कंपकंपी रात रक्तकणरंजकद्रव्यमेह – रोग Marchiafava मिशेल

कंपकंपी रात रक्तकणरंजकद्रव्यमेह - हेमोलिटिक एनीमिया का एक अपेक्षाकृत दुर्लभ अधिग्रहित रूप, एरिथ्रोसाइट्स की संरचना के परिवर्तन के साथ जुड़े, न्युट्रोफिल granulocyte और प्लेटलेट्स. इंट्रावस्कुलर हेमोलिसिस के लक्षणों के साथ होता है, जिसमें हीमोग्लोबिनुरिया देखा जाता है, gemosiderinuriya, प्लाज्मा मुक्त हीमोग्लोबिन के स्तर में वृद्धि. रोग अक्सर परिधीय नसों और आंतरिक अंगों के जहाजों के घनास्त्रता से जटिल होता है.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया की एटियलजि और रोगजनन

रोग का प्रथम विवरण इसमें दिया गया था 1882 जी. इसका अधिक विस्तार से वर्णन किया गया है 1928 जी.

रोग का सामान्य नाम है कंपकंपी निशाचर hemoglobinuria (पीएनजी), हालाँकि, यह रोग के सार से अच्छी तरह मेल नहीं खाता है, चूंकि कोई वास्तविक पैरॉक्सिज्म नहीं होता है और हीमोग्लोबिनुरिया हमेशा नहीं देखा जाता है.

हेमोसाइडरिनुरिया के साथ इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस, पीएनएच के अलावा, ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के कई रूपों में भी देखा जाता है, दोनों गर्मी के साथ, शीत एंटीबॉडी के साथ भी ऐसा ही है, विशेष रूप से थर्मल हेमोलिसिन वाले रूपों में, साथ ही वंशानुगत हेमोलिटिक एनीमिया के कुछ रूपों में भी, एरिथ्रोसाइट झिल्ली की संरचना के उल्लंघन से जुड़ा हुआ है.

मार्चियाफावा-मिसेली रोग अलग-अलग उम्र में होता है. लाल रक्त कोशिकाओं के बढ़ते विनाश का कारण स्वयं लाल रक्त कोशिकाओं में एक दोष है.

पीएनएच वाले रोगियों की एरिथ्रोसाइट्स, जैसा कि ऊपर कहा, अपनी क्रिया के लिए अनुकूलतम स्थितियाँ बनाते समय पूरक द्वारा आसानी से नष्ट कर दिया जाता है, या जब मट्ठा अम्लीकृत होता है, या सुक्रोज माध्यम में आयनों की कम सांद्रता बनाकर एरिथ्रोसाइट के चारों ओर पूरक की सांद्रता बढ़ाकर. पीएनएच वाले रोगियों की लाल रक्त कोशिकाओं में एग्लूटीनिन जैसे एंटीबॉडी के प्रभाव के प्रति संवेदनशीलता बढ़ जाती है, और, विशेष रूप से, हेमोलिसिन.

पीएनएच में न केवल लाल रक्त कोशिकाएं प्रभावित होती हैं, बल्कि रोगी के ल्यूकोसाइट्स और प्लेटलेट्स भी. पीएनएच वाले रोगियों के प्लेटलेट्स और ल्यूकोसाइट्स सीरम अम्लीकरण के साथ पूरक के प्रभावों के प्रति संवेदनशीलता बढ़ गई है, और कम आयनिक शक्ति वाले सुक्रोज वाले माध्यम में. वे आइसोएग्लूटीनिन की क्रिया के प्रति कई गुना अधिक संवेदनशील होते हैं, दाता प्लेटलेट्स और ल्यूकोसाइट्स की तुलना में. इस प्रकार, प्लेटलेट्स और ल्यूकोसाइट्स में एक ही झिल्ली दोष होता है, लाल रक्त कोशिकाओं के समान.

लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर इम्युनोग्लोबुलिन का पता लगाएं, ल्यूकोसाइट्स और प्लेटलेट्स, और इस तरह यह साबित करना कि पीएनएच ऑटो-आक्रामक बीमारियों के समूह से संबंधित है, सबसे संवेदनशील तरीकों से संभव नहीं है.

पीएनएच में एरिथ्रोसाइट्स की दो स्वतंत्र आबादी की उपस्थिति के पुख्ता सबूत हैं. एक स्वस्थ व्यक्ति में सबसे अधिक प्रतिरोधी कोशिकाएं, रेटिकुलोसाइट्स, पीएनएच में सबसे नाजुक होती हैं।. यह इंगित करता है, लाल रक्त कोशिकाओं की पैथोलॉजिकल आबादी परिपक्वता तक जीवित नहीं रहती है, और पुरानी परिपक्व लाल रक्त कोशिकाएं स्वस्थ या लगभग स्वस्थ आबादी से संबंधित होती हैं.

में 1970 एक मुलट्टो महिला की लाल रक्त कोशिकाओं के अध्ययन में, पीएनएच से पीड़ित, की खोज की, उनमें क्या है, स्वस्थ मुलतो महिलाओं की तरह, जी-6-पीडी के दो सामान्य इलेक्ट्रोफोरेटिक वेरिएंट; विकल्प ए, अफ़्रीकी आबादी के बीच आम है, और विकल्प बी, यूरोपीय जनसंख्या की विशेषता. हेमोलिसिस के बाद यह पता चला, कि पैथोलॉजिकल लाल रक्त कोशिकाओं में G-6-PD का केवल एक ही प्रकार होता है, और सामान्य लाल रक्त कोशिकाओं में G-6-PD के दोनों इलेक्ट्रोफोरेटिक प्रकार होते हैं. अत, हेमोलाइज्ड लाल रक्त कोशिकाएं एक कोशिका से उत्पन्न होती हैं.

यह तथ्य बड़ी निश्चितता के साथ एरिथ्रोसाइट्स की दो आबादी की उपस्थिति को इंगित करता है, न केवल कार्यात्मक रूप से भिन्न, जैसा, जैसे, माइक्रोस्फेरोसाइटोसिस में, लेकिन मूल रूप से भी: दूसरे शब्दों में, यह पैथोलॉजिकल सेल क्लोन की उपस्थिति की पुष्टि करता है, T. यह है. दैहिक उत्परिवर्तन. एरिथ्रोसाइट झिल्ली घाव की पहचान, न्यूट्रोफिल और प्लेटलेट्स इसका संकेत देते हैं, वह पैथोलॉजिकल जानकारी कोशिका द्वारा प्राप्त होने की सबसे अधिक संभावना है, तने के बगल में, T. यह है. मायलोपोइज़िस अग्रदूत कोशिका. पीएनएच के लिए ब्लास्टोमा वृद्धि विशिष्ट नहीं है. पीएनएच की पृष्ठभूमि के खिलाफ तेजी से ल्यूकेमिया के विकास के केवल पृथक मामलों का वर्णन किया गया है।. बहरहाल, मान सकते हैं, पीएनएच रक्त प्रणाली के एक सौम्य ट्यूमर का एक प्रकार है, लंबे समय तक ट्यूमर के प्रसार का कारण नहीं बनता है, ल्यूकेमिया के अन्य रूपों की विशेषता.

पीएनएच में पूरक संवेदनशीलता के विकास का तंत्र अभी भी अस्पष्ट है.

ग्लाइकोलाइसिस और पेंटोस-फॉस्फेट चक्र के एंजाइमों की गतिविधि में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं हुए हैं.

पीएनएच में, एरिथ्रोसाइट एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ की गतिविधि कम हो जाती है, सबसे अधिक संभावना एरिथ्रोसाइट झिल्ली की संरचना में व्यवधान के कारण होती है, चूंकि एंजाइम झिल्ली की सतह पर स्थित होता है और क्षतिग्रस्त होने पर आसानी से बाधित हो जाता है. ज्ञात, एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ अवरोधकों के उपयोग से लाल रक्त कोशिका के अस्तित्व पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है. हालाँकि, हेमोलिटिक एनीमिया के अन्य रूपों में भी एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ गतिविधि में कमी देखी गई है, इसलिए बढ़ी हुई पूरक संवेदनशीलता की घटना के लिए स्पष्टीकरण के रूप में काम नहीं कर सकता- telnosti.

सबूत है, असंतृप्त वसीय अम्लों की मात्रा में वृद्धि का संकेत, फॉस्फोलिपिड के घटक, लाल रक्त कोशिका झिल्ली. संभावना से इंकार नहीं किया गया है, लिपिड में परिवर्तन केवल लाल रक्त कोशिका झिल्ली की संरचना में कुछ अन्य परिवर्तनों का प्रतिबिंब है. सोडियम डोडेसिल सल्फेट की उपस्थिति में पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके पीएनएच वाले रोगियों के एरिथ्रोसाइट्स के झिल्ली प्रोटीन का अध्ययन करते समय, यह स्थापित किया गया था, कि कई अंशों में प्रोटीन सामग्री नियंत्रण से काफी भिन्न थी.

पीएनएच में थ्रोम्बोटिक जटिलताओं के रोगजनन में मुख्य भूमिका एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर टूटने और जमावट कारकों की उत्तेजना को दी जाती है।, लाल रक्त कोशिकाओं के टूटने के दौरान उनसे स्रावित होता है. पीएनएच में, मुख्य रूप से रेटिकुलोसाइट्स नष्ट हो जाते हैं, शायद, इससे हेमोलिटिक एनीमिया के अन्य रूपों के विपरीत, इस बीमारी में थ्रोम्बोटिक जटिलताओं की आवृत्ति की व्याख्या होनी चाहिए, गंभीर इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस के साथ.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया की नैदानिक ​​अभिव्यक्तियाँ

यह रोग अक्सर धीरे-धीरे शुरू होता है. मरीजों को कमजोरी की शिकायत, अस्वस्थता, चक्कर आना. श्वेतपटल की सूक्ष्मता कभी-कभी नोट की जाती है. सिरदर्द अक्सर पहली शिकायत होती है, विभिन्न स्थानों पर पेट दर्द. थ्रोम्बस गठन में वृद्धि की प्रवृत्ति रोगी को डॉक्टर से परामर्श करने के लिए मजबूर करती है. हीमोग्लोबिनुरिया शायद ही कभी बीमारी का पहला लक्षण होता है और कुछ रोगियों में पीएनएच पूरी तरह से अनुपस्थित हो सकता है. कुछ मामलों में, यह पहली बार 2-3 साल बाद या उसके बाद भी दिखाई देता है 10 रोग की शुरुआत के वर्षों बाद.

पीएनएच के विशिष्ट लक्षणों में से एक पेट दर्द का दौरा है।. इसका स्थानीयकरण बहुत भिन्न हो सकता है. संकट के बाहर, पेट दर्द, आमतौर पर, ध्यान से नहीं देखा गया. इसके साथ अक्सर उल्टी भी होती है. सबसे अधिक संभावना, पीएनएच के रोगियों में पेट दर्द मेसेन्टेरिक वाहिकाओं के घनास्त्रता से जुड़ा होता है.

परिधीय संवहनी घनास्त्रता (सबसे अधिक बार - ऊपरी और निचले छोरों की नसें, कम बार - वृक्क वाहिकाएँ) यह पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया का भी एक विशिष्ट लक्षण है. में 12 % पीएनएच के रोगियों में थ्रोम्बोफ्लेबिटिस होता है. इस बीमारी में थ्रोम्बोटिक जटिलताएँ मृत्यु का सबसे आम कारण हैं.

रोगी की वस्तुनिष्ठ जांच के दौरान, हल्के पीले रंग का पीलापन अक्सर ध्यान आकर्षित करता है।. चेहरे पर सूजन अक्सर देखी जाती है, कभी-कभी बहुत भरा हुआ. प्लीहा और यकृत का मामूली इज़ाफ़ा संभव है, हालाँकि यह पीएनजी के लिए विशिष्ट नहीं है.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया की विशेषता इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस के लक्षण हैं, जिनमें से सबसे महत्वपूर्ण है मुक्त प्लाज्मा हीमोग्लोबिन में वृद्धि. यह लक्षण पीएनएच के लगभग सभी रोगियों में समय-समय पर देखा जाता है. हालाँकि, मुक्त प्लाज्मा हीमोग्लोबिन में वृद्धि की डिग्री अलग-अलग होती है और इस पर निर्भर करती है, रोग की किस अवधि के दौरान अध्ययन आयोजित किया गया था. संकट के समय ये आंकड़ा काफी बढ़ जाता है, प्लाज्मा मेटालबुमिन की मात्रा में भी वृद्धि हुई है.

मुक्त प्लाज्मा हीमोग्लोबिन का स्तर इस समय हेमोलिसिस की डिग्री पर निर्भर करता है, हैप्टोग्लोबिन सामग्री, मूत्र में हीमोग्लोबिन के निस्पंदन की डिग्री और हीमोग्लोबिन-हैप्टोग्लोबिन कॉम्प्लेक्स के विनाश की दर. हेमोलिसिस की एक छोटी डिग्री के मामले में, प्लाज्मा में मुक्त हीमोग्लोबिन का स्तर इसे किडनी फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर करने के लिए अपर्याप्त होगा।. इसलिए, हीमोग्लोबिनुरिया रोग का अनिवार्य लक्षण नहीं है।. नेफ्रॉन नलिकाओं से गुजरते समय, जारी हीमोग्लोबिन आंशिक रूप से नष्ट हो जाता है और ट्यूबलर एपिथेलियम में जमा हो जाता है. यह मूत्र में हेमोसाइडरिन के उत्सर्जन का कारण है.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया वाले अधिकांश रोगियों में हेमोसाइडरिन मूत्र में उत्सर्जित होता है. कभी-कभी हेमोसाइडरिनुरिया तुरंत प्रकट नहीं होता है. यह महत्वपूर्ण है, लेकिन बीमारी का पीएनएच-विशिष्ट संकेत नहीं.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया के लिए प्रयोगशाला पैरामीटर

पीएनएच वाले रोगियों में हीमोग्लोबिन की मात्रा 1.86 से लेकर होती है 3,1 mmol / L (30-50 जी / एल) और छूट के दौरान सामान्य से भी कम हो जाता है.

पीएनएच के रोगियों में लाल रक्त कोशिका की गिनती हीमोग्लोबिन में कमी के स्तर के अनुसार घटता है. रंग सूचकांक लंबी अवधि तक एकता के करीब रहता है. जहाँ, यदि रोगी के मूत्र में हेमोसाइडरिन और हीमोग्लोबिन के रूप में महत्वपूर्ण मात्रा में आयरन की कमी हो जाती है, आयरन का स्तर धीरे-धीरे कम हो जाता है. लगभग आधे रोगियों में निम्न रंग सूचकांक देखा गया है. उनमें से कुछ में हीमोग्लोबिन पी का स्तर बढ़ा हुआ है, विशेष रूप से तीव्रता के दौरान.

रोगियों के एक महत्वपूर्ण अनुपात में बढ़ी हुई रेटिकुलोसाइट सामग्री, लेकिन अपेक्षाकृत कम (2- 4 %). अधिकांश मामलों में पीएनएच में ल्यूकोसाइट्स की संख्या कम हो जाती है. कई रोगियों में यह 1.5-3 ग्राम प्रति है 1 एल, लेकिन कभी-कभी घटकर 0.7-0.8 G इंच हो जाता है 1 एल. Leukopenia, आमतौर पर, न्यूट्रोफिल ग्रैन्यूलोसाइट्स की संख्या में कमी के कारण देखा गया. कभी-कभी पीएनएच में ल्यूकोसाइट गिनती सामान्य या बढ़ी हुई होती है - प्रति दिन 10-11 जी तक 1 एल.

पीएनएच में, न्यूट्रोफिल ग्रैन्यूलोसाइट्स की फागोसाइटिक गतिविधि कम हो जाती है.

थ्रोम्बोसाइटोपेनिया पीएनएच में भी अक्सर देखा जाता है, हालाँकि, प्लेटलेट्स की कार्यात्मक स्थिति सामान्य है. शायद, यह इस बीमारी में रक्तस्रावी जटिलताओं की दुर्लभता को स्पष्ट करता है, हालाँकि प्लेटलेट काउंट कभी-कभी काफी कम हो जाता है - प्रति दिन 10-20 ग्राम तक 1 एल. आमतौर पर, अधिकांश रोगियों में प्लेटलेट काउंट 50-100 ग्राम प्रति होता है 1 एल. एक सामान्य प्लेटलेट काउंट पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया के निदान को बाहर नहीं करता है.

अस्थि मज्जा परीक्षण में लक्षणों का पता लगाया जाता है, मुख्य रूप से हेमोलिटिक एनीमिया की विशेषता - मायलोकैरियोसाइट्स की सामान्य संख्या के साथ हेमटोपोइजिस के लाल रोगाणु की जलन. कई रोगियों में मेगाकार्योसाइट्स की संख्या में मामूली कमी देखी गई है.

पीएनएच में सीरम आयरन का स्तर रोग की अवस्था पर निर्भर करता है, इंट्रावस्कुलर हेमोलिसिस और हेमटोपोइएटिक गतिविधि की डिग्री. जहाँ, यदि रोगियों को लगातार या बार-बार हीमोग्लोबिनुरिया होता है, साथ ही लगातार हेमोसिडरिनुरिया, शरीर में आयरन की मात्रा, और इसलिए, और रक्त सीरम में कमी हो जाती है, कभी-कभी बहुत महत्वपूर्ण रूप से. कभी-कभी पीएनएच हाइपोप्लेसिया के लक्षणों से शुरू होता है. पीएनएच वाले रोगी के शरीर में आयरन का भंडार निर्भर करता है, एक तरफ, मूत्र में आयरन की कमी से, और दूसरी ओर, एरिथ्रोपोइज़िस की तीव्रता पर. इसलिए, आयरन की कमी को पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया का नैदानिक ​​संकेत नहीं माना जा सकता है.

पीएनएच में सीरम बिलीरुबिन स्तर ज्यादातर मामलों में, हल्का ऊंचा या सामान्य, मुख्यतः अप्रत्यक्ष के कारण. औसतन, बिलीरुबिन सामग्री 22-28 μmol/l है. यह ध्यान में रखा जाना चाहिए, कि हीमोग्लोबिन के इंट्रावास्कुलर टूटने के दौरान, एक हीमोग्लोबिन-हैप्टोग्लोबिन कॉम्प्लेक्स बनता है, जो अंततः टूटकर बिलीरुबिन भी बनाता है.

पीएनएच वाले कुछ रोगियों में, रोग की शुरुआत अप्लास्टिक एनीमिया की तस्वीर से होती है.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया का निदान

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया के साथ, एरिथ्रोसाइट झिल्ली की संरचना बाधित हो जाती है, जो पूरक के प्रभावों के प्रति इसकी बढ़ी हुई संवेदनशीलता में प्रकट होता है. हेम परीक्षण का उपयोग करके ऐसी बढ़ी हुई संवेदनशीलता का पता लगाया जाता है, या अधिक संवेदनशील सुक्रोज परीक्षण. हालाँकि, कई मामलों में, मुख्य रूप से ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के हेमोलिसिन रूप में, सुक्रोज परीक्षण गलत सकारात्मक परिणाम दे सकता है. हेमोलिसिन उनकी अपनी लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर होते हैं और, सुक्रोज माध्यम में पूरक की उपस्थिति में, उन्हें नष्ट कर देते हैं, जबकि पीएनएच की विशेषता उन पर एंटीबॉडी के प्रभाव के बिना पूरक द्वारा कोशिकाओं का विनाश है.

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के हेमोलिसिन रूप को बाहर करने के लिए, ऊपर वर्णित विधि का उपयोग करके और रोगी के सीरम और एकल दाता की लाल रक्त कोशिकाओं के साथ क्रॉस-सुक्रोज परीक्षण का उपयोग करके हेमोलिसिन का अध्ययन करने की सिफारिश की जाती है।, और इसके विपरीत नहीं, जैसा कि प्रथागत है. पीएनएच के मामले में, प्रत्यक्ष परीक्षण सकारात्मक है, और क्रॉस नकारात्मक है. हेमोलिसिन रूप में, एआईएचए को सकारात्मक के रूप में देखा जा सकता है, और नकारात्मक क्रॉस-टेस्ट. इन मामलों में, सुक्रोज परीक्षण के तीसरे संस्करण का उपयोग करने की सलाह दी जाती है - दोनों सीरम का उपयोग करके, और रोगी की लाल रक्त कोशिकाएं. इस प्रकार में हेमोलिसिस की डिग्री पीएनएच में न्यूनतम और एआईएचए के हेमोलिसिन रूप में अधिकतम है. इस परिणाम को केवल एंटीजन के लिए ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के हेमोलिसिन रूप वाले रोगी के सीरम में एंटीबॉडी की उच्च विशिष्टता द्वारा समझाया जा सकता है।, रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं में अधिक मात्रा में मौजूद होता है, दाता लाल रक्त कोशिकाओं की तुलना में. इन रोगियों में प्रत्यक्ष सकारात्मक सुक्रोज परीक्षण जुड़ा हुआ है, शायद, लाल रक्त कोशिकाओं पर निश्चित एंटीबॉडी की उपस्थिति के साथ.

हेमग्लूटिनेशन एग्रीगेट विधि द्वारा हेमोलिसिन का पता लगाना और दूसरों को सही निदान करने में मदद करता है. मरीजों के सीरम का उपयोग डोनर सीरम के रूप में नहीं किया जा सकता है।, चूँकि यदि इसमें हेमोलिसिन है, तो परिणाम गलत सकारात्मक हो सकता है. नकारात्मक परिणाम आ सकता है, यदि पीएनएच वाले रोगी का सीरम या लीवर सिरोसिस वाले रोगी का सीरम पूरक के स्रोत के रूप में उपयोग किया जाता है, रूमेटोइड पॉलीआर्थराइटिस, प्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसस और अन्य रोग, जिसमें पूरक स्तर कम हो जाता है. सुक्रोज परीक्षण और हेम परीक्षण कम स्पष्ट हो जाते हैं, यदि रोगी का रक्त निकालते समय हेपरिन का उपयोग थक्कारोधी के रूप में किया जाता है, सोडियम साइट्रेट नहीं. हेमोलिटिक संकट के बाद, हेम परीक्षण और सुक्रोज परीक्षण की तीव्रता कम हो जाती है, लेकिन साथ ही वे नकारात्मक भी नहीं होते.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया के लिए डर्विज़ और बायल्को द्वारा संशोधित बिंग विधि द्वारा रक्त प्लाज्मा में मुक्त हीमोग्लोबिन का निर्धारण

यह विधि हाइड्रोजन पेरोक्साइड की उपस्थिति में अम्लीय वातावरण में बेंज़िडाइन के साथ प्रतिक्रिया करके हरा रंग बनाने की हीमोग्लोबिन की क्षमता पर आधारित है।, पहले नीले रंग में बदलना, और फिर लाल बैंगनी रंग में. रंग की तीव्रता हीमोग्लोबिन की मात्रा के समानुपाती होती है.

अभिकर्मकों.

1. एसीटेट बफर 0,1 एम, पीएच 4,6: 27,22 जी सोडियम एसीटेट में घुल गया 1 पानी के एल (0,2 के एम समाधान); दूसरे वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में तैयार करें 1 एल 0,2 एम एसिटिक एसिड समाधान; मिश्रित 480 एमएल समाधान संख्या 1 और 520 एमएल समाधान संख्या 2.
2. हाइड्रोजन पेरोक्साइड 0,3 % समाधान (उपयोग से पहले पेरिहाइड्रोल को पतला करके तैयार किया जाता है 100 समय).
3. बेंज़िडाइन हाइड्रोक्लोराइड 0,1 % समाधान: 50 बेंज़िडाइन हाइड्रोक्लोराइड का मिलीग्राम 35-40 मिलीलीटर एसीटेट बफर में घुल जाता है, घोल को गर्म करें 80 पानी के स्नान में डिग्री सेल्सियस और ठंडा होने के बाद, एसीटेट बफर के साथ समायोजित करें 50 मिलीलीटर.

एक अंधेरी बोतल में छान लें और कमरे के तापमान पर इससे अधिक न रखें 7 दिनों. पीला अभिकर्मक अनुपयोगी है, यदि यह जल्दी से काला हो जाता है, तो अल्कोहल से बेंज़िडाइन को पुन: क्रिस्टलीकृत करना आवश्यक है.

विधि.

शोध के लिए रक्त को एक नस से सूखी सुई की सहायता से एक सिलिकॉनयुक्त ट्यूब में लिया जाता है, जिसमें कोई भी थक्का-रोधी हो. एक थक्कारोधी के साथ रक्त को अब और अधिक अपकेंद्रित्र नहीं किया जाता है 10 मिनट पर 1500 / मिनट. प्लाज्मा को अलग करने के बाद इसे फिर से अंदर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है 10 मिनट पर 8000 ल्यूकोसाइट अवसादन के लिए आरपीएम.

एक टेस्ट ट्यूब में डालो 4 मिलीलीटर एसीटेट बफर, 2 एमएल हाइड्रोजन पेरोक्साइड, 2 एमएल बेंज़िडाइन आई 0,04 परीक्षण रक्त सीरम का एमएल मिलाया जाता है और खड़े रहने के लिए छोड़ दिया जाता है 3 एम, फिर ऑप्टिकल पथ की लंबाई के साथ एक क्यूवेट में डाला गया 1 सेमी और हरे फिल्टर के साथ क्षतिपूर्ति समाधान के विरुद्ध फोटोमीटर किया गया. नीले रंग की तीव्रता 4-5 मिनट में बढ़ जाती है, इसलिए, माप को लगातार 3-5 बार दोहराया जाता है और अधिकतम रीडिंग दर्ज की जाती है. 5-6 मिनट के बाद, सीरम का रंग बकाइन-भूरे रंग का हो जाता है।, और ऑप्टिकल घनत्व कम होने लगता है. दो पहचाने गए अधिकतम ऑप्टिकल घनत्व परिणामों में से, औसत लिया जाता है.

मुआवज़ा समाधान, से मिलकर 6 मिलीलीटर एसीटेट बफर, 8 एमएल हाइड्रोजन पेरोक्साइड, 3 एमएल बेंज़िडाइन समाधान I 0,06 isotonic सोडियम क्लोराइड समाधान के मिलीलीटर, नमूने के साथ-साथ तैयार किया गया.

अंशांकन वक्र हीमोग्लोबिन समाधान से प्राप्त होता है. रक्त में, हीमोग्लोबिन घोल तैयार करने के लिए लिया गया, इसकी सामग्री को मापें (मेडिकल कलरमीटर या मेडिकल रेफ्रेक्टोमीटर पर). सांद्रण के साथ हीमोग्लोबिन का घोल तैयार करें 1 जी / एल, इससे कम सांद्रता वाले घोल तैयार किये जाते हैं: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 और 0,2 जी / एल. प्रत्येक प्राप्त समाधान से जोड़ें 0,04 मिश्रण के लिए एमएल 4 मिलीलीटर एसीटेट बफर, 2 एमएल बेंज़िडाइन समाधान I 2 एमएल हाइड्रोजन पेरोक्साइड.

हेमोलिसेट स्टॉक समाधान (1 जी / एल) अंशांकन के लिए वक्र को ठंडा रखा जाना चाहिए, और कम सांद्रता के कार्यशील समाधान अध्ययन से तुरंत पहले तैयार किए जाने चाहिए.

आम तौर पर, में 1 एल रक्त प्लाज्मा में होता है 0,0005 mmol / L (0,01-0.04 ग्राम) हीमोग्लोबिन.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया में मूत्र हेमोसाइडरिन का निर्धारण

हीमोग्लोबिन के टूटने के दौरान, इसका लोहा वृक्क नलिकाओं के उपकला द्वारा सोख लिया जाता है और हीमोसाइडरिन का हिस्सा होता है. इन मामलों में, वृक्क नलिकाओं की विलुप्त उपकला कोशिकाओं में हेमोसाइडरिन के दाने होते हैं.

सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद मूत्र तलछट की सावधानीपूर्वक जांच करने पर, हेमोसाइडरिन कण विशेष धुंधलापन के बिना भी दिखाई देते हैं. हालाँकि, दाग लगने पर वे अधिक स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं पर्ल की विधि.

विधि.

मूत्र के सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद ऊपरी परत को चूस लिया जाता है, ताजा तैयार घोल अवक्षेप में मिलाया जाता है 1 % पीला रक्त नमक और 1 % हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान (बराबर मात्रा में मिलाएं 2 % हाइड्रोक्लोरिक एसिड और पीले रक्त नमक का घोल). के बाद 10 हिलाने के कुछ मिनट बाद, मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और अवक्षेप की जांच की जाती है. हेमोसाइडरिन के दाने नीले हो जाते हैं.

स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि द्वारा प्लाज्मा मेथेमलब्यूमिन का निर्धारण

अभिकर्मकों.

1. फॉस्फेट आइसोस्मोटिक बफर (पीएच 7,4): मिश्रित 18 मिलीलीटर 0.15 एम सोडियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट समाधान (24,4 जी НаН2Р04 पर 1 पानी के एल) और 82 मिलीलीटर 0,15 एम सोडियम हाइड्रोजन फॉस्फेट समाधान (21,3 г NaH₂पीओ₄ पर 1 पानी के एल).
2. सोडियम हाइड्रोसल्फाइट.
3. कास्टिक सोडा घोल 1 एम.
4. मानव सीरम एल्बुमिन समाधान (40 जी / एल).
5. जेमिन समाधान (5 मिलीग्राम / 100ml); सोडियम हाइड्रॉक्साइड की थोड़ी मात्रा में हेमिन को घोलकर तुरंत तैयार किया जाता है, और फिर: सीरम एल्ब्यूमिन के घोल के साथ इसे आवश्यक मात्रा में लाएं.

विधि.

कश्मीर 2 सीरम या रक्त प्लाज्मा का एमएल जोड़ा जाता है 1 एमएल बफर्ड आइसोस्मोटिक समाधान, पीएच 7,4. मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है 30 1200-1500 आरपीएम पर मिनट. ऑप्टिकल घनत्व निर्धारित किया जाता है 569 एनएम. पतला प्लाज्मा फिर एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है और लगभग। 5 मिलीग्राम शुष्क सोडियम हाइड्रोजन सल्फेट. के माध्यम से 5 न्यूनतम समान तरंग दैर्ध्य पर ऑप्टिकल घनत्व को फिर से मापें. दो ऑप्टिकल घनत्वों के बीच का अंतर मेथेमाल्ब्यूमिन के ऑप्टिकल घनत्व से मेल खाता है. मेथेमाल्ब्यूमिन सांद्रता एक अंशांकन ग्राफ का उपयोग करके निर्धारित की जाती है.

अंशांकन ग्राफ निम्नानुसार प्राप्त किया गया है. एल्ब्यूमिन के साथ हेमिन का घोल कुछ मात्रा में टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है 0,01 को 0,1 जी / एल (से 0,2 को 2 मिलीलीटर). उन परखनलियों में, जहां घोल की मात्रा कम है 2 मिलीलीटर, तक जोड़ा गया 2 एमएल एल्ब्यूमिन घोल. फिर जोड़ें 1 एमएल फॉस्फेट आइसोस्मोटिक बफर. मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है 1500 / मिनट, और फिर ऑप्टिकल घनत्व को मापें. माप के बीच का अंतर हेमिन की मात्रा के अनुसार प्लॉट किया जाता है.

आम तौर पर, हेमलब्यूमिन रक्त प्लाज्मा में अनुपस्थित होता है. यह इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस के मामलों में प्रकट होता है, जैसे, पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया या ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के हेमोलिसिन रूप के साथ, और हैप्टोग्लोबिन की अनुपस्थिति में भी, जब हीम एल्बुमिन से बंध जाता है.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया के लिए हेम का परीक्षण

खेम का परीक्षण पीएनएच वाले रोगियों के एरिथ्रोसाइट्स के प्रतिरोध में कमी और ताजा सीरम पूरक की उपस्थिति में पीएच में कमी पर आधारित है।.

अभिकर्मकों.

1. हाइड्रोक्लोरिक एसिड का समाधान 0,2 n.
2. अमोनिया घोल 0,04 %.

विधि.

5- 6 रक्त की मिलीलीटर. सोडियम ऑक्सालेट या साइट्रेट का उपयोग थक्कारोधी के रूप में किया जाता है।. वहीं, इसी ग्रुप के डोनर से 15-20 मिली खून लिया जाता है. रोगी और दाता के रक्त में लाल रक्त कोशिकाओं को प्लाज्मा से अलग किया जाता है.

दाता का रक्त सीरम डाला जाता है 0,5 छह ट्यूबों में एमएल, उनमें से दो को रखा गया है 20 तापमान पर पानी के स्नान में न्यूनतम 56 सीरम पूरक को निष्क्रिय करने के लिए डिग्री सेल्सियस, शेष चार परखनलियों को कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है. रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल से दो बार धोया जाता है, फिर उसी अनुपात में उसी घोल में निलंबित कर दिया जाता है 1:1.

अध्ययन डिज़ाइन तालिका में प्रस्तुत किया गया है.

प्रत्येक टेस्ट ट्यूब की सामग्री मिश्रित होती है, पर रखा 1 h तापमान पर थर्मोस्टेट में 37 सी, और फिर सेंट्रीफ्यूज किया गया.

एक खाली नमूने के लिए 0,05 रोगी और दाता एरिथ्रोसाइट्स के मी को अलग से जोड़ा जाता है 0,55 isotonic सोडियम क्लोराइड समाधान के मिलीलीटर.

सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, हेमोलिसिस की डिग्री का आकलन आंख से किया जा सकता है।. प्रत्येक ट्यूब में हेमोलिसिस की डिग्री निर्धारित करना 4,7 मिलीलीटर 0,04 % अमोनिया घोल मिलाया जाता है 0,3 एमएल सतह परत, और एक खाली नमूने के साथ एक परखनली में - 0,3 प्रारंभिक रक्त सीरम का एमएल.

पहचान करने के लिए 100 % हेमोलिसिस को 4,7 अमोनिया घोल का एमएल मिलाया जाता है 0,3 एमएल लाल रक्त कोशिका निलंबन (0,05 रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं का एमएल 0,55 isotonic सोडियम क्लोराइड समाधान के मिलीलीटर).

घोल के ऑप्टिकल घनत्व को मेडिकल कलरमीटर पर मापा जाता है और रीडिंग की तुलना लाल रक्त कोशिकाओं के बिना अमोनिया घोल के ऑप्टिकल घनत्व से की जाती है:

% हेमोलिसिस=((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

जहां ई₁ - परीक्षण नमूने का ऑप्टिकल घनत्व; IS₂- रिक्त नमूने का ऑप्टिकल घनत्व; IS₃- ऑप्टिकल घनत्व 100 % hemolysate.

आम तौर पर, इससे अधिक नहीं 5 % एरिथ्रोसाइट.

यदि हेम परीक्षण सकारात्मक माना जाता है, यदि हेमोलिसिस अधिक हो 6 % एरिथ्रोसाइट.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया और ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के हेमोलिसिन रूप के साथ, हेमोलिसिस कभी-कभी 50-80 तक पहुंच जाता है। % एरिथ्रोसाइट. इन रोगों की विशेषता केवल गैर-निष्क्रिय रक्त सीरम की उपस्थिति में हेमोलिसिस है (टेस्ट ट्यूब नं. 2). यदि सीरम निष्क्रियता हेमोलिसिस को नहीं रोकती है (टेस्ट ट्यूब नं. 3), हेमोलिटिक एनीमिया के किसी अन्य रूप की उपस्थिति या अध्ययन में त्रुटि का अनुमान लगाना संभव है.

पर्यावरणीय पीएच पर पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया वाले रोगियों के एरिथ्रोसाइट्स के विनाश के लिए 6,5 पूरक की उपस्थिति आवश्यक है, ताजा रक्त सीरम में निहित.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया के लिए सुक्रोज परीक्षण

सुक्रोज परीक्षण पर आधारित है, पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया और ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के हेमोलिसिन रूप वाले रोगियों की लाल रक्त कोशिकाएं पूरक की उपस्थिति में कम आयनिक शक्ति वाले समाधान में नष्ट हो जाती हैं.

अभिकर्मकों.

1. सुक्रोज समाधान: 9,42 सुक्रोज घुला हुआ है 0,005 एम फॉस्फेट बफर; पीएच 6,2 (91 मिलीलीटर 0,005 М नाह₂पीओ₄ और 9 मिलीलीटर 0,005 म ना₂एचपीओ₄).
2. हीमोग्लोबिन एकाग्रता निर्धारित करने के लिए अभिकर्मक: 200 मिलीग्राम लाल रक्त नमक घुल जाता है 1 एल आसुत जल, वे इसे वहां जोड़ते हैं 0,5 एमएल एसीटोन साइनोहाइड्रिन.

विधि.

रोगी का रक्त शिरा से दो परखनलियों में लिया जाता है - सूखा (8—10 मि.ली) और एक थक्कारोधी के साथ (2- 3 मिलीलीटर). एक anticoagulant इस्तेमाल किया सोडियम साइट्रेट के रूप में. थक्कारोधी के साथ ट्यूब से लाल रक्त कोशिकाओं पर isotonic सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ दो बार धोया गया. सतह पर तैरनेवाला की धुलाई और आकांक्षा के बाद 0,4 लाल रक्त कोशिकाओं की मिलीलीटर जुड़ जाते हैं 0,25 isotonic सोडियम क्लोराइड समाधान के मिलीलीटर.

इसके साथ ही, खून दो ट्यूबों में एक ही रक्त समूह के एक दाता से लिया जाता है - एक anticoagulant के साथ (2-3 मिली), यह उसी के साथ व्यवहार किया जाता है, रोगी के रक्त, और सूखी (8- 10 मिलीलीटर) सीरम के लिए. सीरम दाता की जुदाई के बाद 0,5 मिलीलीटर यह एक तापमान पर एक पानी के स्नान में रखा गया है 56 सी 30 न्यूनतम निष्क्रियता के पूरक DLYA. प्रयोग के दिन दाता रक्त सीरम एकत्र किया जाना चाहिए और प्रशीतित रखा जाना चाहिए।. अध्ययन डिज़ाइन तालिका में दिखाया गया है.

टेस्ट ट्यूब को थर्मोस्टेट में रखा जाता है 30 मिनट पर 37 सी, और फिर इसके लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया 10 गति से मिनट 2000 आरपीएम और हेमोलिसिस की डिग्री का आकलन करें.

ऐसा करने के लिए, इसे टेस्ट ट्यूब में डालें 3,4 हीमोग्लोबिन सांद्रता निर्धारित करने के लिए अभिकर्मक का एमएल और 0,6 ऊपर एमएल- प्रत्येक परखनली से तलछट की परत. के माध्यम से 10 न्यूनतम परीक्षण ट्यूबों में समाधान के ऑप्टिकल घनत्व को मापें 540 मेडिकल रेफ्रेक्टोमीटर पर एनएम (स्पेक्ट्रोफोटोमीटर) या मेडिकल कलरमीटर (फोटो कलरमीटर FÉK-M) हरे फिल्टर के साथ, हीमोग्लोबिन निर्धारित करने के लिए समाधान के ऑप्टिकल घनत्व के साथ प्राप्त आंकड़ों की तुलना करना. प्रत्येक प्रयोग से दो रीडिंग का औसत लिया जाता है. गणना सूत्र का उपयोग करके की जाती है:

% इन विट्रो में हेमोलिसिस =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

जहां ई₁ - टेस्ट ट्यूब संख्या में समाधान का ऑप्टिकल घनत्व। 1; IS₅ - टेस्ट ट्यूब संख्या में समाधान का ऑप्टिकल घनत्व। 5, सीरम के रंग को खत्म करने के लिए आवश्यक है; IS₈ - टेस्ट ट्यूब संख्या में समाधान का ऑप्टिकल घनत्व। 8, जहां 100% हेमोलिसिस हुआ.

क्रॉस सुक्रोज परीक्षण के लिए (टेस्ट ट्यूब नं. 2) 100%-वें हेमोलिसिस का अध्ययन टेस्ट ट्यूब नंबर में किया जाता है। 7.

परिणामों का मूल्यांकन.

टेस्ट ट्यूब में सामान्य नं. 1, जिसमें अध्ययन किए जा रहे रोगी की लाल रक्त कोशिकाएं शामिल हैं, हेमोलिसिस 2-3 से अधिक नहीं होता है %.

पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया और ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के हेमोलिसिन रूप के लिए (AIGA) इस टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिस अधिक हो जाता है 6 % नियंत्रण ट्यूबों में - नहीं। 4, जिसमें रोगी की लाल रक्त कोशिकाएं और निष्क्रिय दाता रक्त सीरम शामिल है, टेस्ट ट्यूब नं. 5, जिसमें दाता की लाल रक्त कोशिकाएं और रक्त सीरम शामिल है, और संख्या 6, सीरम के बजाय एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान युक्त - हेमोलिसिस 1-2 से अधिक नहीं होना चाहिए %.

क्रॉस सुक्रोज परीक्षण (टेस्ट ट्यूब नं. 2) एआईएचए के हेमोलिसिन रूप के साथ आमतौर पर सकारात्मक (रक्त सीरम में हेमोलिसिन की उपस्थिति में), लेकिन यह नकारात्मक भी हो सकता है. टेस्ट ट्यूब नं. 3 (रोगी के एरिथ्रोसाइट्स और रक्त सीरम) हेमोलिसिस को पीएनएच के रूप में देखा जाता है, और एआईएचए के हेमोलिसिन रूप के साथ. पैरॉक्सिस्मल नॉक्टर्नल हीमोग्लोबिनुरिया में, नियमित सुक्रोज परीक्षण में अधिकतम हेमोलिसिस का पता लगाया जाता है (टेस्ट ट्यूब नं. 1), कम स्पष्ट - रोगी की अपनी लाल रक्त कोशिकाओं वाले नमूने में (टेस्ट ट्यूब नं. 3); क्रॉस-सुक्रोज परीक्षण में कोई हेमोलिसिस नहीं है (टेस्ट ट्यूब नं. 2).

एआईएचए के हेमोलिसिन रूप के साथ सबसे स्पष्ट हेमोलिसिस रोगी के स्वयं के रक्त सीरम और लाल रक्त कोशिकाओं के नमूने में पाया जाता है (टेस्ट ट्यूब नं. 3), कुछ हद तक कम स्पष्ट - टेस्ट ट्यूब संख्या में। 1. टेस्ट ट्यूब नं. 2 हेमोलिसिस आम है, लेकिन इसकी अनुपस्थिति एआईएचए के हेमोलिसिन रूप को बाहर नहीं करती है.