Nasledstvennaya gemoliticheskaya anémie, en raison de l'activité de kinase de pyruvate déficience de globules rouges

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anémie, Érythrocytes la pyruvate kinase liée carence - une forme relativement rare d'anémie hémolytique, qui est héritée de manière autosomique récessive, Il donne manifestations cliniques chez les homozygotes, produit présentant des signes d'hémolyse intracellulaire, macrocytoses des érythrocytes, faible teneur en potassium. Il y a plus que 200 cas de porteurs homozygotes de déficit de l'activité piruvatkinaznoy.

Pathogénèse

Pyruvate kinase est l'une des enzymes, glycolyse conclure. Ce lien glycolyse et ATP formés nikotinamiddinukleotid. La majorité des patients ayant un déficit de l'activité de la pyruvate kinase est réduite dans le contenu des cellules rouges du sang de ces deux métabolites, Dans certains cas, la teneur en ATP est normal, mais perturbé la stabilité de l'ATP pendant l'incubation. Les niveaux normaux de l'ATP trouvés au réticulocytose significative. Cela est dû à la présence de réticulocytes et de la possibilité de l'ATP mitochondrial non seulement par la glycolyse, mais aussi en raison de la phosphorylation oxydative.

La conséquence de déficit en pyruvate kinase Il est également l'accumulation des produits de la glycolyse, formé à des stades antérieurs - fosfofenolpiruvata, 3-phosphoglycérate, et en particulier le 2,3-diphosphoglycérate. Piruvatanlaktata contenu diminue dans les cellules rouges du sang.

Le manque d'ATP dans les érythrocytes pyruvate kinase carence Elle conduit à une perturbation de la fonction de pompe ATP-aznogo globules rouges et à la perte d'ions de potassium, dans lequel la concentration des ions sodium dans les érythrocytes de plus en plus non-. Cela provoque une diminution de la teneur en ions monovalents dans les érythrocytes, la déshydratation de la cellule et son retrait. Ce phénomène est appelé dessikotsitoz. La diminution du nombre de globules rouges de l'eau complique le processus d'oxygénation et de l'oxygène par l'hémoglobine de presse. À cet égard, certain rôle compensatoire joué par une accumulation importante dans les érythrocytes de l'acide 2,3-difosfoglitserinovoy.

L'affinité de l'hémoglobine pour l'oxygène est réduite par son interaction avec le 2,3-diphosphoglycérate. Par Conséquent, à des concentrations supérieures à 2,3-diphosphoglycérate renvoie l'oxygène aux tissus est facilitée.

Les manifestations cliniques de l'activité de déficit en pyruvate kinase

Les manifestations cliniques de l'activité de kinase de pyruvate carence dépendent du degré d'hémolyse. Dans certains cas, l'augmentation de l'hémolyse se manifeste à la naissance et est accompagnée par l'apparition de la grave crise hémolytique, provoquant le besoin de transfusions de sang pour maintenir l'hémoglobine dans les niveaux de sous-normale. Dans d'autres cas, la maladie peut se produire presque asymptomatique avec les premiers signes de l'augmentation de l'hémolyse (sclérotique subikterichnost et la peau) 17-30 ans.

Généralement; par rapport à microspherocytosis, déficit en pyruvate kinase a une plus sévère.

Presque tous les patients atteints de splénomégalie. La légère augmentation de ses divulgués certaines anomalies des porteurs hétérozygotes, même si elles ont l'anémie, généralement, manquant. Un certain nombre de patients possible splénomégalie. Une augmentation significative dans le foie rarement. Chez les patients isolés avec des ulcères de jambe identifiés.

indicateurs de laboratoire de l'activité de déficit en pyruvate kinase

La majorité des patients avec déficience de l'activité de la pyruvate kinase a observé une anémie modérée (4,34- 6,21 mmol / l, ou de 70 à 100 g / l), Cependant, au cours de la crise hémoglobine peut être réduite à 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Eritrotsitov- contenu 2,5-3,0 T 1 l. Crise hémolytique peut être causée par une infection. Il ya des cas de gain de hémolyse pendant la menstruation.

Les globules rouges de patients atteints de déficit en pyruvate kinase caractérisé par une macrocytose avec normohromiey, légère anisocytose et poïkilocytose. Il y avait un juste polychromatophilie. Parfois trouvé mishenevidnye globules rouges et des globules rouges avec des bords dentelés ou sous la forme de mûrier, souvent identifié érythrocytes punktatsiya basophiles, Corpuscules Jolly. Certains patients dans le sang périphérique ont révélé un grand nombre de erythrokaryocytes, lors de la crise, elle peut être augmentée jusqu'à 60 à 70 %. ESR, sang nombre de globules blancs, leukogram, numération plaquettaire dans la plage normale. Comme pour les autres formes d'anémie hémolytique, dans la moelle osseuse a révélé une forte irritation germe rouge hématopoïèse.

Le niveau de la bilirubine, généralement, augmenté en raison de indirecte.

L'hémoglobine plasmatique libre normal, mais il peut être réduit les niveaux d'haptoglobine. Hémosidérine dans l'urine est absent. Contenu de l'hémoglobine fœtale et de l'hémoglobine A₂ dans la plage normale.

Résistance osmotique des erythrocytes carence pyruvate kinase dans la plupart des cas normaux, parfois réduit de jours après incubation. Autogemoliz, généralement, mis à jour à des degrés divers. Il ya des cas de déficit en pyruvate kinase avec autogemolizom normale. Dans le premier cas signalé de déficit en pyruvate kinase a été enregistré type II autogemoliza, corrige l'addition d'ATP, et la correction ou la non correction d'un peu plus de la glucose. Par la suite, de nombreux cas ont été décrits avec le type de déficience enzymatique je autogemoliza ou pas. Par conséquent, il est recommandé de ne pas appliquer la méthode autogemoliza pour le diagnostic différentiel des anémies hémolytiques. La durée de vie des globules rouges avec déficience de l'activité pyruvate kinase est toujours raccourcie.

héritage activité pyruvate kinase de type autosomique récessive. Hétérozygotes pratiquement sains, Selon divers chercheurs, la gravité du déficit ont varié de 50 à 70 % normes.

L'activité de diagnostic de déficit en pyruvate kinase

Le diagnostic de la carence en pyruvate kinase de globules rouges peut être prévu pour délivrer, dans le cas de l'anémie hémolytique, qui coule au fil des ans avec l'augmentation de la rate, le manque de sang périphérique frottis signes microspherocytosis, elliptotsitoza et stomatotsitoza.

Tests qualitatifs de détermination de l'activité de la pyruvate kinase. A cet effet, le procédé est largement utilisé colorant fluorescent, basé sur, que, dans le cours de la réaction, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oxydé et la fluorescence disparaît.

L'activité de la pyruvate kinase chez des individus sains allait de 4,0 à 7,7 mmol (min / 1010 érythrocytes) ou 4,0 à 7,7 Puissance. La majorité de l'activité enzymatique de la maladie homozygote moins 1 Puissance. Cependant, il peut y avoir des cas légère baisse de l'activité de l'enzyme. Le diagnostic d'une forme rare d'anémie hémolytique est très difficile, et un diagnostic peut être posé que dans l'étude de la cinétique enzymatique.

Le diagnostic différentiel de l'anémie hémolytique, associé à un déficit de la pyruvate kinase

Le diagnostic différentiel de l'anémie hémolytique, associé à un déficit de la pyruvate kinase, nécessaire de procéder à d'autres formes d'anémie hémolytique héréditaire.

Comme la plupart des patients présentant un déficit en pyruvate kinase activité contrairement aux individus, microspherocytosis souffrance, elliptotsitozom, stomatocitozom, l'anémie hémolytique, chariot conditionné hémoglobine instable, et la maladie de thalassémie est héréditaire dans une autosomique récessive, que cette pathologie ne se trouve que dans la même génération et presque jamais vu chez les parents.

Lorsque l'anémie héréditaire, chariot conditionné hémoglobine instable, en particulier dans des maladies graves, parfois propositus est le premier porteur de la mutation, et ensuite la maladie est transmise à la génération suivante. Par conséquent, le diagnostic différentiel doit être effectuée avec hémoglobinopathies, chariot conditionné hémoglobine instable, ainsi que l'anémie hémolytique héréditaire récessive, causée par une activité déficiente d'autres enzymes.

Il joue un rôle de support de la stabilité de l'hémoglobine, électrophorèse yego. Pour exclure les autres fermentopathia étudié l'activité d'autres enzymes d'érythrocytes, et d'exclure les auto-immune anémie hémolytique réalisé Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Procédé fluorescent pour déterminer l'activité par piruvatkiiazy Beutler

Réactifs.

1. L'acide Fosfoenolpirovinogradnaya (sel tritsiklogeksilammoniynaya) 0,15 M solution de, neutralisés à pH 7,0 à 8,0 0,2 M solution de NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M solution de, neutralisé (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M solution de, neutralisé (0,1 ml).
4. Le sulfate de magnésium 0,08 M solution de (0,1 ml).
5. Une solution tampon de phosphate de potassium 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. L'eau Distillirovannaya (0,62 ml). Le mélange peut être stocké à - 20 ° C est de pas plus d'une semaine.

Méthode.

Pour une utilisation du sang de recherche, pris avec l'héparine ou le citrate de sodium. Il est centrifugé, aspiré et préparer plasma 20 % suspension de globules rouges en ajoutant quatre volumes de solution de chlorure de sodium isotonique.

Érythrocytaire suspension dans une quantité 0,02 ml est mélangé avec 0,2 ml de réactif et on incube pendant 30 minutes à 37 ° C. Une gouttelette a été placée sur le papier filtre, et la navigation sur le fluoroscope. Fluorescence de base a été détectée immédiatement après l'addition d'érythrocytes au mélange avant incubation. Normalement, après 30 min d'incubation, elle disparaît, et l'activité de carence restes pyruvate kinase. C'est, NADH qui est fluorescent sous l'influence du rayonnement UV dans la zone, près de visible, tandis que NAD fluorescence ne pas. Parce que la solution ci-dessus est instable et facilement dégradé, nécessite une surveillance. Vous devriez soigneusement séparer la couche de globules blancs, étant donné que l'activité de l'activité de l'enzyme érythrocytaire de déficit en pyruvate kinase dans les leucocytes peut être normale.