Pemeriksaan mikroskopis dari cairan cerebrospinal

Penentuan sitosis

Cairan serebrospinal orang sehat mengandung sangat sedikit sel. Signifikansi klinis memiliki terutama leukosit (limfosit). Untuk menghitung sel darah putih tidak mengganggu eritrosit, mereka dihancurkan dengan menambahkan cairan serebrospinal yang tidak diencerkan 1/10 bagian asam asetat dengan fuchsin. Fuchsin menodai sel berinti merah. Reagen Samson digunakan untuk mewarnai leukosit (campur 30 ml asam asetat glasial, 2 ml fenol cair, 2 ml larutan beralkohol magenta 1 : 10 dan isi ulang 100 ml air suling). Reagen tahan, menodai sel dengan baik dan menjauhkannya dari sitolisis selama beberapa jam.

Solusi juga digunakan, terdiri 5 ml 10 % larutan asam asetat dan 0,1 g metil violet. Itu kurang gigih, menodai sel berwarna biru.

Karena sifat sitolitik cairan serebrospinal, jumlah sel harus dihitung segera setelah meminumnya.. Cairan tersebut diukur ke dalam tabung reaksi dengan tetesan atau dengan mikropipet dalam proporsi 10 bagian dari cairan serebrospinal dan 1 bagian dari larutan pewarna dan biarkan selama 10-25 menit untuk menodai sel. Untuk pengenceran, Anda bisa menggunakan mixer untuk leukosit. Sel cairan serebrospinal menempel dengan sangat cepat ke dinding tabung, karena itu cair, in vitro, sebelum pemeriksaan, perlu dicampur secara menyeluruh dengan gerakan rotasi antar telapak tangan.

Untuk menghitung sitosis, gunakan Kamera Fuchs-Rosenthal. Penghitungan dilakukan di seluruh grid 5 min setelah mengisi ruangan. Jumlah sel dalam 1 μl ditentukan oleh rumus

X =(A * 11)/(3.2*10)

dengan X adalah jumlah sel dalam 1 l; A - jumlah sel, dihitung di permukaan kisi; 3,2 - volume ruang; 11/10 - tingkat pengenceran.

Pendaftaran hasil penghitungan dalam bentuk pecahan diperbolehkan, misalnya 14/3, Dimana 14 - jumlah sel yang dihitung di dalam ruangan, 3 - digit bulat dari volume ruang. Dengan jumlah sel yang besar, itu cukup untuk menghitungnya dalam satu setengah kisi dan menggandakan jumlah yang dihasilkan. Dengan pleositosis yang diucapkan (peningkatan yang signifikan dalam jumlah sel) diperbolehkan untuk menghitung sel 16 kotak kecil dan kalikan hasilnya dengan 16.

Jika tidak ada kamera Fuchs-Rosenthal, Anda dapat menggunakan Ruang hitung Goryaev dengan kapasitas yang jauh lebih kecil, oleh karena itu, sel-sel dihitung di dalamnya setidaknya dalam tiga kotak, hitung mean aritmatika dan kalikan dengan 1,2. Faktor 1,2 dapatkan dari rumus

X =(A * 11)/(0.9*10)

dimana 0,9 adalah kapasitas ruang, 11/10 - tingkat pengenceran.

Saat menghitung sel dalam cairan serebrospinal murni, salah satu tetes pertama, yang timbul dari tusukan jarum, ditempatkan di ruang Fuchs-Rosenthal dan jumlah sel ditentukan, seperti disebutkan di atas.

Jumlah sel normal (limfosit) di 1 μl cairan serebrospinal dari ventrikel otak dan cerebellar cistern adalah 0-1, dan dalam bentuk cair, diperoleh dengan tusukan lumbal - 2-4.

Pada anak di bawah usia tiga bulan 1 μl cairan serebrospinal terdeteksi hingga 20-23 sel, hingga satu tahun - 14-15, hingga dua tahun - 11-14, dari dua sampai lima tahun - 10-12, dari lima sampai tujuh tahun - 8-10, dari tujuh sampai sepuluh tahun - 6-8, lebih dari sepuluh tahun - 4-5.

Pada meningitis, abses dan tumor otak, jumlah sel dalam cairan serebrospinal meningkat.

Saat memeriksa cairan serebrospinal hemoragik dalam beberapa kasus, perlu dilakukan pemeriksaan sitosis yang sebenarnya.. Untuk tujuan ini digunakan Metode Friedman: cairan hemoragik dikumpulkan dengan reagen Samson untuk menentukan sitosis dan larutan natrium klorida isotonik untuk menghitung jumlah eritrosit di 1 μl cairan serebrospinal.

Sebagai Contoh, jumlah sel dalam 1 μl - 20, jumlah eritrosit - 3600. Jumlah eritrosit dan leukosit dalam darah pasien ditentukan dari analisis umum, dilakukan sebelum pungsi lumbal. Sebagai Contoh, di 1 l darah 4 200 000 eritrosit, 7000 leukosit. Oleh karena itu, satu leukosit menyumbang 4200000/7000 = 600 eritrosit.

Untuk mendapatkan nilai sitosis sejati, buat persamaannya:

di 600 eritrosit - 1 leukosit;

di 3600 eritrosit - leukosit X., Karena itu,

X = 3600/600 = 6 leukosit.

Sitosis cairan serebrospinal sejati 20-6 = 14 sel per 1 l.

Penerapan metode ini terbatas, karena cairan serebrospinal dengan campuran darah yang signifikan tidak cocok untuk penelitian semacam itu.

Penentuan jumlah eritrosit dalam cairan serebrospinal penting untuk menentukan tingkat keparahan kondisi pasien dengan perdarahan intrakranial.

Di hadapan 1 μl 2000-5000 eritrosit, cairan serebrospinal berubah menjadi merah muda, 900- 1000 eritrosit - hanya sedikit seperti opalescent. Kandungan sel darah merah yang lebih rendah dapat ditemukan dalam cairan tidak berwarna. Peningkatan tingkat eritrosit dalam dinamika penting secara klinis..

Diferensiasi sel cairan serebrospinal diadakan di ruang penghitungan dalam bentuk asli dan bernoda.

Pada pembesaran tinggi (окуляр 10X или 15Х, Lensa 40X) di ruang penghitungan memperhatikan jumlah sel, untuk m, lokasi dan ukuran inti, kehadiran inklusi dalam sitoplasma. Sangat mudah untuk membedakan limfosit, granulosit neutrofil, makrofag. Biasanya, dalam cairan serebrospinal yang hanya berisi limfosit.

Untuk karakterisasi lengkap komposisi selular cairan serebrospinal belajar persiapan patri. Sel bernoda cairan buruk, dari sel-sel darah. Ada beberapa cara untuk melukis: di Rosina, Pengangkutan, Papanikolau, Alekseev, May-Grunwald, Pappenheim.

Penentuan sifat pleositosis dengan mikroskop luminescence

Setetes cairan serebrospinal dioleskan ke kaca objek bebas lemak dan dicampur dengan pewarna fluorokrom (campuran larutan garam air jeruk akridin dan rhodamin dalam pengenceran 1:20000). Sediaan yang disiapkan diperiksa di bawah mikroskop fluorescent ML-2 dalam sinar biru-violet dari spektrum tampak, dengan menerapkan kombinasi filter eksitasi: FS 1—4, SZS 14—4, Filter penguncian BS 8-2 dan JS-1 dengan lensa imersi. Dimetil ftalat digunakan sebagai minyak imersi non-fluoresen untuk penelitian. (ester dimetil asam ortofalat).

Dengan latar belakang bidang pandang yang gelap, sel polinuklear dan limfosit mudah dideteksi oleh cahaya hijau dari sitoplasma. Hitunglah berturut-turut 100 sel, mengingat jumlah limfosit dan granulosit neutrofilik.

Limfosit berbeda dari granulosit neutrofilik dalam sifat inti (struktur kental dengan inklusi oranye) dan fluoresensi hijau cerah.

Granulosit neutrofil memiliki struktur yang jelas, kromatin inti mereka bersinar secara difus, seragam cerah- berwarna hijau. Sitoplasma kuning- hijau, butiran berwarna merah bata tersebar di dalamnya.

Dalam kasus sitosis minor, cairan serebrospinal asli disentrifugasi dan sedimen diperiksa.

Pemeriksaan mikroskopis luminescence pada cairan serebrospinal memudahkan untuk membuat kesimpulan tentang neutrofilik., limfositik atau polimorfik-seluler dari pleositosis.

Ciri morfologi sel cairan serebrospinal

Limfosit

Cairan serebrospinal orang sehat mengandung limfosit kecil dan sedang (1-2 in 1 l) ukuran 4-6 mikron. Ini adalah sel-sel berbentuk bulat dengan inti kuning besar dan sitoplasma yang sangat sempit..

Dengan pleositosis limfoid (meningitis TB, sistiserkosis) bersama dengan kecil dan sedang, limfosit besar muncul (8-9 m), limfosit dengan pembelahan inti langsung jarang ditemukan.

Jumlah limfosit (bersama dengan sel lainnya) peningkatan cairan serebrospinal di tumor otak, kursus meningitis kronis. Pada penyakit bedah saraf, peningkatan jumlah limfosit pada periode pasca operasi terjadi mengikuti peningkatan jumlah granulosit neutrofilik dan menunjukkan hasil yang baik..

Sel plasma

Sel plasma dapat ditemukan di cairan serebrospinal hanya dengan proses inflamasi jangka panjang di jaringan otak dan meninges.. Morfologi sel plasma sama, seperti dalam darah atau sumsum tulang belang-belang.

Ini adalah sel-sel berbentuk bulat dengan inti yang terletak secara eksentrik dan berwarna intens, sitoplasma basofilik. Dalam beberapa kasus, jumlahnya bisa mencapai 26%. Sel plasma juga ditemukan pada periode pasca operasi dan dengan proses reparatif yang lamban pada cedera otak.

Gistiocitы

Dalam cairan serebrospinal normal, kadang-kadang ditemukan dalam bentuk spesimen tunggal.

Dalam sediaan yang diwarnai, histiosit memiliki inti yang besar dan sitoplasma yang relatif sempit.. Ukuran sel dari 7 untuk 10 m, bentuk bulat atau tidak beraturan. Kernel berbentuk kacang atau lobed tidak beraturan, normokromik. Nukleoli terlihat dalam sediaan asli dengan mikroskop fase kontras.

Dengan meningitis tuberkulosis, sejumlah besar histiosit ditemukan di cairan serebrospinal, dipisahkan dan dikelompokkan, sitoplasma mereka adalah basofilik, diwarnai lebih intens.

Menurut data yang tersedia, sel dari beberapa jenis neuroglia dapat berubah menjadi histiosit. Sejumlah besar histiosit dalam cairan serebrospinal ditemukan pada pasien, menjalani operasi pada otak atau sumsum tulang belakang (menunjukkan reaksi jaringan aktif dan penyembuhan luka normal), dan pada individu, menderita meningitis tuberkulosis dan sistiserkosis dengan proses inflamasi yang lambat. Pada tumor otak dengan invasi ruang subarachnoid atau dinding ventrikel, histiosit dapat muncul di cairan serebrospinal dalam kombinasi dengan makrofag dan sel yang diubah., yang khas untuk munculnya zona reaktif di sekitar tumor.

Makrofag

Makrofag terbentuk dari satu- serta sel endotel dan monosit arakhnoid berinti banyak. Unsur endotelium meninges arakhnoid dipisahkan dari syncytium dan berubah menjadi sel bulat, memiliki gerakan seperti amuba dan menembus ke dalam cairan serebrospinal.

Makrofag secara aktif menyerap dan mencerna sel dan elemen lainnya, memasuki cairan serebrospinal selama proses patologis, membantu membersihkannya. Inklusi dalam sitoplasma makrofag mudah dibedakan di dalam bilik dan sediaan yang diwarnai.

Makrofag eritrosit fagositosis, granulosit neutrofilik yang hancur atau tidak berubah, tetesan lemak, kristal hematoidin dan lainnya. Seringkali di sitoplasma makrofag terdapat vakuola dengan berbagai ukuran atau satu vakuola besar, yang menempati hampir seluruh sitoplasma, inti dipindahkan ke pinggiran. Dalam kasus seperti itu, sel tampak seperti cincin - makrofag krikoid.

Biasanya, makrofag tidak ada di cairan serebrospinal. Penampilan mereka dengan sitosis normal menunjukkan perdarahan atau proses inflamasi pada sistem saraf pusat.. Sejumlah besar makrofag dalam cairan serebrospinal pada periode pasca operasi menunjukkan debridemen aktif. (prognosis positif). Sejumlah kecil makrofag atau ketiadaannya dengan pleositosis parah merupakan tanda prognostik yang tidak menguntungkan.

Bola berbutir – sel xanthoma

Bola berbutir (sel xanthoma) adalah makrofag besar dengan beberapa inklusi tetesan lemak di sitoplasma.

Ini adalah sel yang paling sering dibulatkan., berwarna coklat tua dengan magenta. Saat merawat cairan serebrospinal dengan Sudan III, bola granular berubah menjadi oranye-merah.

Ditemukan dalam cairan serebrospinal ketika cairan dari kista dengan etiologi berbeda masuk ke dalamnya, dengan kerusakan jaringan otak (bersama dengan tetesan lemak), terkadang pada periode pasca operasi, dengan beberapa tumor otak (craniopharyngioma, ependymoma, dll.). Jika tumor terletak di dekat ventrikel otak, kemudian bola granular paling sering terdeteksi di cairan serebrospinal dari ventrikel. Mikrogliosit adalah sumber bola granular, serta oligodendrosit, sel membran luar pembuluh darah dan membran arakhnoid.

Granulosit neutrofil

Granulosit neutrofilik dalam cairan serebrospinal mirip dengan granulop darah neutrofilik, sitoplasma mereka (di ruang hitung dan dalam persiapan asli) sering memanjang atau menonjol (pseudopodia). Variasi bentuk sel ini diamati pada 10-15 menit pertama setelah pengambilan cairan serebrospinal dan menunjukkan pengawetan neutrofilik.- mi granulosit kemampuan untuk bergerak. Karakteristik inti tersegmentasi, jumlah segmen yang berkisar dari dua hingga lima; granulosit neutrofilik tusuk jarang terjadi.

Saat menyimpan cairan serebrospinal, granulosit neutrofilik berubah lebih awal, daripada sel lain. Inti dari granulosit neutrofilik mungkin lisis atau segmen menjadi bulat, dengan kontur yang jelas, dihubungkan dengan pelompat tipis; kemudian mereka mengambil bentuk butiran terpisah. Granulosit neutrofilik, yang hanya mempertahankan satu segmen inti berbentuk bulat, Sepertinya normoblast. Memenuhi granulosit neutrofilik bengkak dengan garis besar segmen yang tidak jelas, menempati hampir seluruh sitoplasma. Dalam sediaan bernoda, semua tahap disintegrasi granulosit neutrofilik dapat diamati - dari pembengkakan nukleus hingga penghancuran total struktur sel, bila kontur sitoplasma tidak terlihat, dan ruas inti menjadi tidak berbentuk, terdiri dari jaring kromatin yang halus. Milik sel-sel ini ke dalam granulosit neutrofilik dapat dibentuk hanya dengan reaksi terhadap peroksidase: adanya butiran hijau-kuning atau coklat di sitoplasma yang hancur.

Terkadang pada cairan serebrospinal terdapat granulosit neutrofilik dengan nukleus piknotik berupa gumpalan hiperkromik berbentuk tidak beraturan.

Granulosit neutrofilik muncul di cairan serebrospinal dengan perdarahan di ruang subarachnoid, penyakit radang pada sistem saraf, setelah operasi bedah saraf. Adanya granulosit neutrofilik dengan darah dalam cairan serebrospinal menunjukkan peradangan meninges..

Dominasi granulosit neutrofilik yang tidak berubah menunjukkan proses inflamasi akut.

Tiba-tiba munculnya pleositosis neutrofil diamati ketika abses pecah di bawah meninges.

Dengan abses, jauh di dalam jaringan otak, biasanya diamati pleositosis ringan dengan dominasi limfosit.

Dengan pelemahan proses inflamasi di cairan serebrospinal muncul bentuk degenerasi dari granulosit neutrofilik.

Adanya granulosit neutrofilik yang berubah dan tidak berubah merupakan karakteristik dari proses inflamasi yang sedang berlangsung. Ini harus diperhitungkan, granulosit neutrofilik yang tidak berubah muncul di cairan serebrospinal saat darah segar ditambahkan, dalam kasus seperti itu, penentuan sitosis korektif diperlukan.

Granulosit eosinophilic

Granulosit eosinofilik dalam sediaan asli cairan serebrospinal berdiferensiasi dengan sel lain dengan adanya butiran kasar mengkilap yang khas, mengisi sitoplasma. Sel dengan inti dua lobus jarang terjadi, bentuk inti tunggal paling sering diamati. Dalam sediaan pewarnaan, morfologi granulosit eosinofilik adalah sama, seperti dalam darah. Dalam cairan serebrospinal, granulosit eosinofilik yang hancur paling sering ditemukan.

Kandungan granulosit eosinofilik dalam cairan serebrospinal dengan sistiserkosis berkisar dari 1 untuk 46%.

Munculnya meningitis sebagai komplikasi arachnoiditis sistiserkosa disertai dengan munculnya pleositosis neutrofilik dan penurunan jumlah granulosit eosinofilik.. Untuk pembentukan abses kandung kemih echinococcal di otak, adanya granulosit neutrofilik dan eosinofilik dalam isinya adalah karakteristik, yang berfungsi sebagai tanda bantu dalam membedakannya dengan abses. Terkadang sejumlah besar granulosit eosinofilik dapat ditemukan dalam isi kista tumor otak dan sumsum tulang belakang. (nevrinome.dll, craniopharyngioma, ependymoma, metastasis kanker di otak). Peningkatan jumlah granulosit eosinofilik yang nyata dalam cairan serebrospinal dapat diamati setelah cisternoskopi ventrikel..

Setelah pengangkatan tumor otak dengan penyembuhan aktif luka pasca operasi, jumlah granulosit eosinofilik meningkat, apa yang dapat dianggap sebagai reaksi alergi lokal meninges terhadap cedera dan penyerapan produk pembusukan jaringan.

Sel yang diubah dan bayangan sel

Karena sifat sitolitik dari cairan serebrospinal, sel, tinggal di dalamnya untuk waktu yang lama, hanya mempertahankan kontur sitoplasma dan sisa-sisa inti. Tidak mungkin menentukan afiliasi morfologis mereka. Paling sering, granulosit neutrofilik mengalami perubahan seperti itu., terkadang ini adalah sel tumor ganas. Sel membran arachnoid dan ependyma dari ventrikel serebral mudah disitolisasi.

Basofil jaringan ditemukan dalam cairan serebrospinal setelah intervensi bedah saraf.

Sel arachnoid dalam cairan serebrospinal

Sel arachnoid (arachnoendothelium) Apakah sel epitel unilamellar, mereka dapat dibedakan seperti saat menghitung sitosis di dalam ruangan, dan di bernoda, dibuat dari sedimen cairan serebrospinal. Ini adalah sel yang agak besar dengan bentuk tidak beraturan atau bulat dengan inti bulat atau oval yang relatif kecil., a berlokasi.

Inti sel diwarnai secara hipokromik, dan sitoplasma pucat- atau warna biru keabu-abuan, Namun, ia memiliki kontur yang tidak teratur dan sering mengandung partikel-partikel yang difagositosis (tetesan lemak, elemen seluler, vakuola). Sitoplasma sel meninges arachnoid sering rusak, dalam kasus seperti itu, inti karakteristik dan potongan sitoplasma ditemukan. Kromatin inti memiliki struktur lingkaran halus atau granular, terkadang satu nukleolus biru terlihat. Ukuran inti dari 5 untuk 19 m.

Kehadiran sel arachnoid tunggal dalam cairan serebrospinal belum menunjukkan patologi, karena sel-sel ini melapisi ruang subarachnoid dan, mengelupas, masuk ke cairan serebrospinal. Peningkatan jumlah sel arachnoid diamati dengan arachnoiditis, cysticercosis otak. Sel membran arakhnoid yang terletak terpisah dan simplasnya berupa kelompok inti dengan berbagai ukuran dan intensitas warna ditemukan dalam isi kista arakhnoid., dikelilingi oleh sitoplasma pucat tanpa batas yang jelas antar sel.

Sel plexus koroid

Dari pleksus koroid ventrikel ke dalam cairan serebrospinal, poligonal, bulat, kadang berbentuk silinder besar (15-19 mikron) sel. Kecil (4-5 mikron) inti terletak di tengah atau secara eksentrik, hiperkromatik, sitoplasma eosinofilik, intens berwarna. Ada granularitas dalam sitoplasma sel pleksus koroid, terkadang berupa gumpalan dan inklusi, ukuran 1-3 mikron, bulat atau tidak beraturan, warna kehijauan atau kebiruan. Beberapa sel mungkin memiliki vakuola atau sel darah merah yang ditangkap.

Sel-sel pleksus koroid paling sering ditemukan dalam cairan dari ventrikel otak.

Sel ependymal ventrikel dalam cairan serebrospinal

Sel ependymal ventrikel dalam cairan serebrospinal, diperoleh dengan pungsi lumbal, mudah hancur selama persiapan dan pewarnaan sediaan. Dalam noda noda, mereka terlihat seperti formasi, terdiri dari biji berbentuk oval dengan struktur yang halus. Pada beberapa sel, sitoplasma yang diawetkan mengelilingi inti dalam bentuk batas yang sempit.

Dalam cairan dari ventrikel otak, sel ependyma dengan struktur yang diawetkan paling sering ditemukan, secara morfologis menyerupai sel arachnoid, tetapi kernelnya berwarna lebih pucat dan lebih halus, distribusi kromatin homogen. Kutub dari sel oval ependyma seringkali runcing, sitoplasma memiliki warna keabu-abuan. Ada sel terpisah dan kelompok besar, di mana batas sel individu mungkin tidak ditentukan.