Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemia, debido a la actividad de la deficiencia de piruvato quinasa de las células rojas de la sangre

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemia, La deficiencia de eritrocitos piruvato quinasa relacionado - una forma relativamente rara de anemia hemolítica, que se hereda de forma autosómica recesiva, Da manifestaciones clínicas en los homocigotos, procede con signos de hemólisis intracelular, macrocitosis de eritrocitos, bajo contenido de potasio. Hay mas que 200 casos de portadores homocigotos de la actividad piruvatkinaznoy déficit.

Patogenesia

El piruvato quinasa es una de las enzimas, glucólisis concluir. Este glucólisis enlace y ATP forman nikotinamiddinukleotid. La mayoría de los pacientes con deficiencia de la actividad quinasa de piruvato se reduce en el contenido de las células rojas de la sangre de estos dos metabolitos, En algunos casos, el contenido de ATP es normal, pero perturbado la estabilidad de ATP durante la incubación. Los niveles normales de ATP que se encuentran en reticulocitosis significativa. Esto es debido a la presencia de reticulocitos y la posibilidad de ATP mitocondrial no sólo a través de la glucólisis, pero también debido a la fosforilación oxidativa.

La consecuencia de la deficiencia de piruvato quinasa Es también la acumulación de los productos de la glucólisis, formado en etapas anteriores - fosfofenolpiruvata, 3-fosfoglicerato, y, especialmente, 2,3-difosfoglicerato. Piruvatanlaktata contenido disminuye en las células rojas de la sangre.

La falta de ATP en los eritrocitos piruvato quinasa deficiencia Esto conduce a la interrupción de la función de la bomba de ATP-aznogo glóbulos rojos y a la pérdida de iones de potasio, en el que la concentración de iones de sodio en los eritrocitos de no creciente. Esto provoca una disminución en el contenido de iones monovalentes en los eritrocitos, la deshidratación de la célula y su contracción. Este fenómeno se llama dessikotsitoz. La disminución en los glóbulos rojos de agua complica el proceso de oxigenación y liberan oxígeno por la hemoglobina. En este sentido, cierto papel compensatorio desempeñado por una acumulación significativa en los eritrocitos de 2,3-ácido difosfoglitserinovoy.

La afinidad de la hemoglobina por el oxígeno se reduce por su interacción con 2,3-difosfoglicerato. Por lo tanto, en concentraciones más altas de 2,3-difosfoglicerato devuelve oxígeno a los tejidos se facilita.

Las manifestaciones clínicas de la actividad de la deficiencia de piruvato quinasa

Las manifestaciones clínicas de la deficiencia de actividad de la quinasa de piruvato dependen del grado de hemólisis. En algunos casos, el aumento de la hemólisis se manifiesta en el nacimiento y está acompañado por la aparición de graves crisis hemolítica, provocando la necesidad de transfusiones de sangre para mantener la hemoglobina en los niveles inferiores a los normales. En otros casos, la enfermedad puede ocurrir casi asintomático con los primeros signos de aumento de la hemólisis (esclerótica subikterichnost y la piel) 17-30 años de edad.

En general; en comparación con microesferocitosis, deficiencia de piruvato quinasa tiene una más severa.

Casi todos los pacientes con el bazo palpable. El ligero aumento en sus descritas algunas anomalías portadores heterocigotos, aunque tienen anemia, normalmente, que falta. Un número de pacientes posible esplenomegalia. Un aumento significativo en el hígado rara vez se encuentra. En pacientes aislados con úlceras en las piernas identificados.

Indicadores de laboratorio de la actividad de la deficiencia de piruvato quinasa

La mayoría de los pacientes con deficiencia de la actividad de la piruvato quinasa observó anemia moderada (4,34- 6,21 mmol / l, o 70 a 100 g / l), Sin embargo, durante la crisis de la hemoglobina puede reducirse a 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Eritrotsitov- contenido 2,5-3,0 T 1 l. Crisis hemolítica puede ser causada por la infección. Hay casos de aumento de la hemólisis durante la menstruación.

Los glóbulos rojos de pacientes con deficiencia de piruvato quinasa caracterizado por macrocitosis con normohromiey, ligera anisocitosis y poiquilocitosis. Hubo un policromatofilia justo. A veces se encuentra mishenevidnye glóbulos rojos y los glóbulos rojos con bordes ondulados o en la forma de la morera, menudo identificada punktatsiya eritrocitos basófilo, Corpúsculos Jolly. Algunos pacientes en la sangre periférica revelaron un número significativo de erythrokaryocytes, durante la crisis, puede ser aumentada hasta 60-70 %. ESR, recuento de glóbulos blancos, leucograma, los recuentos de plaquetas dentro del rango normal. Al igual que con otras formas de anemia hemolítica, en la médula ósea reveló una irritación aguda germen rojo hematopoyesis.

El nivel de bilirrubina, normalmente, aumentado debido a la indirecta.

La hemoglobina plasmática libre normal, pero se puede reducir los niveles de haptoglobina. Hemosiderina en la orina está ausente. Contenido de la hemoglobina fetal y hemoglobina A₂ dentro del rango normal.

Resistencia osmótica de los eritrocitos deficiencia de piruvato quinasa en la mayoría de los casos normales, a veces reducida después de la incubación día. Autogemoliz, normalmente, mejorado en diversos grados. Hay casos de deficiencia de piruvato quinasa con autogemolizom normales. En el primero reportaron casos de deficiencia de piruvato quinasa se ha registrado tipo II autogemoliza, corrige la adición de ATP, y no corregir o corregir ligeramente la adición de glucosa. Posteriormente, muchos casos se han descrito con el tipo de deficiencia de la enzima que autogemoliza o ninguna. Por lo tanto, no se recomienda aplicar el método autogemoliza para el diagnóstico diferencial de las anemias hemolíticas. La vida útil de las células rojas de la sangre con deficiencia de la actividad piruvato quinasa siempre se acorta.

Tipo herencia actividad piruvato quinasa autosómica recesiva. Los heterocigotos prácticamente sanos, Según varios investigadores, la gravedad del déficit han oscilado desde 50 a 70 % normas.

Actividad de diagnóstico de la deficiencia de piruvato quinasa

El diagnóstico de la deficiencia de piruvato quinasa de las células rojas de la sangre se puede esperar para entregar en el caso de anemia hemolítica, fluye a lo largo de los años con el aumento en el bazo, falta de sangre periférica signos frotis microesferocitosis, elliptotsitoza y stomatotsitoza.

Los ensayos cualitativos para determinar la actividad de la piruvato quinasa. Para este propósito, el método se utiliza ampliamente mancha fluorescente, basado en, que en el curso de la reacción, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oxida y la fluorescencia desaparece.

La actividad de la piruvato quinasa en individuos sanos varió de 4,0 a 7,7 mmol (min / 1.010 eritrocitos) o 4,0 a 7,7 Poder. La mayoría de la actividad enzimática enfermedad homocigotos menos 1 Poder. Sin embargo, puede haber casos en ligero descenso en la actividad de la enzima. El diagnóstico de una forma rara de anemia hemolítica es muy difícil, y el diagnóstico se puede hacer sólo en el estudio de la cinética enzimática.

El diagnóstico diferencial de la anemia hemolítica, asociada con la deficiencia de piruvato quinasa

El diagnóstico diferencial de la anemia hemolítica, asociada con la deficiencia de piruvato quinasa, necesario para llevar a cabo otras formas de anemia hemolítica hereditaria.

Como la mayoría de pacientes con deficiencia en la actividad de la piruvato quinasa a diferencia de los individuos, microesferocitosis sufrir, elliptotsitozom, stomatocitozom, anemia hemolítica, carro acondicionado hemoglobina inestable, y la enfermedad talasemia se hereda de forma autosómica recesiva, que esta patología se encuentra sólo en la misma generación y casi nunca visto entre los padres.

Cuando la anemia hereditaria, carro acondicionado hemoglobina inestable, especialmente en la enfermedad severa, veces probando es la primera portadora de la mutación, y entonces la enfermedad se transmite a la siguiente generación. Por lo tanto, el diagnóstico diferencial debe llevarse a cabo con hemoglobinopatías, carro acondicionado hemoglobina inestable, así como la anemia hemolítica hereditaria recesiva, causado por la actividad deficiente de otras enzimas.

Desempeña un papel secundario la estabilidad de hemoglobina, electroforesis yego. Para excluir otro fermentopathia investigado la actividad de otras enzimas de los eritrocitos, y excluir anemia hemolítica autoinmune llevado Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Método fluorescente para determinar la actividad por piruvatkiiazy Beutler

Reactivos.

1. Ácido Fosfoenolpirovinogradnaya (sal tritsiklogeksilammoniynaya) 0,15 M solución de, se neutralizó a pH 7,0-8,0 0,2 Solución M de NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M solución de, neutralizado (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M solución de, neutralizado (0,1 ml).
4. Sulfato de magnesio 0,08 M solución de (0,1 ml).
5. Solución tampón de fosfato de potasio 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Agua Distillirovannaya (0,62 ml). La mezcla puede ser almacenado a - 20 ° C es no más de una semana.

Método.

Para la investigación el uso de sangre, tomada con heparina o citrato de sodio. Se centrifugó, aspirado y preparar plasma 20 % suspensión de células rojas de la sangre mediante la adición de cuatro volúmenes de solución de cloruro sódico isotónica.

Suspensión de eritrocitos en una cantidad 0,02 ml se mezcla con 0,2 ml de reactivo y se incubaron durante 30 en minutos 37 ° C. Una gota se coloca en el papel de filtro, y navegar por la fluoroscopio. Fluorescencia de línea de base se detectó inmediatamente después de la adición de los eritrocitos a la mezcla antes de la incubación. Normalmente, después de 30 minutos de incubación que desaparezca, y la actividad de los restos de deficiencia de piruvato quinasa. Esto es, NADH que es fluorescente bajo la influencia de la radiación UV en la zona, cerca visible, mientras que NAD no fluorescente. Debido a que la solución anterior es inestable y fácilmente degradado, requiere un seguimiento. Usted debe separar cuidadosamente la capa de células blancas de la sangre, ya que la actividad de piruvato actividad de la enzima quinasa de eritrocitos deficiencia en leucocitos puede ser normal.