Anemia, karena aktivitas kekurangan dehidrogenase glukosa-6-fosfat

Aktivitas defisit glukozo-6-fosfatdegidrogenaza (G-6-FD) adalah kelainan keturunan paling umum sel darah merah, menyebabkan hemolitik krizam, terkait dengan akuisisi sejumlah obat cara. Keluar krisis pada kebanyakan pasien ada keadaan total kompensasi, Meskipun individu memegang konstan hemolitik anemia.

Deskripsi pertama kegiatan defisit,-6-FD pada 1956 g. pada orang, mengambil obat anti malaria profilaksis primaquine. Terlepas dari studi ini 1957 g. Tn. kekurangan adalah 6-FD ditemukan dalam eritrosit sakit, yang secara berkala amati krisis hemolitik tanpa menerima obat-obatan.

Sekarang dijelaskan di lebih 250 berbagai bentuk mutan g-6-PD. Mereka berbeda dalam mobilitas electrophoretic enzim, afinitas nya untuk substrat adalah fosfat glukosa 6 dan nikotinamidadenindinukleotidfosfatu (NADP) Konsekuensi dari rendah afinitas adalah kurangnya aktivitas enzim dalam kondisi, Ketika konsentrasi substrat ketat dibatasi oleh kecepatan reaksi pendidikan mereka sebelumnya. Kurangnya aktivitas tidak berarti dalam kebanyakan kasus rambut rontok enzim seperti meskipun tidak dapat diamati dan. Paling sering, ketiadaan atau mengurangi aktivitas enzim adalah hasil dari pasiennya berupa rendah patologis.

Gen struktural dan kontrol gen, membuat Tn. sintesis 6-FD, Terletak di kromosom X, Oleh karena itu, warisan kekurangan ini aktivitas enzim dalam eritrosit selalu membentuk dengan terkait-X.

Ada dua bentuk utama mutan, di mana penggantian asam amino tidak menyebut pusat aktif, dan oleh karena itu kedua mutasi-mutasi luas ini normal. Mereka berbeda dari satu sama lain dalam mobilitas electrophoretic, Namun, afinitas untuk substrat mereka adalah sama. Pada tata-nama modern, salah satu bentuk ini, umum di Eropa, disebut bentuk BB, dan lainnya, tren di Afrika adalah bentuk A. Saat ini digambarkan dan mutan bentuk lain, yang juga tidak berbeda dalam indikator kinematis, tetapi memiliki mobilitas electrophoretic berbeda.

Enzim Sceplennost′ dengan Paul memberikan cukup dominasi laki-laki di antara orang-orang dengan manifestasi klinis patologi. Ia mengamati pada laki-laki homozygous, mewarisi patologi ibu dengan kromosom X nya, homozygous perempuan memiliki (penyakit merupakan warisan dari kedua orang tua) dan bagian dari wanita heterozigot, nasledovavših penyakit dari satu orang tua dengan fenotipe mutan.

Paling sering defisit aktivitas,-6-FD ditemukan di negara-negara Eropa, Terletak di pantai Mediterania, Yunani, Italia, serta di beberapa negara di Amerika Latin, Afrika, dll.

Mungkin, bahwa akumulasi yang sangat tinggi dari sebuah gen yang abnormal di beberapa daerah memfasilitasi diawetkan adat perkawinan, yang mengarah ke akumulasi pada populasi wanita homozygous, memberikan berat manifestasi klinis penyakit akan lebih, daripada geterozigotnye media, dan meningkatkan kemungkinan kelahiran laki-laki homozygous, juga sebagai luas di masa lalu, ini tempat tropis malaria.

Menurut hipotesis yang ada, orang, Setelah Mr defisit 6-FD, bertahan tropis malaria dan jarang mati dari penyakit ini. Mendukung hipotesis ini mengatakan fakta penyebaran yang tidak merata parasit antara eritrosit heterozigot wanita. Ditemukan, bahwa dalam sel normal mengandung sejumlah besar banyak parasit, daripada di langka. Terdapat dua penjelasan hipotetis ini pada kenyataannya. Yang pertama dari mereka: eritrosit g-6 defisit-FD tidak mampu menahan efek dari parasit dan segera perpecahan dalam sistem makrofag fagosit, mana mati Plasmodium. Sudut pandangan yang lain melibatkan persediaan bagi pengembangan glutathione berkurang parasit, jumlah yang berkurang dalam eritrosit dengan defisit Tn. 6-FD.

Etiologi dan patogenesis

Tahap pertama dari dampak obat adalah transformasi dalam tubuh, pindah ke bentuk aktif, yang dapat menyebabkan perubahan dalam struktur membran eritrosit. Bentuk aktif obat-obatan berinteraksi dengan 550nm yang. Ketika jumlah hidrogen peroksida.

Daur ulang glutation peroksidase sistem menggunakan mendetoksifikasi beberapa peroksida, reaksi proses daur ulang glutathione teroksidasi.

Pada orang sehat, krisis hemolitik akut yang berkembang dengan pengenalan produk obat dalam jumlah besar (dosis beracun). Kriz mungkin timbul, Ketika sistem mengembalikan glutathione mampu mengatasi kelebihan membentuk kompleks dan teroksidasi glutathione. Dengan defisit kegiatan dehidrogenase fosfat glukosa 6 dan mengembalikan terganggu NADP, Meskipun aktivitas normal glutathione reduktase, melanggar pemulihan, karena tidak ada sumber hidrogen normal. Daur ulang glutathione tidak dapat menolak oksidatif efek dari dosis terapi konvensional obat-obatan. Hal ini menyebabkan oksidasi hemoglobin, hilangnya heme dari molekul hemoglobin, kerugian dalam globin gen sirkuit. Limpa rilis darah dari Taurus Gejnca. Dalam melakukannya, kehilangan bagian dari permukaan sel darah merah, yang menyebabkan kematian.

Patogenesis anemia hemolitik, terkait dengan konsumsi kacang Fava, masih banyak tidak diketahui. FAVISM (favizm) mengembangkan hanya dalam beberapa individu dengan kekurangan aktivitas g-6-PD. Mungkin, untuk menunjukkan anemia ini memerlukan kombinasi dari dua enzimatik Cacat. Mungkin, Apa yang kita bicarakan tentang kurangnya clearance dalam beberapa individu zat beracun, terkandung dalam kacang kuda, atau pada pembentukan suatu metabolit, memanggil pelanggaran sulfhydryl Rombongan eritrosit. Pada individu yang sehat menerima sejumlah kecil kacang kuda tidak menyebabkan anemia hemolitik diucapkan, karena dari presence berkurang glutathione dalam sel darah merah mampu menangkal efek toksik metabolit. Pusaka defisit ini, rupanya, autosomnoe dominan. Dengan kombinasi transformasi yang luar biasa dalam tubuh zat beracun, terkandung dalam kacang kuda, dengan defisit Tn. aktivitas 6-FD mewujudkan tanda-tanda klinis primahinovoj anemia.

Manifestasi klinis

Para ahli yang membagi Tn. 6-FD sesuai dengan manifestasi klinis dari homozygous pasien memiliki pilihan dan tingkat aktivitas dalam eritrosit empat kelas.

Kelas pertama -pilihan, disertai dengan anemia hemolitik kronis.

Kelas kedua -pilihan kegiatan,-6-FD di eritrosit adalah 0 10 % dari norma, pembawa yang mengarah ke kurangnya anemia hemolitik keluar kriza, dan krisis, terkait dengan mengambil obat atau minum kacang kuda.

Kelas ketiga -pilihan kegiatan di eritrosit 10-60 % dari norma, di mana cahaya dapat diamati manifestasi klinis, terkait dengan asupan obat-obatan.

Kelas empat -varian dengan normal atau dekat dengan tingkat normal dari aktivitas, tidak disertai Patologi klinik.

Ketika seorang anak telah lahir ada anemia hemolitik, terkait dengan kedua yang pertama, dan kelas kedua Tn. defisit 6-FD.

Tingkat aktivitas Tn. 6-FD di eritrosit tidak selalu berkorelasi dengan tingkat keparahan manifestasi klinis. Dalam banyak versi kelas pertama didefinisikan oleh 20-30 % tingkat aktivitas enzim. Selain itu, nol tingkat aktivitas pada beberapa pasien hal ini tidak mengamati gejala klinis. Hal ini disebabkan, Pertama, dengan sifat-sifat enzim lutantnyh, kedua, yang paling disukai, dengan kecepatan kliring obat-obatan citohromnym peralatan hati pasien.

Paling sering defisit aktivitas,-6-FD tidak menyediakan manifestasi klinis tanpa krisis hemolitik provokasi khusus. Dalam kebanyakan kasus, krisis hemolitik dimulai setelah mengambil sulfanamides (norsulfazola, streptocida, sulfadimetoksina, sulfazil-natria, etazola, biseptola), obat anti-malaria (primahin, xinina, akrihina), obat nitrofuranovyh (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOC, nevigramona), obat-obatan izonicotinova asam (tubazida, ftiwazida), PASC-natrium, serta nitrogliserin.

Obat anti malaria dengan aktivitas g-6-PD dapat ditugaskan delagil, dari sulfanilamidnykh-ftalazol. Sejumlah obat-obatan, dalam dosis tinggi, menyebabkan krisis hemolitik, dalam dosis kecil dapat digunakan dengan defisit Tn. aktivitas 6-FD. Ini termasuk asetilsalisilat asam, amidopirin, fenacitin, levomicetin, Streptomisin, antidiabetics sulfa narkoba.

Semua obat-obatan, dapat menyebabkan krisis hemolitik, mengkatalisasi oksigen molekul hemoglobin oksidatif denaturatia.

Manifestasi klinis dari penyakit dapat terjadi pada hari yang kedua-the ketiga dari awal penerimaan obat-obatan. Awalnya muncul mudah scleral, urin gelap. Ketika Anda berhenti minum obat selama periode krisis hemolitik parah tidak mengembangkan. Jika terus pengobatan, untuk 4-5 hari mungkin terjadi hemolitik Kriz alokasi urin hitam atau kadang-kadang coklat, yang berhubungan dengan sel darah merah intravaskuler disintegrasi. Hemoglobin bisa menurun sebesar 2-3 %.

Ketika penyakit parah adalah suhu tubuh meningkat, tampak sakit kepala tajam, nyeri pada ekstremitas, muntah, kadang-kadang diare. Mengi terjadi, menurunkan tekanan darah. Sering meningkatkan limpa, Kadang-kadang hati.

Dalam kasus yang jarang, gagal ginjal berkembang, terkait dengan penurunan yang tajam pada ginjal filtrasi dan gumpalan darah memblokir tubulus ginjal.

Laboratorium indikator

Dalam studi darah anemia diidentifikasikan dengan peningkatan jumlah reticulocytes. Telah ada peningkatan jumlah sel-sel dengan pergeseran untuk mielozitov. Pada beberapa pasien,, terutama pada anak-anak, jumlah sel kadang-kadang dapat menimbulkan angka yang signifikan (100 T di 1 l dan lebih). Jumlah trombosit tidak berubah. Di warna eritrosit Crystal Violet dalam krisis hemolitik parah terdeteksi sejumlah besar Taurus Gejnca.

Terdeteksi tajam iritasi merah sumsum tulang kuman. Kandungan serum peningkatan gratis hemoglobin, sering peningkatan kadar bilirubin karena tidak langsung. Menggunakan sampel benzidinovoj terdeteksi adanya hemoglobin dalam urin tanpa sel darah merah, kadang-kadang terdeteksi hemosiderin.

Dalam beberapa bentuk insufisiensi glukozo-6-fosfatdegidrogenaza ada hemolisis menahan diri, t. Ini adalah. krisis hemolitik berakhir, meskipun, pasien terus mengambil obat, yang menyebabkan Kriz hemolitik. Kemampuan untuk membatasi hemolisis disebabkan oleh naik hampir ke angka normal tingkat aktivitas enzim dalam retikulocitah. Dalam kebanyakan bentuk itu berkurang secara signifikan.

Anak-anak memiliki berat krisis hemolitik terjadi lebih sering, dibandingkan pada orang dewasa. Aktivitas ekspresi 6 Tn. defisit-FD mereka kadang-kadang terjadi segera setelah lahir. Ini adalah penyakit hemolitik pada bayi baru lahir, tidak terkait dengan konflik imunologi. Hal ini dapat hanya keras, seperti dengan anemia hemolitik, karena ibu dan janin rezusnesovmestimost′û. Mungkin adanya kernicterus dengan gejala-gejala saraf yang mengerikan.

Patogenesis krisis ini belajar tidaklah cukup. Belum ditentukan, Apakah krisis ini terjadi secara spontan sehubungan dengan fisiologis kekurangan enzim glutation peroksidase aktivitas pada kelahiran atau menyebabkan mereka adalah penggunaan antiseptik tertentu saat memproses tali pusat anak. Mungkin, bahwa kadang-kadang krisis terkait dengan ibu dari beberapa obat-obatan.

Dalam beberapa kasus krisis hemolitik pada defisit, Mr aktivitas 6-FD terjadi terhadap latar belakang dari penyakit menular: Flu, Salmonelosis, virus hepatitis. Krisis dapat juga diprovokasi oleh azidozom diabetes mellitus atau kekurangan ginjal.

Sebagian kecil pasien dengan defisiensi aktivitas g-6-PD diamati konstan hemolitik anemia, terkait dengan mengambil obat. Dalam kasus ini, ditandai sedikit peningkatan dalam limpa, moderat normochromal anemia dengan peningkatan konten reticulocytes, èritrokariocitov dalam sumsum tulang dan tingkat bilirubin. Eksaserbasi penyakit muka baik setelah menerima obat-obatan di atas, baik dalam menghadapi infeksi.

Diagnostik

Dasar untuk diagnosis kekurangan enzim ini eritrosit adalah untuk menentukan aktivitas g-6-PD di probanda dan kerabatnya. Metode kualitatif, digunakan untuk tujuan ini, untuk merekomendasikan metode paling sederhana.

Metode Bernstein memberi Anda kemampuan untuk tidak hanya mendiagnosa aktivitas defisit, Mr 6-FD di semua orang gemizigotnyh, Perempuan homozygous, tetapi kira-kira menilai kekurangan enzim ini dari heterozigot wanita. Metode ini berhasil mengungkapkan tentang 50 % Perempuan heterozigot. Keuntungan dari metode ini adalah kesesuaian untuk digunakan dalam survei penduduk massa dalam kondisi expedisi.

Metode yang didasarkan pada perubahan warna pewarna 2,6-dihlorfenolindofenol dan rekonstruksi. Depan g-6-PD terjadi oksidasi 6-fosfat glukosa dan pemulihan NADP dengan pembentukan NADP-n. Zat ini mengembalikan fenazinmetasul′fat, yang pada gilirannya mengembalikan 2,6-dihlorfenolindofenol. Fenazinmetasul′Fat beroperasi dalam reaksi ini sebagai sangat aktif vektor elektron dari Mr NADP warna. Tanpa fenazinmetasul′fata reaksi adalah beberapa jam, dan di hadapan fenazinmetasul′fata perubahan warna terjadi selama 15- 30 m.

Reagen.

1. Larutan NADP: 23 mg NADP dilarutkan dalam 10 ml air.
2. Larutan glukosa-6-fosfat (G-6-s): 152 mg garam natrium fosfat glukosa 6 dilarutkan dalam 10 ml air. Barium garam fosfat glukosa 6 harus Dialihkan menjadi garam sodium. Untuk melakukan ini, berat badan 265 mg barium garam fosfat glukosa 6, dilarutkan dalam 5 ml air, menambahkan 0,5 ml 0,01 Solusi M asam klorida dan 1 mg kering natrium sulfat. Percepatan disentrifugasi. Nadosadočnyj lapisan menetralisir 0,01 Larutan M natrium hidroksida dan air suling 10 ml.
3. Solusi fenazinmetasul′fata: 2 fenazinmetasul′Fata mg dilarutkan dalam 100 ml TRIS-penyangga 0,74 M; pH 8,0.
4. Pewarna solusi 2,6-dihlorfenolindofenola (garam natrium): 14,5 mg pewarna dilarutkan dalam 100 larutan penyangga ml HCl TRIS (0,74 M; pH 8,0). Larutan penyangga yang disiapkan dari 1,48 Solusi M TRIS-gidroksimetilaminometana (42,27 d 250 ml air) dan 1,43 Solusi M asam klorida (2 fiksanala ampul, mengandung 0,1 g-EQ, Bawa air 135 ml). K 230 ml TRIS-gidroksimetilaminometala ditambahkan 110 ml asam klorida, membawa pH 8,0 dan tambahkan air untuk 460 ml.

Sebelum digunakan, mempersiapkan campuran reagen: 1 tidak. solusi NADP (1), 1 tidak. Tn. solusi 6-f (2), 2 tidak. solusi fenazinmetasul′fata (3) dan 16 tidak. Solusi 2,6-dihlorfenolinodofenola (4).

Metode.

Dalam tabung, mengandung 1 ml air suling, menyumbangkan 0,02 ml darah.

Setelah terjadinya hemolisis menambahkan 0,5 ml dari campuran reagen. Hasil memperhitungkan melalui 30 m. Reaksi dianggap sebagai normal dengan penuh warna pewarna. Dimana, Kapan perubahan warna pewarna tidak terjadi (tetap intens biru-hijau warna saya), reaksi sebagai tajam-positif. Jika intensitas berkurang, tapi tetap warna biru-hijau, reaksi berpikir positif Polo. Dimana, Ketika ada perubahan warna yang jelas, Tapi bila dibandingkan dengan kontrol tetap kehijauan warna, reaksi sebagai plus minus.

Rezkopoložitel′Nye dan reaksi positif diamati pada wanita dan pria homozygous gemizigotnyh. Kadang-kadang wanita geterozigotnye memberikan reaksi positif, tapi paling plus minus. Selain, Plus minus respon yang kadang-kadang diamati pada orang sehat sempurna dengan beberapa penurunan aktivitas enzim latar belakang penyakit atau mengambil obat. Plus-negatif reaksi harus diperhitungkan dan memverifikasi metode kuantitatif aktivitas enzim hanya ketika wanita telah menduga anemia hemolitik, disebabkan oleh kekurangan aktivitas fosfat glukosa 6 dehidrogenase. Anda tidak harus mengambil ke account plus-pembekuan reaksi dalam massa survei.

Reaksi positif yang keliru dapat dinyatakan dalam pasien dengan anemia karena fakta, apa 0,02 ml darah, sebagai tabung, mengandung sejumlah kecil sel darah merah dan, Karena itu, sejumlah kecil enzim. Dalam kasus ini, tabung dengan air suling harus menambahkan dua atau tiga eyedroppers (oleh 0,02 ml) darah, warna tabung ini sebelum menambahkan pewarna tidak berbeda dari kontrol.

Metode neon noda Beutler dan Mitchell Berdasarkan fluoresensi tertentu dari mengurangi NADP di panjang gelombang sinar ultraviolet (440- 470 nm), dinilai secara visual secara tetap.

Reagen.

1. TRIS-HCl buffer 0,5 M; pH 8,0: 60,55 Teresa dilarutkan dalam 800 ml air suling, menambahkan 20 ml HCl terkonsentrasi, membawa pH 8,0 dengan bantuan 2 M larutan HCl dan tambahkan air hingga 1 ml; Solusi toko untuk 36 hari di temperatur 4° c.
2. Larutan glukosa-6-fosfat 20 M: 6 mg garam Dinatrium fosfat glukosa 6 dilarutkan dalam 1 ml air suling; menyimpan hingga 2 hari di temperatur 4° c.
3. Larutan NADP 10 M: 8 mg NADP dilarutkan dalam 1 ml air suling; menyimpan hingga 10 hari pada suhu 4 ° C.
4. Larutan saponin 1 % menyimpan hingga 20 hari pada suhu 4 ° C.
5. Solusi teroksidasi Glutathione (10 ml): 2,4 mg glutathione dilarutkan dalam 1 ml air suling; menyimpan hingga 10 hari di temperatur 4° c.

Metode.

Sebelum Anda mendefinisikan inkubasi masak campuran, pencampuran 1 tidak. larutan glukosa-6-fosfat, 1 tidak. solusi atas Ph, 2 tidak. solusi saponin, 5 tidak. buffer dan 1 tidak. solusi Glutathione. Darah (0,01 ml) dibuat dalam tabung atau sel gemagglûtinacionnoj papan dan menambahkan 0,2 ml inkubasi campuran. Melalui 15 min micropipette pilih satu tetes campuran inkubasi (0,02 ml) dari masing-masing sampel dan menempatkan mereka di atas kertas dalam bentuk hromatografičeskuû noda diameter 10-12 mm. Noda kering di udara terbuka pada suhu kamar dan melihat di bawah sinar ultraviolet untuk mengevaluasi fluoresensi. Kontrol sampel dikenal sebagai darah normal. Kontrol kualitas reagen berisi tidak ada darah.

Evaluasi hasil.

Tidak adanya fluoresensi menunjukkan bahwa ada tidak ada kegiatan, kehadiran fluoresensi (intens cahaya biru) -ketersediaan kegiatan, sebagai cahaya lemah-intermediate reaksi. Di bawah kondisi percobaan metode tidak menghasilkan hasil negatif palsu. Sumber diagnosis positif palsu dapat disurvei telah menyatakan anemia, tetapi untuk tingkat yang jauh lebih rendah, daripada metode Berstein. Bahkan ketika dinyatakan anemia diamati, reaksi menengah, daripada ketiadaan fluoresensi.

Penggunaan metode kuantitatif untuk menentukan aktivitas g-6-PD memberikan kesempatan untuk mengidentifikasi perlambatan tidak hanya di gemizigotnyh dan homozygous pasien, Tapi wanita geterozigot. Karena, bahwa nomor reticulocytes dan warna mempengaruhi tingkat aktivitas enzim, Dianjurkan untuk mengubah hasil mempertimbangkan indikator ini.