Le diagnostic de l'infertilité causée immunologiquement

Au cours d'une longue durée de vie marier sans l'utilisation de contraceptifs, et en présence de micro-région des muqueuses dans les organes génitaux peuvent se produire graduellement repérer antigènes d'immunisation de spermatozoïdes. L'examen physique des époux, consistant en un mariage stérile, ne peut pas déterminer la cause de l'infertilité chez les 10-15 % cas. Il est dans ce groupe de conjoints infertiles lors de l'application des méthodes spéciales d'enquête canal cervical secrète, anticorps plasmatiques de sperme et des spermatozoïdes de sérum sont souvent détectés (ASAT), Utilise des tests qualitatifs et quantitatifs de la recherche immunologique.

Test Postkoytalnыy (FCT)

Test Postkoytalnыy (FCT) Elle se réfère à immunologique qualitative. Un résultat de test négatif indique l'absence de spermatozoïdes dans le secret de canal cervical, mais vous ne pouvez pas identifier la cause de leur absence.

Méthode. Par le nombre de spermatozoïdes mobiles dans le secret de canal cervical, obtenu après le coït, établir l'étendue des violations de leur capacité de pénétration d'infertilité ou de l'immunité pour les mucus du canal cervical.

FCT est nécessaire pour mener à bien les conditions suivantes: L'étude devrait être réalisée dans la période de l'ovulation, qui a révélé colpocytologic ou autre méthode, après conjoints d'abstinence avant dans les 2-3 jours.

La méthodologie de la. Après le coït habituel pour une femme 30 minutes doivent mentir sur son dos, plier les genoux. Les douches vaginales et le nettoyage de l'interdit, suffit de serviette hygiénique, qui est éliminé au cours de la capture pour l'étude de mucus du canal cervical. Après 2-4 heures, admissible et après 6-10 heures (temps, écoulé avant l'étude, indiqué dans l'analyse) après les rapports sexuels col exposé en utilisant un miroir Cuzco et de mucus endocervical aspiré ou une seringue tuberculine (sans aiguille), une pipette avec une poire en caoutchouc, ou polyéthylène cathéter.

Lors du lavage de l'instrument ne doit pas être utilisé désinfectants, où elles affectent la motilité des spermatozoïdes. Une goutte du mucus résultant du canal cervical est transférée à une lame de verre chauffée, lamelle revêtue, Territoire lubrifiée avec de la paraffine liquide de fuir. Formulation immédiatement mikroskopiruyut (oculaire 7X, Objectif 40X), la détermination du nombre et de la nature de la motilité des spermatozoïdes. Le médicament peut être détectée avec mobilité progressive des spermatozoïdes actif, mouvement oscillant (le phénomène du swing) et fixe.

Acceptées offrent cinq types de conclusions FCT.

• Excellent (normes pertinentes): dans cinq champs de vision jusqu'à 15-20 avec spermatozoïdes actifs mobilité progressive et plus. Le sperme avec le phénomène d'oscillation est inférieure à 25 %.
• Satisfaisant: dans cinq champs de vision jusqu'à 10 spermatozoïdes actifs mobilité progressive et moins 25 % sperme avec le phénomène du swing.
• Pauvres: Moins 5 spermatozoïdes dans cinq champs de vision.
• Moins: absence de sperme.
• Douteux: dans cinq champs de vision plus 5 sperme actif mobiles et plus 25 % le phénomène du swing.

Lorsque le cinquième type de FCT souvent observé incompatibilité immunitaire entre les conjoints, donc nécessaire de déterminer l'ACAT. Pour identifier l'ACAT endocervical secrète, plasma, du sperme ou du sérum sanguin et de les afficher (agglutination ou immobilisé) Il exige la nomination d'immunoessais quantitatifs.

Un PBC négative Les études commencent par une définition de pénétrer (pénétration) la capacité de l'essai de pénétration du sperme par (Vendredi) et la sensibilité à la sécrétion du sperme du canal cervical en utilisant un contact de test de sperme et la glaire cervicale (TKSTSS).

Test Penetracionnyj (TP)

La mince longueur capillaire 10 Voir tapé pendant l'ovulation mucus du canal cervical. Une extrémité ouverte du capillaire se ferme argile, et le second est placé dans un tube à essai avec un éjaculat frais de test (pas plus 3 heure après l'éjaculation). Avec de l'argile dans le capillaire est fixé au tube vertical. L'échantillon est incubé dans un thermostat à une température 37 ° C 1 non. Sur la qualité de l'éjaculat est jugé par la profondeur de pénétration de spermatozoïdes dans le mucus du canal cervical. Il existe trois types de GES.

• Affirmative - La profondeur de pénétration (la plus grande distance en centimètres, parcouru au moins seul spermatozoïde) dessus 5 cm; le nombre de spermatozoïdes dans le point de pénétration maximale plus 5 en vue, et le nombre de spermatozoïdes mobiles dans le tiers supérieur du tube capillaire est supérieur à 50 %.
• Douteux - Une profondeur de pénétration jusqu'à 5 Voir moins de spermatozoïdes 5, leur mobilité dans le tiers supérieur des tronçons capillaires 50%.
• Moins - La profondeur de pénétration de spermatozoïdes atteint 1 cm.

La capacité des spermatozoïdes à la pénétration Cela dépend de la phase du cycle menstruel. Elle commence à sortir de la neuvième jour du cycle menstruel,, activant progressivement, atteint son expression maximale de la période d'ovulation, tenue à ce niveau pendant deux jours, puis diminue progressivement.

Sperme de contact de test et la glaire cervicale (TKSTSS)

Sur la diapositive est de mettre une petite goutte de mucus du canal cervical, prélevés sur des femmes pendant l'ovulation, et un certain nombre de la même chute de la taille de l'éjaculat. Les deux gouttes sont recouverts d'un couvercle en verre, qui est légèrement enfoncée pour, reliée à une baisse. Le médicament est placé dans une chambre humide (Boîte de Pétri avec un coton-tige humidifié) et incubées dans un thermostat à une température 37 ° C 1 non.

Dans ces conditions, sperme normal pénétrer le secret du canal cervical normale, comme on peut le voir sous le microscope à un grossissement de 200x. Pour tenir compte de la réaction près de la frontière entre les deux médias compte le nombre de pénétrer le secret du sperme de canal cervical dans deux champs adjacents de vue.

Avec une excellente TKSTSS dans deux champs de vision révèle plus 25 spermatozoïdes mobiles activement dans le phénomène du swing moins 25 %. Si TKSTSS satisfaisante dans deux champs de vision révélé plus 15 sperme activement mobiles, TKSTSS en bas - moins de 15. Une pénétration absent TKSTSS négative, en cas de doute - un phénomène d'oscillation dépasse 25 %.

Dans cet essai, comme dans le document PCT, le phénomène du swing, excédant 25 %, probable, Il indique la présence de l'ACAT et exige la nomination d'immunoessais quantitatifs.

En utilisant le sperme et les sécrétions cervicales hommes infertiles et fertiles canaux en différentes quantités à utiliser TKSTSS identifier mari infertiles.

• Exemple 1. Pris un canal secret de col de l'utérus chez les femmes et les hommes couples infertiles sains contrôle de éjaculat. Excellente TKSTSS indique une faible capacité de pénétration du sperme de son mari, et la sensibilité de la sécrétion normale du canal cervical.
• Exemple 2. Pris secrète complète du canal cervical femme en bonne santé et son mari éjaculat des couples infertiles. Bad TKSTSS indique une faible pénétration des spermatozoïdes.
• Exemple 3. Femmes endocervicales couples infertiles secrètes prises et des hommes sains de contrôle éjaculatoire. Bad TKSTSS indique infériorité canal cervical secrète, qui, évidemment, ne pénètrent pas de spermatozoïdes normaux.

Tests immunologiques quantitatives

Mikroagglyutinatsionny essai Friberg

Mikroagglyutinatsionny essai Friberg (TF) suffisamment sensible et est disponible pour les laboratoires de diagnostic clinique. Utilisation TF peut déterminer la présence de l'ACAT et agglutination titre dans divers matériaux (éjaculat de plasma, extraits de mucus du canal cervical et dans le sérum des deux conjoints).

Réactifs:

1. Une solution saline tamponnée au phosphate (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Huile Vazelinovoe.

Équipement: microscope, seringue à tuberculine, mikroagglyutinatsionnye pipette 1 ml, la capacité de micropipette 0,1 ml.

Méthode. Sérum de test sanguin est inactivée par incubation dans un incubateur à 56 ° C 30 m. Éjaculer, obtenu par masturbation, diluée immédiatement afin que le FSB, la concentration de spermatozoïdes est 40 million. dans 1 ml.

En raison de la matière (éjaculat de plasma, extraire le secret du canal cervical ou du sérum) prépare une série de dilutions 1:4 à 1:128 en utilisant comme liquide de dilution FSB. Dans les puits avec mikroagglyutinatsionnyh de l'huile de paraffine planchettes seringue tuberculine avec une aiguille est introduite (dans l'huile vazelinovoe) Les petites gouttes de chaque dilution de la substance d'essai. Après chaque échantillon est lavé quatre fois la seringue. Dans chaque dilution est ajouté à la 5 fois plus petite goutte de l'éjaculat, et par 4 h à la température ambiante détectée agglutinats. Dernière sélection, lequel sous un microscope au grossissement 100X détecté 3 agglutinent sous revue et plus, agglutination titre correspond ACAT.

Test Spermoimmobilizuyuschy Izodzhima (SIT).

Titre du sérum de blocage ACAT, le plasma ou le sperme extraient canal cervical secrète est définie par le nombre de spermatozoïdes mobiles dans la présence d'antigènes (sperme).

Composants.

1. Éjaculer, qui est produit préparé de façon similaire et, TF utilisant FSB; motilité dépasse 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya sérum de cobayes.

3. Sérum humain immun (CISH), donner en présence de complément par 1 h d'incubation immobilisation 90 % sperme.

4. Sérum humain normal (NCHS), inactivé par chauffage à une température 56 ° C 30 m.

5. Test de sérum inactivé, le plasma et le sperme extraire canal cervical secrète.

Méthode. Pour évaluer l'activité du complément immobiliser le 1er tube est introduit 0,5 ml de solution isotonique de chlorure de sodium, pour déterminer les changements dans la motilité des spermatozoïdes sans ASAT le tube à essai 2 - 0,5 ml NHS, contrôle immobilisation troisième tube - 0,5 ml de CISH et pour déterminer le blocage de la quatrième ACAT tuyau - 0,5 ml de sérum, ou le plasma de l'éjaculat, extrait ou la sécrétion endocervical.

Ensuite, on introduit dans chaque tube par 0,1 ml complément. La dernière chose à tous les tubes est ajouté 0,05 ml suspension de spermatozoïdes à une concentration 40 million. dans 1 ml. Trépied tubes ont été placés dans un incubateur à une température 37 ° C 1 non. Les tubes sont retirés du four et soigneusement secoué constante pour tenir compte de sperme agglutiné.

Pour évaluer les résultats sous haute microscope de grossissement (400X) calculé le pourcentage de spermatozoïdes mobiles dans une goutte de l'éprouvette, déposée sur une lame de verre et recouvert d'un couvercle. De même, on définit le pourcentage de spermatozoïdes mobiles dans les gouttelettes des tubes à essai avec le NHS et CISH. Le résultat de la réaction en considération par la formule

SIT = K / A

où K - le nombre de spermatozoïdes mobiles dans le contrôle avec le CISH et le NHS;

À propos - le nombre de spermatozoïdes mobiles dans un tube à essai (test de sérum, ou le plasma de l'éjaculat, ou le secret du canal cervical).

Avec SIT moyenne<2 le test est négatif (nombre de spermatozoïdes mobiles dans le contrôle et dans les tubes à essais ayant approximativement la même), Si l'indice CTI>2 - Le test est positif, t. c'est. dans le matériau (sérum, le plasma ou le sperme extraire canal cervical secrète) sont immobilisées ACAT.

• Exemple 1. Le contrôle au sol à CISH - 10 % spermatozoïdes mobiles. La deuxième commande avec le NHS - 80% spermatozoïdes mobiles. Les deux commandes ensemble - 90 % spermatozoïdes mobiles. Dans le tube à essai - 80 % spermatozoïdes mobiles.

SIT = R / D = 90/80 = 1.1

Le test est négatif, immobilisé ACAT absent.

• Exemple 2. Dans le tube à essai - 40 % spermatozoïdes mobiles, Toutefois, dans le contrôle, dans l'exemple 1.

KN = 90/40 = 2,2

Le test positif. Il existe anticorps immobilisé (ASAT), par lequel la motilité des spermatozoïdes considérablement réduit.