Metode untuk mendeteksi Leishmania di gesekan jaringan yang terkena isolasi kultur murni
Ketika menabur menggores jaringan yang terkena dari pasien ke Leishmania media nutrien spesifik berkembang biak dan mereka dapat dideteksi dengan mikroskop.
Reagen
Среда W.W.W. untuk budidaya Leishmania (14 g agar, 6 g natrium klorida, tentang 150 ml darah kelinci defibrinated, diambil langsung dari hati sebelum menyiapkan media, 900 ml air suling). Dalam air suling ditambahkan natrium klorida dan agar. Labu mengandung media dipanaskan sampai leleh lengkap agar-agar, dan 20-30 menit disterilkan dalam sterilisasi uap pada 147,1 kPa (15 di).
Didinginkan sampai 56 ° C agar tambah darah kelinci defibrinated steril, diaduk dengan memutar labu dan diisikan ke dalam pipet steril 4 tabung ml. Flask agar darah selama dispensing adalah mandi air pada suhu 58 ° C. Tabung dengan tips menengah.
Setelah pemadatan agar-agar, mereka ditempatkan dalam inkubator selama satu hari di 37 ° C untuk kontrol sterilitas dan menerima kondensat cair. Jika diproduksi tidak cukup, sebelum disemai dalam botol steril, Anda dapat menambah sekitar 1 Salah satu ml solusi berikut: 0,85 % natrium klorida, 1 % solusi pepton, Solusi Hanks, lactalbumin hidrolisat atau media nutrisi lainnya dalam konsentrasi isotonik.
Metode mendeteksi Leishmania di kerokan jaringan yang terkena isolasi kultur murni
Bila Anda memilih suatu budaya hati-hati mengikuti aturan sterilitas. Daerah uji kulit dilap dengan kapas, dibasahi 70 % alkohol.
Setelah penguapan alkohol akhir tajam dari mata pisau bedah sayatan panjang tuberkulum steril dari 2-3 mm. Dari bawah dipotong dengan steril pipet jangan menggores jaringan. Penurunan yang dihasilkan cairan serosa-berdarah dipindahkan ke tabung reaksi dengan lingkungan. Manipulasi dilakukan beberapa kali, bahan menabur setiap kali tabung baru. Telinga busi tertanam dalam parafin atau menempatkan mereka topi karet dan ditempatkan dalam inkubator pada 22-24 ° C.
Evaluasi hasil
Tanaman diperiksa di bawah mikroskop setiap hari untuk mengidentifikasi agen penyebab. Jelajahi obat asli, dibuat dengan metode tetes hancur, lensa 40×40. Hasil dianggap menabur negatif, jika di 40 hari patogen tidak ditemukan. Budaya yang memanjang Leishmania (10-12 Mikron dengan kabel).
Penerapan metode kultur yang paling berguna ketika bentuk tuberkuloid dari leishmaniasis, diagnostik yang metode lain mungkin kurang efektif.
