

1. Eiaculare, che è prodotto e preparato simile, per TF con FSB; motilità superi 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya siero di cavie.

3. Siero umano immunitario (Ichs), dando in presenza del complemento attraverso 1 h di incubazione di immobilizzazione 90 % sperma.

4. Siero umano normale (NCHS), inattivato mediante riscaldamento ad una temperatura 56 ° C. 30 m.

5. Siero inattivato test, plasma e lo sperma estratto segreto canale cervicale.

Metodo. Per valutare l'attività del complemento immobilizzare il primo tubo viene introdotto 0,5 ml di soluzione di cloruro di sodio isotonica, per determinare le variazioni di motilità degli spermatozoi, senza ASAT tubo 2 ° prova - 0,5 ml NHS, Controllo di immobilizzazione terzo tubo - 0,5 ml di ICHS e determinare il ACAT immobilizzare il quarto tubo - 0,5 ml di siero, o plasma del liquido seminale, estratto o secrezione endocervicale.

Poi, ogni tubo è introdotta da 0,1 ml complemento. Viene aggiunta l'ultima cosa a tutte le provette 0,05 sospensione di spermatozoi ml in una concentrazione 40 milione. in 1 ml. Tubi treppiede sono stati collocati in un incubatore a temperatura 37 ° C 1 no. I tubi sono rimossi dal forno e accuratamente agitata per riflettere costante spermatozoi agglutinati.

Per valutare i risultati sotto alta microscopio ingrandimento (400X) calcolata la percentuale di spermatozoi mobili in una goccia della provetta, depositato su un vetrino e coperto con un coperchio. Inoltre, fissa la percentuale di spermatozoi mobili nelle goccioline delle provette con il NHS e la ICHS. Il risultato della reazione in considerazione dalla formula

SIT = K / A

dove K - il numero di spermatozoi mobili nel controllo con il ICHS e il NHS;

Circa - il numero di spermatozoi mobili in una provetta (Test siero, o plasma del liquido seminale, o il segreto del canale cervicale).

Con SIT media<2 il test è negativo (numero di spermatozoi motili nel controllo e nelle provette di circa lo stesso), Se l'indice CTI>2 - Il test è positivo, t. è. nel materiale (siero, plasma o sperma estratto segreto canale cervicale) sono immobilizzati ACAT.

• Esempio 1. Controllo a terra di ICHS - 10 % spermatozoi mobili. Il secondo controllo con il SSN - 80% spermatozoi mobili. I due controlli insieme - 90 % spermatozoi mobili. Nella provetta - 80 % spermatozoi mobili.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Il test è negativo, immobilizzato assente ACAT.

• Esempio 2. Nella provetta - 40 % spermatozoi mobili, Tuttavia, nel controllo, nell'esempio 1.

KN = 90/40 = 2.2

Il test positivo. C'è anticorpo immobilizzato (ASAT), attraverso il quale la motilità degli spermatozoi ridotto significativamente.