Diagnosis imunologis disebabkan infertilitas

Selama hidup lama menikah tanpa menggunakan kontrasepsi, dan di hadapan mikro-daerah selaput lendir pada organ genital dapat terjadi secara bertahap melihat antigen imunisasi spermatozoa. Pemeriksaan fisik dari pasangan, terdiri dalam pernikahan tandus, tidak dapat menentukan penyebab infertilitas pada 10-15 % kasus. Hal ini dalam kelompok ini pasangan tidak subur ketika menerapkan metode khusus investigasi kanal serviks rahasia, plasma mani dan sperma serum antibodi sering terdeteksi (ASAT), Menggunakan tes kualitatif dan kuantitatif dari penelitian imunologi.

Uji Postkoytalnыy (FCT)

Uji Postkoytalnыy (FCT) Hal ini mengacu pada immunoassay kualitatif. Hasil tes negatif menunjukkan tidak adanya sperma dalam rahasia kanal serviks, tetapi Anda tidak dapat mengidentifikasi penyebab ketidakhadiran mereka.

Metode. Dengan jumlah sperma motil dalam rahasia kanal serviks, diperoleh setelah coitus, menetapkan tingkat pelanggaran kemampuan mereka menembus dengan infertilitas atau kekebalan terhadap mereka lendir dari saluran serviks.

FCT diperlukan untuk melaksanakan ketentuan sebagai berikut: Studi ini harus dilakukan pada periode ovulasi, yang mengungkapkan colpocytologic atau metode lainnya, setelah pasangan pantang sebelum dalam waktu 2-3 hari.

Metodologi. Setelah coitus biasa bagi seorang wanita 30 menit harus berbaring telentang, menekuk lutut Anda. Douching dan membersihkan dilarang, hanya perlu pembalut, yang dihapus selama penangkapan untuk studi lendir dari saluran serviks. Setelah 2-4 jam, diijinkan dan setelah 6-10 jam (waktu, berlalu sebelum studi, ditunjukkan dalam analisis) setelah hubungan serviks terkena menggunakan cermin Cuzco dan lendir endoserviks disedot atau jarum suntik tuberkulin (tanpa jarum), pipet dengan bola karet, atau polyethylene kateter.

Ketika mencuci instrumen sebaiknya tidak digunakan desinfektan, karena mereka mempengaruhi motilitas sperma. Satu tetes lendir yang dihasilkan dari saluran serviks ditransfer ke slide kaca dihangatkan, coverslip dilapisi, Wilayah dilumasi dengan parafin cair bocor. Formulasi segera mikroskopiruyut (lensa mata 7X, Tujuan 40X), menentukan jumlah dan sifat motilitas sperma. Obat dapat dideteksi dengan sperma aktif motilitas progresif, gerak osilasi (fenomena ayunan) dan tetap.

Diterima menyediakan lima jenis kesimpulan FCT.

• Baik (norma yang relevan): dalam lima bidang pandang hingga 15-20 dengan sperma aktif mobilitas progresif dan lebih. Sperma dengan fenomena osilasi kurang dari 25 %.
• Memuaskan: dalam lima bidang pandang up 10 sperma aktif mobilitas progresif dan kurang 25 % sperma dengan fenomena ayunan.
• Miskin: kurang 5 spermatozoa di lima bidang pandang.
• Kurang: tidak adanya sperma.
• Ragu-ragu: dalam lima bidang pandang lebih 5 sperma aktif-motil dan lebih 25 % fenomena ayunan.

Ketika jenis kelima FCT sering mengamati ketidakcocokan antara pasangan kekebalan, Oleh karena itu perlu untuk menentukan ACAT yang. Untuk mengidentifikasi ACAT rahasia endoserviks, plasma, air mani atau serum darah dan menampilkan mereka (aglutinasi atau bergerak) Hal ini membutuhkan pengangkatan immunoassay kuantitatif.

Sebuah PBC negatif Studi dimulai dengan definisi menembus (penetrasi) kemampuan sperma melalui uji penetrasi (Fri.) dan kerentanan terhadap sekresi sperma dari saluran serviks menggunakan kontak tes sperma dan lendir serviks (TKSTSS).

Uji Penetracionnyj (TP)

Panjang kapiler tipis 10 Lihat mengetik selama ovulasi lendir dari saluran serviks. Salah satu ujung terbuka dari kapiler menutup tanah liat, dan yang kedua ditempatkan dalam tabung reaksi dengan ejakulasi segar tes (tidak lagi 3 jam setelah ejakulasi). Dengan tanah liat di kapiler yang melekat pada tabung tegak. Sampel diinkubasi dalam termostat pada suhu 37 ° C. 1 tidak. Pada kualitas ejakulasi dinilai oleh kedalaman penetrasi sperma dalam lendir dari saluran serviks. Ada tiga jenis gas rumah kaca.

• Setuju - Kedalaman penetrasi (jarak terbesar dalam sentimeter, bepergian setidaknya sperma) di atas 5 cm; jumlah sperma pada titik penetrasi lebih maksimal 5 terlihat, dan jumlah spermatozoa motil di ketiga atas kapiler lebih besar dari 50 %.
• Ragu-ragu - Sebuah kedalaman penetrasi hingga 5 Lihat jumlah sperma kurang 5, mobilitas mereka di ketiga atas dari mencapai kapiler 50%.
• Kurang - Kedalaman penetrasi sperma mencapai 1 cm.

Kemampuan sperma untuk penetrasi Hal ini tergantung pada fase siklus menstruasi. Dia mulai muncul dari hari 9 dari siklus menstruasi,, secara bertahap mengaktifkan, mencapai ekspresi maksimum dalam periode ovulasi, diadakan pada tingkat ini selama dua hari, dan kemudian secara bertahap menurun.

Semen tes kontak dan lendir serviks (TKSTSS)

Pada slide adalah meletakkan setetes lendir dari saluran serviks, diambil dari perempuan selama ovulasi, dan sejumlah drop ukuran yang sama ejakulasi. Kedua tetes ditutupi dengan kaca penutup, yang sedikit ditekan untuk, bergabung ke drop. Obat ini ditempatkan dalam ruang lembab (Cawan petri dengan kapas yang dibasahi) dan diinkubasi di termostat pada suhu 37 ° C. 1 tidak.

Dengan kondisi tersebut, sperma normal menembus rahasia kanal serviks yang normal, seperti dapat dilihat di bawah mikroskop pada perbesaran 200X. Untuk menjelaskan reaksi dekat batas antara dua media yang menghitung jumlah menembus rahasia sperma kanal serviks di dua bidang yang berdekatan pandang.

Dengan TKSTSS sangat baik di dua bidang pandang mengungkapkan lebih 25 sperma motil aktif dalam fenomena ayunan kurang 25 %. Jika TKSTSS memuaskan dalam dua bidang pandang mengungkapkan lebih 15 sperma motil aktif, TKSTSS rendah - kurang dari 15. Negatif absen penetrasi TKSTSS, jika dipertanyakan - fenomena osilasi melebihi 25 %.

Dalam tes ini, seperti dalam PCT, fenomena ayunan, melebihi 25 %, mungkin, Ini menunjukkan adanya ACAT dan membutuhkan penunjukan immunoassay kuantitatif.

Menggunakan semen dan sekresi serviks saluran pria infertil dan subur di berbagai jumlah untuk menggunakan TKSTSS mengidentifikasi suami tidak subur.

• Contoh 1. Diambil saluran rahasia serviks pada wanita pasangan infertil dan kontrol ejakulasi pria sehat. Baik TKSTSS menunjukkan kemampuan penetrasi lemah sperma suaminya, dan kerentanan sekresi normal dari saluran leher rahim.
• Contoh 2. Diambil rahasia penuh wanita sehat kanal serviks dan suaminya ejakulasi pasangan infertil. Bad TKSTSS menunjukkan penetrasi sperma lemah.
• Contoh 3. Diambil wanita endoserviks pasangan infertil rahasia dan kontrol ejakulasi pria sehat. Bad TKSTSS menunjukkan inferioritas kanal serviks rahasia, yang jelas tidak menembus spermatozoa yang normal.

Tes imunologi kuantitatif

Mikroagglyutinatsionny tes Friberg

Mikroagglyutinatsionny tes Friberg (TF) cukup sensitif dan tersedia untuk laboratorium diagnostik klinis. Menggunakan TF dapat menentukan adanya ACAT dan aglutinasi titer dalam berbagai bahan (ejakulasi plasma, ekstrak lendir dari leher rahim dan pada serum kedua pasangan).

Reagen:

1. Fosfat buffered saline (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Minyak Vazelinovoe.

Peralatan: mikroskop, jarum suntik tuberkulin, mikroagglyutinatsionnye pipetter 1 ml, Kapasitas mikropipet 0,1 ml.

Metode. Tes darah serum tidak aktif dengan inkubasi dalam inkubator di 56 ° C. 30 m. Berseru, diperoleh masturbasi, segera diencerkan sehingga FSB, konsentrasi sperma adalah 40 juta. di 1 ml.

Karena materi (ejakulasi plasma, ekstrak rahasia kanal serviks atau serum) sedang mempersiapkan serangkaian pengenceran 1:4 untuk 1:128 menggunakan sebagai cairan untuk pengenceran FSB. Di sumur dengan mikroagglyutinatsionnyh minyak parafin planchettes jarum suntik tuberkulin dengan jarum diperkenalkan (di bawah minyak vazelinovoe) Tetes kecil dari masing-masing pengenceran bahan uji. Setelah masing-masing sampel dicuci empat kali jarum suntik. Dalam setiap pengenceran ditambahkan ke 5 Penurunan kali lebih kecil dari ejakulasi, dan dengan 4 jam pada suhu kamar terdeteksi menggumpal. Pemuliaan terakhir, dimana di bawah mikroskop di 100X perbesaran terdeteksi 3 menggumpalkan dikaji dan lebih, aglutinasi titer sesuai ACAT.

Uji Spermoimmobilizuyuschy Izodzhima (SIT).

Titer ACAT melumpuhkan serum, plasma atau air mani ekstrak kanal serviks rahasia diatur dengan jumlah sperma motil dengan adanya antigen (sperma).

Komponen.

1. Berseru, yang diproduksi dan disiapkan sama, untuk TF menggunakan FSB; motilitas melebihi 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya serum marmut.

3. Serum manusia kekebalan (IChS), memberikan dengan adanya komplemen melalui 1 imobilisasi inkubasi h 90 % sperma.

4. Serum manusia normal (NCHS), tidak aktif dengan pemanasan pada suhu 56 ° C. 30 m.

5. Tes serum tidak aktif, plasma dan air mani ekstrak kanal serviks rahasia.

Metode. Untuk mengevaluasi kegiatan pelengkap melumpuhkan tabung 1 diperkenalkan 0,5 ml larutan natrium klorida isotonik, untuk menentukan perubahan motilitas sperma tanpa ASAT tes tabung 2 - 0,5 ml NHS, imobilisasi kontrol tabung ketiga - 0,5 ml ICHS dan untuk menentukan ACAT melumpuhkan tabung 4 - 0,5 ml serum, atau plasma ejakulasi, ekstrak atau sekresi endoserviks.

Kemudian, masing-masing tabung diperkenalkan oleh 0,1 ml pelengkap. Hal terakhir untuk semua tabung ditambahkan 0,05 suspensi sperma ml dalam konsentrasi 40 juta. di 1 ml. Tabung tripod ditempatkan dalam inkubator pada suhu 37 ° C 1 tidak. Tabung dikeluarkan dari oven dan hati-hati terguncang untuk mencerminkan sperma agglutinated menetap.

Untuk mengevaluasi hasil di bawah mikroskop pembesaran tinggi (400X) dihitung persentase sperma motil dalam setetes tabung uji, diendapkan pada slide kaca dan ditutup dengan penutup. Demikian juga, ia menetapkan persentase sperma motil dalam tetesan dari tabung dengan NHS dan ICHS. Hasil reaksi memperhitungkan dengan rumus

SIT = K / A

dimana K - jumlah sperma motil dalam kontrol dengan ICHS dan NHS;

Tentang - jumlah sperma motil dalam tabung reaksi (tes serum, atau plasma ejakulasi, atau rahasia kanal serviks).

Dengan rata-rata SIT<2 tes negatif (jumlah sel sperma motil dalam kontrol dan dalam tabung uji kurang lebih sama), Jika indeks CTI>2 - Tes ini positif, t. Ini adalah. dalam materi (serum, plasma atau air mani ekstrak kanal serviks rahasia) yang bergerak ACAT.

• Contoh 1. Kontrol tanah untuk ICHS - 10 % sperma motil. Kontrol kedua dengan NHS - 80% sperma motil. Dua kontrol bersama-sama - 90 % sperma motil. Dalam tabung tes - 80 % sperma motil.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Tes negatif, amobil ACAT absen.

• Contoh 2. Dalam tabung tes - 40 % sperma motil, Namun, di kontrol, Contoh di 1.

KN = 90/40 = 2,2

Tes positif. Ada antibodi amobil (ASAT), melalui mana sperma motilitas berkurang secara signifikan.