La definición de las características cuantitativas y cualitativas de los espermatozoides

Определение подвижности сперматозоидов

Определение подвижности сперматозоидов является важнейшим параметром, характеризующим качество эякулята. Esperma, способные к оплодотворению, обладают подвижностью — совершают прямолинейное поступательное движение со скоростью 50 мкм/с. В эякуляте можно обнаружить сперматозоиды с нарушениями подвижности — дискиноспермией в виде колебательных, манежных и других видов движения, которые в норме отсутствуют.

Подвижность сперматозоидов оценивают в нативном препарате эякулята при ограниченном поле зрения (с помощью окошка Фонио), используя окуляр 7Х и объектив 40X, при полуопущенном конденсоре. Подсчитывая 100 célula, отмечают количество среди них подвижных, малоподвижных и неподвижных сперматозоидов. В норме активно-подвижные сперматозоиды составляют 80—90 %, малоподвижные — 10—12, неподвижные — 6— 10 %. Учитываются только те активно-подвижные и малоподвижные сперматозоиды, которые совершают поступательные движения вперед.

Можно использовать и более развернутую пятибалльную шкалу оценки:

• «4» — отличная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной поступательной подвижностью со значительной скоростью);
• «3» — хорошая подвижность (несколько сниженная);
• «2» — посредственная подвижность (много неподвижных сперматозоидов, но с вибрирующими хвостами);
• «1» — плохая подвижность (отсутствие поступательного движения, подвижность только хвостов сперматозоидов);
• «0» — движение сперматозоидов отсутствует.

Фертильность эякулята зависит от продолжительности подвижности сперматозоидов, поэтому необходимо определять подвижность сперматозоидов в динамике (динамическая кинезисграмма).

Каплю эякулята наносят на покровное стекло, переворачивают его и кладут на предметное стекло с луночкой для висячей капли таким образом, чтобы капля оказалась в центре углубления. Края покровного стекла смазывают жидким парафином и под микроскопом определяют процент активно-подвижных, малоподвижных и неподвижных сперматозоидов через 1, 3, 6, 12 y 24 horas después de la eyaculación. Исследование проводится при комнатной температуре. В норме количество активно-подвижных сперматозоидов снижается через каждые 2—3 ч на 20 % ,

• Nota. Микроскопическое исследование эякулята должно проводиться в лаборатории одним лицом, обладающим достаточным опытом в этой области лабораторной диагностики, так как результаты определения подвижности сперматозоидов у разных исследователей колеблются до ±40 % и во многом зависят от опыта работы с эякулятом.

Проба на «оживление» сперматозоидов

Проба на «оживление» сперматозоидов основана на восстановлении нормальной подвижности неподвижных, но живых сперматозоидов с помощью стимулирующих растворов:

1) раствора Бекера (глюкоза — 3 g, En₂HPO₄ - 0,6 g, NaCl - 0,2 g, KH₂DESPUÉS₄ —0,01 г, дистиллированная вода до 100 ml; pH — 7,8);

2) 0,1 % раствора кофеина (только не в ампулах!) - 10 % от объема эякулята;

3) 0,1 М раствора аргинина.

Método. Мерной пипеткой емкостью 1 мл насасывают 0,1 мл эякулята (хорошо перемешанного) и этой же пипеткой набирают 0,9 мл стимулирующего раствора. Содержимое пипетки выдувают на часовое стекло, хорошо перемешивают путем многократного всасывания и выдувания жидкости на часовое стекло, а затем готовят препараты висячей капли. Через 5— 10 мин неподвижные, но живые сперматозоиды начинают двигаться.

Процент подвижных сперматозоидов определяют сразу же при восстановлении подвижности и спустя 3, 6, 12 y 24 no. Для получения более достоверных результатов проводят параллельную пробу с двумя стимулирующими растворами. Только при условии невозможности «оживить» неподвижные сперматозоиды можно говорить о некроспермии.

Выявление живых сперматозоидов среди неподвижных

Принцип метода основан на том, что ферменты живых сперматозоидов обесцвечивают эозин. В качестве реактивов используются 5 % водный раствор эозина калия и 10 % водный раствор нигрозина.

Método. На предметное стекло наносят маленькую каплю эякулята, рядом помещают вдвое большую каплю 5 % раствора эозина калия и каплю 10 % раствора нигрозина, которая также в два раза больше капли эозина калия. Сначала эякулят смешивают с эозином калия, выжидают несколько секунд, а затем смешивают с каплей нигрозина, опять выжидают несколько секунд и делают тонкие мазки шлифованным предметным стеклом.

Используя иммерсионную систему микроскопа, в мазках подсчитывают не менее 200 esperma, выделяя живые (Incoloro) и погибшие (окрашенные эозином в красный цвет). Количество живых и погибших сперматозоидов выражают в процентах. При отсутствии нигрозина каплю эякулята смешивают с каплей 5 % раствора эозина калия и готовят тонкие мазки для микроскопии. Нигрозин окрашивает только фон препарата, на котором сперматозоиды выделяются более контрастно. В норме живые сперматозоиды составляют 80—90 % от общего их количества.

Подсчет сперматозоидов в 1 мл и во всем объеме эякулята

Количество сперматозоидов в 1 мл и во всем эякуляте подсчитывается в счетной камере Горяева.

Количество сперматозоидов во всем эякуляте определяют путем умножения числа сперматозоидов в 1 мл на количество эякулята (в миллилитрах).

• Nota. В счетной камере можно также определить число подвижных сперматозоидов, для чего эякулят следует развести теплым изотоническим раствором хлоридз натрия и подсчитать число неподвижных сперматозоидов, а затем вычесть их из общего числа.

Normalmente, en el 1 мл эякулята содержится 60—120 млн. esperma, при гиперспермии — более 120 млн., при олигоспермии — от 30 a 60 млн., qué, normalmente, делает оплодотворение невозможным. Однако описаны случаи, когда оплодотворение наступает и при содержании в 1 мл эякулята от 5 a 30 millón. esperma.

De todos modos при выявлении олигоспермии необходимы 2—3 контрольных подсчета числа сперматозоидов с интервалами времени в 3—4 недели для установления их максимального количества. У одного и того же мужчины число сперматозоидов подвержено значительным физиологическим колебаниям.

В норме во всем эякуляте содержится более 150 millón. esperma.

Подсчет сперматограммы

Сперматограмма — это процентное соотношение различных морфологических форм сперматозоидов и клеток сперматогенеза.

В мазке, окрашенном гематоксилинэозином или по Паппенгейму, подсчитывается не менее 200 esperma, при этом количество нормальных и патологических форм, а также клеток сперматогенеза выражается в процентах. Подсчет производится с использованием иммерсионной системы микроскопа и машинки для подсчета лейкограммы с предварительно измененными названиями клавишей.

В нормальном эякуляте нормальные формы сперматозоидов составляют 80—85 %, algunas veces 100 %, в их число входят физиологические варианты, которые характеризуются или необычно суженной, или уменьшенной, или увеличенной головкой.

Молодые, или незрелые, формы сперматозоидов имеют вокруг головки и шейки остаток цитоплазмы («воротничок»), наблюдаются при частых половых сношениях и не способны к оплодотворению.

Старые формы сперматозоидов (гиперхромия, ахромия, вакуолизация головки) появляются в эякуляте после продолжительного полового воздержания и не пригодны для оплодотворения.

К патологическим формам относятся сперматозоиды с деформациями головки: мегалосперматозоиды (гигантосперматозоиды), макро-, микросперматозоиды, конические, двуглавые сперматозоиды с одной шейкой и одним хвостом, без шейки с одним или несколькими хвостами, без хвоста, с хвостом без головки и пр.

У здоровых мужчин в нормальном эякуляте патологические формы сперматозоидов обычно не встречаются, но иногда их количество при нормальной оплодотворяющей способности эякулята может достигать 20 %, из них приблизительно 15 % составляет патология головки, 3-5 % — тела, 2-5 % — хвоста.

При патологическом сперматогенезе, секреторной форме бесплодия выявляются сперматозоиды с патологией головки и шейки. Патология хвоста обычно экскреторного происхождения, возникает при прохождении сперматозоида по семявыносящим путям.

В окрашенных препаратах также четко просматриваются отдельно расположенные герминативные клетки на разных стадиях дифференцировки и созревания, что имеет важное значение для дифференциации аспермии и азооспермии.

Сперматогонии имеют округлую, иногда овальную форму, диаметр их 5—12 мкм. Ядро занимает приблизительно одну треть клетки, oscuro- или светлоокрашенное, с 1—2—3 нуклео- лами, часто расположенными вблизи кариолеммы (Sobre nuclear), estructura de la cromatina melkozernystaya. El citoplasma es estrecho, basófilo, Homogéneo. Dividir espermatogonias mitóticamente varias veces. Hay células con etapas bien definidas de la mitosis.

Algunas de las células, formado a través de la mitosis, дифференцируются в сперматоциты I, y luego II pedido. Spermatocyte ordeno - Ronda o células poligonales con un diámetro de 17-19 mm con un gran núcleo redondo y fino luz citoplasma. En preparaciones teñidas es una zona perinuclear claro.

Espermatocitos II de la orden образуются в результате мейоза. Они меньше, чем сперматоциты I порядка (diámetro 15 m), но по морфологии почти идентичны. В эякуляте встречаются чаще, чем сперматоциты I порядка, но значительно реже, чем сперматиды.

Spermatydы — мелкие, круглые или вытянутой формы клетки диаметром 12—15 мкм с круглыми гиперхромными ядрами, расположенными центрально или эксцентрично. Возможно наличие многоядерных сперматид. Citoplasma pálido, базафильная, menudo vacuolado.

Сперматиды превращаются в сперматозоиды.

Клетки сперматогенеза в нормальной сперматограмме составляют не более 2 %. Большое количество их наблюдается при бесплодии секреторного характера.

Для фазово-контрастной микроскопии эякулят разводится изотоническим раствором хлорида натрия с добавлением небольшого количества 1 % водного раствора риванола или карболовой кислоты для снижения подвижности сперматозоидов.

При люминесцентной микроскопии на предметное стекло наносится одна капля эякулята и одна капля акридинового оранжевого в разведении 1:20000. Капли смешиваются и накрываются покровным стеклом. Для микроскопии используются окуляр 7Х и объектив 40Х. Живые сперматозоиды окрашиваются в зеленый цвет, погибшие — в оранжевый. Нормальные и патологические формы сперматозоидов легко различить вследствие их морфологических особенностей.

Правила работы на фазово-контрастном и люминесцентном микроскопах описаны в инструкциях к этим приборам. При использовании фазово-контрастной и люминесцентной микроскопии сперматограмма подсчитывается по общим правилам.

На основании микроскопического исследования эякулята можно выявить различные патологические состояния.

• Аспермия — отсутствие в эякуляте сперматозоидов и клеток сперматогенеза.
• Азооспермия — отсутствие сперматозоидов при наличии клеток сперматогенеза.
• Астеноспермия — уменьшение числа подвижных клеток и увеличение числа патологических форм при нормальном общем количестве сперматозоидов.
• Олигоастеноспермия — уменьшение числа сперматозоидов и их подвижных форм и увеличение количества патологических форм.
• Некроспермия — неподвижность всех сперматозоидов в препарате даже после «оживления».
• Акиноспермия — состояние, при котором в отличие от некроспермии ранее неподвижные сперматозоиды после «оживления» начинают активно двигаться.