La définition des caractéristiques quantitatives et qualitatives de sperme

Détermination de la motilité des spermatozoïdes

La détermination de la motilité des spermatozoïdes est le paramètre le plus important, caractérisation de la qualité de l'éjaculat. Sperme, capable de fécondation, ont une mobilité - effectuer un mouvement de translation linéaire à une vitesse 50 µm/s. Peut être trouvé dans l'éjaculat spermatozoïdes dont la motilité est altérée - discinospermie sous forme d'oscillation, arène et autres types de mouvements, qui sont normalement absents.

La motilité des spermatozoïdes est évaluée dans une préparation d'éjaculat natif avec un champ de vision limité (en utilisant la fenêtre Fonio), en utilisant un oculaire 7X et un objectif 40X, avec le condenseur à moitié abaissé. Compte 100 cellule, notez le nombre de mobiles parmi eux, spermatozoïdes sédentaires et immobiles. Normalement, il y a entre 80 et 90 spermatozoïdes activement mobiles. %, sédentaire - 10-12, fixe — 6— 10 %. Seuls les spermatozoïdes activement mobiles et sédentaires sont pris en compte., qui avance.

Vous pouvez également utiliser une échelle d'évaluation plus détaillée en cinq points.:

• « 4 » – excellente mobilité (tous les spermatozoïdes ont une motilité de translation rectiligne à une vitesse significative);
• « 3 » – bonne mobilité (légèrement réduit);
• "2" - mobilité médiocre (beaucoup de spermatozoïdes immobiles, mais avec des queues vibrantes);
• « 1 » - mauvaise mobilité (manque de mouvement vers l'avant, motilité des queues des spermatozoïdes uniquement);
• « 0 » – aucun mouvement des spermatozoïdes.

Éjaculer la fertilité dépend de la durée de la motilité des spermatozoïdes, il est donc nécessaire de déterminer la motilité des spermatozoïdes au fil du temps (kinésigramme dynamique).

Une goutte d'éjaculat est appliquée sur une lamelle, retournez-le et placez-le sur une lame de verre avec un puits pour une goutte suspendue de cette façon, pour que la goutte soit au centre de la dépression. Les bords du verre de protection sont enduits de paraffine liquide et le pourcentage de cellules activement mobiles est déterminé au microscope., spermatozoïdes sédentaires et immobiles à travers 1, 3, 6, 12 et 24 heure après l'éjaculation. L'étude est réalisée à température ambiante. Normalement, le nombre de spermatozoïdes activement mobiles diminue toutes les 2 à 3 heures de 20 % ,

• Remarque. L'examen microscopique de l'éjaculat doit être effectué en laboratoire par une seule personne., avec une expérience suffisante dans ce domaine du diagnostic de laboratoire, puisque les résultats de la détermination de la motilité des spermatozoïdes entre différents chercheurs varient jusqu'à ± 40 % et dépendent en grande partie de l'expérience avec l'éjaculat.

Test de « renaissance » du sperme

Test de « renaissance » du sperme basé sur la restauration d’une mobilité normale des immobiles, mais des spermatozoïdes vivants utilisant des solutions stimulantes:

1) La solution de Becker (glucose- 3 g, Sur₂HPO₄ - 0,6 g, NaCl - 0,2 g, KH₂APRÈS₄ -0,01 ans, eau distillée jusqu'à ce que 100 ml; pH- 7,8);

2) 0,1 % solution de caféine (mais pas en ampoules!) - 10 % sur le volume de l'éjaculation;

3) 0,1 M de solution d'arginine.

Méthode. Une pipette doseuse d'une capacité 1 ml sucé 0,1 ml d'éjaculat (bien mélangé) et avec la même pipette ils collectent 0,9 ml de solution stimulante. Le contenu de la pipette est soufflé sur le verre de la montre., bien mélanger en aspirant et en soufflant à plusieurs reprises le liquide sur le verre de la montre, puis préparer les préparations de gouttes suspendues. En 5— 10 min fixe, mais les spermatozoïdes vivants commencent à bouger.

Pourcentage de spermatozoïdes mobiles déterminé immédiatement après le rétablissement de la mobilité et après 3, 6, 12 et 24 non. Pour obtenir des résultats plus fiables, effectuez un test en parallèle avec deux solutions stimulantes. Ce n’est que s’il est impossible de « faire revivre » des spermatozoïdes immobiles que l’on peut parler de nécrospermie..

Identification des spermatozoïdes vivants parmi les spermatozoïdes immobiles

Le principe de la méthode repose sur, que les enzymes des spermatozoïdes vivants blanchissent l'éosine. Les réactifs utilisés sont 5 % solution aqueuse d'éosine potassium et 10 % solution aqueuse de nigrosine.

Méthode. Une petite goutte d'éjaculat est placée sur une lame de verre, placez une goutte deux fois plus grosse à côté 5 % solution d'éosine potassium et une goutte 10 % solution de nigrosine, qui est également deux fois la taille d'une goutte d'éosine potassium. Tout d’abord, l’éjaculat est mélangé à de l’éosine potassique., attends quelques secondes, puis mélangé avec une goutte de nigrosine, attendez encore quelques secondes et faites des traits fins avec une lame en verre dépoli.

Utilisation d'un système de microscope à immersion, les frottis ne comptent pas moins 200 sperme, mettre en valeur le vivant (Incolore) et les morts (coloré en rouge avec de l'éosine). Le nombre de spermatozoïdes vivants et morts est exprimé en pourcentage. En l'absence de nigrosine, une goutte d'éjaculat est mélangée à une goutte de 5 % solution d'éosine potassium et préparer de minces frottis pour la microscopie. La nigrosine ne colore que le fond de la préparation, sur quels spermatozoïdes ressortent de manière plus contrastée. Normalement, il y a entre 80 et 90 spermatozoïdes vivants. % de leur nombre total.

Nombre de spermatozoïdes 1 ml et dans tout le volume de l'éjaculat

Nombre de spermatozoïdes dans 1 ml et dans tout l'éjaculat est compté dans la chambre de comptage de Goryaev.

Le nombre de spermatozoïdes dans tout l'éjaculat est déterminé en multipliant le nombre de spermatozoïdes dans 1 ml par quantité d'éjaculat (en millilitres).

• Remarque. La chambre de comptage peut également déterminer le nombre de spermatozoïdes mobiles, pourquoi faut-il diluer l'éjaculat avec une solution chaude de chlorure de sodium isotonique et compter le nombre de spermatozoïdes immobiles ?, puis soustrayez-les du total.

Normalement, dans le 1 ml d'éjaculat contient 60 à 120 millions. sperme, avec hyperspermie - plus 120 million, dans l'oligospermie - de 30 à 60 million, quoi, généralement, rend la fécondation impossible. Cependant, des cas ont été décrits, quand la fécondation a lieu et quand elle est conservée 1 ml d'éjaculat 5 à 30 million. sperme.

De toute façon lors de la détection de l'oligospermie 2 à 3 comptages de contrôle du nombre de spermatozoïdes sont nécessaires à des intervalles de temps de 3 à 4 semaines pour établir leur nombre maximum.. Chez un même homme, le nombre de spermatozoïdes est soumis à d'importantes fluctuations physiologiques.

Normalement, l'éjaculat entier contient plus de 150 million. sperme.

Comptage des spermatozoïdes

Le spermatogramme est le pourcentage de différentes formes morphologiques de spermatozoïdes et de cellules de spermatogenèse.

Dans un frottis, coloré à l'hématoxylinéosine ou à Pappenheim, compté au moins 200 sperme, tandis que le nombre de formes normales et pathologiques, ainsi que les cellules de la spermatogenèse exprimées en pourcentage. Le comptage est effectué à l'aide d'un système de microscope à immersion et d'une machine à compter les leucogrammes avec des noms préalablement modifiés par clé.

Dans un éjaculat normal, les formes normales des spermatozoïdes sont de 80 à 85 %, parfois 100 %, ceux-ci incluent des variantes physiologiques, qui sont caractérisés par ou inhabituellement rétrécis, ou réduit, ou tête agrandie.

Jeune, ou immature, certaines formes de spermatozoïdes ont un reste de cytoplasme autour de la tête et du cou ("collier"), observés lors de rapports sexuels fréquents et ne sont pas capables de fécondation.

Anciennes formes de sperme (hyperchromie, achromie, vacuolisation de la tête) apparaissent dans l'éjaculat après une abstinence sexuelle prolongée et ne conviennent pas à la fécondation.

Les formes pathologiques incluent les spermatozoïdes présentant des déformations de la tête: mégalospermatozoïdes (gigantospermatozoïde), macro-, microsperme, conique, spermatozoïdes à deux têtes avec un cou et une queue, sans cou avec une ou plusieurs queues, sans queue, avec une queue sans tête, etc..

Chez les hommes en bonne santé, les formes pathologiques des spermatozoïdes ne se trouvent généralement pas dans l'éjaculat normal., mais parfois leur nombre avec la capacité fécondante normale de l'éjaculat peut atteindre 20 %, dont environ 15 % est une pathologie de la tête, 3-5 % — corps, 2-5 % - queue.

Avec spermatogenèse pathologique, forme sécrétoire d'infertilité, des spermatozoïdes présentant une pathologie de la tête et du cou sont détectés. Pathologie de la queue généralement d'origine excrétrice, se produit lorsque les spermatozoïdes traversent le canal déférent.

Dans les préparations colorées, des cellules germinales situées séparément à différents stades de différenciation et de maturation sont également clairement visibles., ce qui est important pour différencier l'aspermie et l'azoospermie.

Spermatogonie avoir un arrondi, forme parfois ovale, leur diamètre est de 5 à 12 microns. Le noyau occupe environ un tiers de la cellule, sombre- ou de couleur claire, avec 1—2—3 noyaux- lamas, souvent situé près du caryolemme (enveloppe nucléaire), structure de chromatine à grain fin. Le cytoplasme est étroite, basophiles, Homogène. Les spermatogonies se divisent plusieurs fois par mitose. Il existe des cellules avec des étapes de mitose bien définies.

Une partie des cellules, formé à la suite de la mitose, se différencier en spermatocytes I, et puis II commande. Spermatocytes de premier ordre - cellules rondes ou polygonales d'un diamètre de 17 à 19 microns avec un gros noyau rond et un cytoplasme léger à grain fin. Une zone périnucléaire claire est visible dans les préparations colorées.

Spermatocytes du deuxième ordre se forment à la suite de la méiose. Ils sont plus petits, que les spermatocytes de premier ordre (diamètre 15 m), mais morphologiquement presque identique. Plus fréquent dans l'éjaculat, que les spermatocytes de premier ordre, mais beaucoup moins souvent, que les spermatides.

Spermatydы - petit, cellules rondes ou allongées d'un diamètre de 12 à 15 microns avec des noyaux hyperchromatiques ronds, situé au centre ou de manière excentrique. Présence possible de spermatides multinucléées. Cytoplasme pâle, basaphilique, souvent vacuolé.

Les spermatides se transforment en spermatozoïdes.

Les cellules de spermatogenèse dans un spermatogramme normal ne sont pas plus grandes que 2 %. Un grand nombre d'entre eux sont observés en cas d'infertilité sécrétoire.

Pour la microscopie à contraste de phase l'éjaculat est dilué avec une solution isotonique de chlorure de sodium avec l'ajout d'une petite quantité 1 % une solution aqueuse de rivanol ou d'acide carbolique pour réduire la motilité des spermatozoïdes.

Avec microscopie à fluorescence une goutte d'éjaculat et une goutte d'acridine orange diluée sont appliquées sur une lame de verre 1:20000. Les gouttes sont mélangées et recouvertes d'un verre de protection.. Pour la microscopie, un oculaire 7X et un objectif 40X sont utilisés.. Les spermatozoïdes vivants deviennent verts, mort - en orange. Les formes normales et pathologiques des spermatozoïdes sont faciles à distinguer en raison de leurs caractéristiques morphologiques..

Les règles de travail avec les microscopes à contraste de phase et à fluorescence sont décrites dans les instructions de ces appareils. Lors de l'utilisation de la microscopie à contraste de phase et à fluorescence, le spermatogramme est calculé selon les règles générales.

Sur la base de l'examen microscopique de l'éjaculat, diverses conditions pathologiques peuvent être identifiées.

• Aspermie - absence de spermatozoïdes et de cellules de spermatogenèse dans l'éjaculat.
• Azoospermie - absence de spermatozoïdes en présence de cellules de spermatogenèse.
• Asthénospermie - une diminution du nombre de cellules mobiles et une augmentation du nombre de formes pathologiques avec une numération totale des spermatozoïdes normale.
• Oligoasthénospermie - diminution du nombre de spermatozoïdes et de leurs formes mobiles et augmentation du nombre de formes pathologiques.
• Nécrospermie – immobilité de tous les spermatozoïdes dans la préparation même après « relance ».
• Akinospermie - État, dans lequel, contrairement à la nécrospermie, les spermatozoïdes auparavant immobiles commencent à se déplacer activement après une « renaissance ».