El estudio de la coagulación sanguínea

Métodos para el estudio de sistema de coagulación de la sangre incluyen los siguientes grupos:

1. Indicativo (general), dando una idea sobre el estado de toda la cascada de la coagulación como un todo y sus etapas individuales (registro se puede hacer visualmente o por dispositivos individuales - koagulografa, tromboelastografía y otros.);
2. diferenciar el déficit de factores individuales - las pruebas de coagulación correctivas, Análisis de mezcla estudio de plasma de la sangre el plasma sanguíneo de pacientes con una deficiencia conocida conocida de ciertos factores;
3. la cuantificación de los componentes individuales en su actividad funcional (pruebas de coagulación, estudios y otros sustratos cromogénicos) y (o) en marcadores inmunológicos;
4. identificación de la activación intravascular de coagulación de la sangre y la fibrinolisis de características funcionales o marcadores moleculares tales activación - para identificar los factores de coagulación circulantes activados, Degranulación plaquetaria Producto, división de los componentes de coagulación de la sangre o sus metabolitos, aparición de nuevos marcador antigénico factores y sus complejos activado, componentes metabolización etiquetada acelerados de coagulación de la sangre (reducir el período de su vida media en circulación).

Así, la hora de evaluar el estado del sistema de coagulación de la sangre usos tanto en su propia método de la coagulación (laboratorio e instrumental), formando la base del proceso de diagnóstico, y inmunológica, Radionúclidos y otros tipos de investigación. En muchos casos, los componentes se pueden definir como una actividad funcional, e inmunológicamente - el contenido del antígeno correspondiente en la sangre. El uso concomitante de estas técnicas nos permite diferenciar formas de patología, relacionado con la falta de síntesis del factor de coagulación respectivo (en este caso, la misma que se baja actividad funcional, y la cantidad de antígeno), y el moho, en el que la molécula se sintetiza factor de, pero es anormal y funcionalmente defectuoso.

Para hacer referencia al número de las primeras formas del factor correspondiente se añade el signo "-" (por ejemplo,, VIII-, IX- Y t. d.), y el segundo - el signo " " (por ejemplo,, VIII , IX ).

Áspero (general) pruebas de coagulación

Determinación del tiempo de coagulación

Determinación del tiempo de coagulación (Un método preferido de Lee-White) - Se usa a largo bystrovypolnimy (junto a la cama) pruebas indicativas, permite identificar trastornos hemorrágicos significativos, asociada con un déficit de factores de coagulación (además de Factor VII) o con el efecto de los anticoagulantes y fibrinolítico. Se utiliza como una guía para la prueba y el control sobre la heparina, eliminación de protamina sulfato de heparina. La prueba es relativamente baja sensibilidad, sus figuras se rompen sólo marcada disminución de los factores de coagulación de plasma (abajo 4-5 %), y por lo tanto inadecuado para la detección de formas leves de la hemofilia A y B, así como los trastornos de sangrado cuando angiohemophilia, La deficiencia de factor XI, precalicreína y quininógeno alto peso molecular. Por estas razones, la prueba no puede ser utilizado para los pacientes preoperatorios: bajo prueba normal de rendimiento (5-10 Minutos) puede experimentar hemorragia postoperatoria profusa.

Plasma tiempo de recalcificación

Plasma tiempo de recalcificación - prueba de sensibilidad baja no estandarizada, menos fiables para la detección de hipocoagulación, que todo el tiempo de coagulación de la sangre. No se puede recomendar para el diagnóstico de los trastornos de la hemostasia.

El tiempo de tromboplastina parcial, plasma activado

El tiempo de tromboplastina parcial, plasma activado (TTPA, prueba de caolín-kefalinovыy) - Método de alta sensibilidad, revelando el proceso de coagulación de la sangre cuando se ejecuta el mecanismo interno. Selectivamente sensibles a la deficiencia de factores de coagulación plasmáticos (porque la escasez de plaquetas y factores 3 Plaquetas equilibra administrada externamente o Kefalonia eritrofosfatidom).

Se utiliza para monitorizar la terapia con heparina, examen preoperatorio de los pacientes, etc.. d. Los valores estándar dependen de las muestras utilizadas kephaline, en la mayoría de los casos hasta 37-50 (de manera óptima - 37-45).

Caolín plasma tiempo

Caolín durante plasma - prueba, similar a la anterior, pero sin la adición de plasma kephaline (eritrofosfatida), por lo que es sensible no sólo a una deficiencia de factores de coagulación plasmáticos, sino también a la falta de factor plaquetario 3 Plaqueta. Evaluación de la actividad prevista de este factor se puede realizar comparando el tiempo de la prueba de plasma caolín con alto y bajo contenido de plaquetas (norma - 57-70 con).

No se recomienda el uso de componentes de fosfolípidos, ceder TTPa tiempos de coagulación igual a 55 s y más, ya que esto reduce en gran medida la precisión y la reproducibilidad de la prueba, incluyendo la determinación cuantitativa de factor VIII y IX.

Plasma momento de silicona

Plasma momento de silicona - un tiempo de recalcificación de plasma, dando como resultado una silikonirovaniya aguja, microtubos, pipetok, t. es. con la activación de un contacto mínimo. La prueba es sensible al estado de activación intravascular de hipercoagulabilidad de la fase de contacto de la puesta en marcha (factores XII y XI), sin embargo, esta violación se revela más claramente definiendo el tiempo de coagulación de sangre entera de silicona (sobre la base de la Lee-White o tromboelastograficheskoy proceso de registro cubeta siliconada).

Los valores estándar dependen del estudio de silicona y decidida la sangre de personas sanas para cada uno de su muestra separada. Al elegir silicona es la mejor, que se extiende hasta el mayor grado de tiempo de coagulación (plasma).

Protrombina (tromboplastina) plasma tiempo

Protrombina (tromboplastina) plasma tiempo (Tiempo rapido, Índice de protrombina) caracteriza la tasa de coagulación del plasma sanguíneo recalcifica proceso de inicio de dispositivo externo, t. es. la adición de una tromboplastina de cerebro humano (o conejo).

Tromboplastina Activo estandarizado en muestras mezcladas de la normalidad (prueba) plasma. La actividad de tromboplastina más comúnmente utilizado con 12-18 (en la técnica clásica con Kvika- 12-13). La tromboplastina más débil, cuanto mayor sea el error del método.

En tiempo normal de protrombina prueba plasma revela un déficit aislada o acumulativa de complejo de protrombina - VII, X, V y II, de la que tres factores (VII, X y II) K-vitaminozavisimy y su actividad disminuye bajo la influencia de anticoagulantes indirectos. En este sentido, la prueba de protrombina es fundamental en el control de las cumarinas de dosificación (neodikumarin, o pelentan, sinkumar et al.) y otros fármacos de este grupo (fenilin).

El tiempo de protrombina es normal con un déficit de factores de mecanismo interno de activación de protrombinasa - factor XII, XI, IX, viii (t. es. para todos los tipos de hemofilia y el defecto Hageman), así como la deficiencia de precalicreína y cininógeno de alto peso molecular (VM kininogena)

En la literatura la diferente designación de resultados de la prueba de protrombina. El más conveniente especificar el estudio del tiempo de protrombina y el plasma de control en cuestión de segundos (dando la información y la actividad de tromboplastina utilizado). A veces uso la relación de estos dos valores, t. es. índice (PV plasma estudio, de ,)/(Plasma de control MF, de), (la tasa de 0,9-1,1).

Otra forma de evaluación de este indicador, que es el más utilizado en los laboratorios, Índice de protrombina es un cálculo del porcentaje en la compilación de las proporciones aritméticas de Retroalimentación (norma - 90-110%), Sin embargo, este cálculo es erróneo, porque entre la concentración de factores de coagulación y el tiempo de coagulación no tiene aritmética, una dependencia logarítmica. Además, prueba de protrombina es sensible sólo a una disminución de los factores de coagulación por debajo 50 % su tamaño normal. En virtud de esta conveniente utilizar la determinación de índice de protrombina Porcentaje por curva de dilución (1:2, 1:4, 1:8 Y t. d.) muestra mixta de plasma normal. Una curva de este tipo se construyó una vez para tromboplastinas actividad inicial diferente (de 12 a 18 de) y se determina por el índice de protrombina en los pacientes estudiados. La ventaja de esta técnica consiste en que, que los resultados de todos los estudios, incluyendo la dinámica de funcionamiento en días diferentes, No se refiere a accidentales diversas muestras de plasma normal de la sangre, y promediar los mismos parámetros estándar, resultante en el método de error reducido significativamente. Índices, obtenido por la proporción y la curva de dilución del plasma normal, no se corresponden el uno al otro. Esto debe ser considerado al supervisar el efecto de los anticoagulantes indirectos, Para el índice disminuya convencional 50 % aproximadamente corresponde a una reducción de la dilución de la curva de índice para un 25-30% • En este sentido, el análisis debe especificar siempre, ¿Cómo es la relación de protrombina, ¿Cuáles son las normas de funcionamiento de la actividad de la tromboplastina.

Plasma tiempo de trombina

Plasma tiempo de trombina, t. es. el tiempo de coagulación del plasma con citrato añadiendo a una actividad de la trombina estándar, Es una prueba importante para la evaluación de la etapa final de la coagulación de la sangre. La inclusión de este indicador es importante para la correcta interpretación de todas las demás pruebas de coagulación, Por violación de la etapa final de la coagulación sanguínea debe conducir inevitablemente a un alargamiento del tiempo de coagulación en todos los métodos anteriores.

En la mayoría de los casos, durante la prueba, la trombina utilizó esta concentración de solución de trombina, que, cuando se mezcla con un volumen igual de coagulación de plasma sanguíneo para dar 12- 18 de, pero en disfibrinogenemy reconocer utilizado y las concentraciones más débiles (que conduce a una reducción de 30-35 con).

Tiempo de trombina - Un indicador de diagnóstico importante, violación de su observó como congénita, y cuando el adquirido común (secundario) gipoprotrombinemii, en la mayoría disfibrinogenemy, así como bajo la influencia de la heparina, Fibrinólisis Producto (PDF) y otros inhibidores de autoensamblaje y antitrombinas monómeros de fibrina. En virtud de este tiempo de trombina en el primer lugar y roto cada vez más en DIC aguda y subaguda, que juega un papel importante para el diagnóstico rápido de esta patología.

Prueba Autokoagulyatsionny

Prueba Autokoagulyatsionny (Permiso) - Una alta sensibilidad de dos pasos, En él se describe el proceso de coagulación de la sangre cuando empezó el mecanismo interno. Al igual que el TTPA, prueba no es sensible a una deficiencia de factor VII, pero al mismo tiempo su testimonio no depende del contenido de fibrinógeno (factor yo) en el suero de ensayo, qué se diferencia de todas las otras muestras indicativas de la coagulación.

Otra ventaja de ACT consiste en, que la sangre diluida investigado, lo que aumenta sustancialmente la sensibilidad de la prueba a una deficiencia de factores de coagulación y, Además, aplicación de la ACP no requiere el uso de caolín y kephaline, ya que la normalización de la activación por contacto de fosfolípidos y logró su propia hemolizado de glóbulos rojos investigado.

ACP es RESUMEN, en eso 2 ml de solución hipotónica (0,222 %) Se añade cloruro de calcio 0,1 ml de análisis de sangre.

En este hemolizado-calcio se forma la mezcla y protrombinasa trombina, La actividad se determina mediante la adición secuencial 0,2 ml de esta mezcla a 0,2 ml de plasma de ensayo (todos 2 min durante la primera 10 m, y luego - después de cada 10 min para 1 no).

El plasma es la fuente de fibrinógeno investigado, probado que la actividad de la trombina generada en la mezcla de. Como se muestra por numerosos estudios, puede ser sustituido por plasma de la sangre de seres humanos sanos o solución de fibrinógeno. En este caso, el flujo de la sangre del paciente se reduce a 0.1-0,2 ml (Se puede tomar desde el dedo!), qué transforma prueba autokoagulyatsionny en mikrokoagulyatsionny (MKT) y lo hace muy conveniente para uso pediátrico, incluyendo el estudio de la hemostasia en los recién nacidos.

La actividad de coagulación en el ACT y MKT inicialmente aumenta en personas sanas normalmente alcanza un máximo de 10 minutos, incubación de la mezcla de calcio en sangre (KKS), Cuando sustrato de coagulación de plasma se produce a 10 ± 1. Entonces actividad de coagulación comienza a declinar KKS, Se indica que la inactivación de la trombina formada en el mismo. Con hemofilia, la acción de la heparina y otra actividad de coagulación de la coagulación de KKS drásticamente reducida, y las máximas se mueve desde el minuto 10 en una fecha posterior. Si hay una hipercoagulabilidad antes y más significativo aumento en la actividad de la trombina en CCS.

En la realización de la prueba en un solo tubo de ensayo (Definición sólo 10 minutos de incubación KKS) que puede ser utilizado para monitorizar la terapia de heparina. La ventaja de este método de ensayo sobre el tiempo de tromboplastina parcial es, que niveló el impacto diferencial en diferentes cefalinas tiempo de coagulación de la heparina.

Basado ACP (MKT) Se desarrolló un método simple y preciso de hemofilias diagnóstico diferencial.

Con las referencias citadas en la conversión indicaciones mesas ACT (MKT) se puede expresar como un porcentaje y graficada - autokoagulogrammy.

Para estimar el número de parámetros generales son ampliamente utilizados coagulación de la sangre y los métodos instrumentales de investigación, principalmente utilizando varios koagulografov y tromboelastografía.

Tromboelastografía no sólo da una idea de los parámetros de tiempo de la coagulación de la sangre o plasma, sino también en la estructura y propiedades mecánicas de los coágulos formados. En los últimos años, hardware y métodos de registro introducidos normalización y fosfolípidos activación por contacto de la coagulación. Coagulación también creó para la implementación masiva de las pruebas de coagulación comunes - TTPa, protrombina, trombina y otra grabación automática de los resultados.

Los métodos de diferenciación de diversos deficiencia de factores de coagulación y su determinación cuantitativa

La siguiente tabla muestra los datos, ese estudio preliminar de la coagulación de la sangre utilizando tres pruebas básicas permite déficit distinción grupo de factores de coagulación diferentes plasma. Así, frenar sólo en la prueba de coagulación protrombina (Yo тип нарушения) bajo las lecturas normales de todos otra característica de la deficiencia hereditaria del factor VII o para reducir el nivel de este factor en las primeras etapas de desarrollo de la ictericia obstructiva o en los primeros 1-2 días de tratamiento con anticoagulantes de acción indirecta, Cuando la supresión de la síntesis de factor VII está por delante en su reducción desarrollo de todos los otros factores de coagulación K-vitaminozavisimyh.

Violación de sólo el mecanismo interno de la coagulación, t. es. el tiempo de tromboplastina parcial y la ACP (Тип II), hay deficiencia del factor XII, XI, IX, viii, Villeʙranda (no en todas las formas), precalicreína y quininógeno VM. De estos, en los defectos hereditarios de factor de coagulación Deficiencias XII, precalicreína y quininógeno WM es extremadamente raro y no se acompaña de sangrado, mientras que la deficiencia de factor VIII (La hemofilia A), IX (La hemofilia B) y el factor de von Willebrand es muy común (es mayor que 96 % todos los trastornos de la coagulación hereditarios) y se acompaña de hemorragia grave. Entre ellos, en primer lugar, y para llevar a cabo el diagnóstico diferencial más.

La deficiencia de factor XI relativamente raro (aproximadamente 0,5-1,0 % Todas las hemofilias), procede con un sangrado muy leve (sobre todo después de lesiones y operaciones) y que ocupa una posición intermedia entre el primer subgrupo de trastornos asintomáticos y la hemofilia y la enfermedad de von Willebrand.

Otro tipo de trastornos caracterizados por la elongación como el tiempo de tromboplastina parcial y la ACP, y el tiempo de protrombina. Es característico de la deficiencia de los factores V, X o II o para el complejo de deficiencia de factores K vitaminozavisimyh (VII, X, IX, Yo), que se observa en la ictericia obstructiva y otras formas de K-deficiencia de vitamina, y al recibir anticoagulantes indirectos.

Y finalmente, como puede verse en esta tabla, posible violación de los testimonios de las tres pruebas (Тип IV), que se observa en hipo hereditaria y adquirida- y disfibrinogenemiyah (no todo), la hora de tomar anticoagulantes de acción directa (geparina, geparinoidov, hirudina et al.), tratamiento de los activadores de la fibrinolisis y medicamentos defibriniruyuschimi (estreptoquinasa, uroquinasa et al.), aparece en los antitrombinas sangre y sustancias patológicas, conexión de la prevención (Asamblea) fibrina-monomerov - paraproteinov, kryohlobulynov, complejos inmunes, así como la coagulación de la sofisticada, causada por DIC. Por lo tanto el tiempo de trombina es a menudo perturbada en mayor medida, y un poco antes, que otras pruebas.

Al tomar en cuenta la duración de la enfermedad y la posibilidad de origen o secundarios vínculos hereditarios con otras enfermedades y medicamentos u otros efectos, la presencia o ausencia de sangrado y su tipo no pueden identificar correctamente la génesis de estos trastornos de la coagulación de la sangre profunda.

Todo pruebas de diferenciación se basan en el principio de corrección, t. es. para la determinación, la medida en que reveló un trastorno hemorrágico o eliminado, a la inversa, Persiste muestras de plasma de la sangre o productos de sangre obtenidas artificialmente deficiencia claramente conocida de un factor de coagulación.

Con este fin, los laboratorios especializados para crear una colección de faktorodefitsitnyh plasma sanguíneo, para que hagan de pacientes con un conjunto conocido de profundidad (Menos 1 %) La deficiencia de cada factor y almacenarlas en paquetes pequeños (por 0,5 ml) a una temperatura - 30 ° C. Si es necesario, estas muestras se descongelan y se usan en pruebas de diagnóstico.

Plasma, Ha sido accidental o descongelación no se utiliza, re-congelación no está sujeta a. Las pruebas correccionales no deben ser utilizados con los inhibidores de plasma inmune de un factor de. Los kits de diagnóstico de un número de firmas contiene muestras liofilizadas de plasma sanguíneo factores de coagulación deficiente identificados (plasma de sustrato). Sin embargo, muchos trastornos de sangrado rara vez se ven en la práctica clínica, referente a uso de componentes sanguíneos preparados artificialmente deficiencia normal de ciertos factores de coagulación, y plasma heterogénea (pollos, patos y otras.).

La siguiente tabla proporciona información sobre el contenido de factores de coagulación en los componentes de la sangre, utilizado para la corrección de las pruebas de coagulación, en función de las condiciones de su almacenamiento. Utilizando esta tabla, fácil de descifrar evidencia de cualquiera de las tres grandes pruebas de coagulación. Las técnicas correctivas de este tipo utilizado pruebas, estandarizada por contacto y activar fosfolípido, t. es. caolín-kefalinovыe o gemolizata primeneniem (en ACT).

Análisis de la mezcla de plasma de la sangre de los pacientes con plasma, sin duda ha conocido la deficiencia de un factor

Determinar el tiempo de tromboplastina parcial activada en el plasma de prueba, El plasma normal (control) y el plasma del factor claramente conocida deficiencia VIII (de los pacientes con hemofilia A), IX (de la hemofilia B), XI y XII. Luego, una mezcla de muestras de plasma de citrato investigó (7/10 El volumen) y sucesivamente con cada uno de los plasmas deficientes (3/10 El volumen), ya que la deficiencia de factor VIII y IX (las formas más frecuentes de la patología!).

A la mezcla se añadió caolín y cefalina, y por 2 min se somete a una recalcificación (a una temperatura 37 ° C). A la mezcla de, donde el tiempo de tromboplastina parcial activada no se normaliza, Tiene el mismo defecto de coagulación.

Así, si el paciente examinado tiempo de tromboplastina parcial activada se normaliza mediante la adición de plasma de la sangre de los pacientes con una deficiencia conocida conocida de factor VIII, pero corregido plasma sanguíneo de pacientes con deficiencia de factor IX, tiene La hemofilia A.

Del mismo modo,, pero sobre la base de la prueba de protrombina diferenciar déficit de complejo de protrombina (X, V, VII y II).

Prueba de generación de tromboplastina

Para la diferenciación de violaciónes de los mecanismos internos de la coagulación de la sangre más a menudo se utiliza clásica prueba de generación de tromboplastina la sustitución del componente de plaquetas, elaboración se requiere una considerable inversión de tiempo y la sangre, Kefalonia en desventaja a la generación de tromboplastina prueba son su voluminosidad, la necesidad de preparar un gran número de reactivos, tiempo significativo sobre su aplicación.

Prueba correctiva, basado en la base de la prueba de autokoagulyatsionnogo.

El diagnóstico rápido de los problemas es bastante diferentes respuestas prueba correctiva, sobre la base de la segunda corrección, los mismos componentes de la autokoagulyatsionnogo prueba normal a base de sangre.

Esta prueba es altamente confiable, velocidad y facilidad de implementación y requiere poco (no más 0,5 ml) cantidad de análisis de sangre, que puede ser utilizado en pacientes pediátricos.

Ella, como en la prueba de generación de tromboplastina, utilizado para la corrección del plasma y el suero adsorbido de edad, que se volvió a centrifugar antes del estudio. En tres viales vertido 2 ml 0,222 % solución de cloruro de calcio y se añadieron dos de ellos 0,1 adsorbidos ml de plasma normal (1-Yo Vial) y 0,1 ml de suero normal de edad (2-Yo Vial). Los otros tres tubos de pipeta 0,2 ml de plasma normal citratado. Entonces a todos los tubos con la solución de cloruro de calcio se añadió 0,1 ml de sangre de citrato de la prueba.

Exactamente 4 min de incubación, la mezcla de su actividad de coagulación fue probado en plasma normal.

La fuerte disminución de la actividad de coagulación sólo en el primer tubo de ensayo (BaSO normales₄-plasma) Se indica una deficiencia de factor IX paciente (La hemofilia B), Sólo en el segundo tubo (El suero de edad) - El déficit del factor VIII (La hemofilia A); Si la corrección se produce en los dos tubos (igualmente fuerte), después, obviamente, hay una deficiencia del factor XI o XII (cm. Mesa. 14).

Esta prueba es muy sensible, ya que el estudio se está realizando en un divorciado 20 en el momento de la compensación del factor de la sangre 3 Plaquetas Hemolizado. El único reactivo empleado - solución hipotónica de cloruro de calcio, toma de muestra pública.

Igualmente sencillo es el método de muestras de corrección, realizado sobre la base de una prueba para la deficiencia de protrombina factor de diferenciación II, V и VII +, X (en la mesa).

Con el fin de separar la deficiencia de factor VII y X, pruebas de coagulación adicionales llevados a cabo con la adición de la estudiada plasma sanguíneo veneno de serpiente solución Viper - medicación lebetoks (elegido tal concentración de veneno, kephaline que, en presencia de cloruro de calcio provoca la coagulación de 20-25 con; Todos los ingredientes se toman en una cantidad 0,1 ml y la mezcla de) (La tabla de abajo).

Con el mismo fin, la preparación se usa Russell viper venom, habita en la India (preparación stipven).

Se completa el diagnóstico diferencial, si es necesario, mediante la cuantificación de los factores escasos o inhibidores inmunes específicas, ¿Por qué son métodos altamente sensibles, estandarizados especiales. Estas técnicas de construcción utilizadas curvas de dilución de muestras mixtas de plasma de la sangre normal con la deficiencia de los factores de corrección, Además de la prueba. Estas curvas definen la actividad del factor de prueba en el plasma de pacientes.

Especialmente importante la determinación cuantitativa de la concentración de factor VIII y IX, y la presencia de inhibidores en pacientes con hemofilia A y B (especialmente antes y durante la cirugía y la terapia de reemplazo intensiva), así como aplazada profusa hemorragia posparto, cuando es necesario diferenciar la DIC y una rara patología - la aparición del factor inhibidor inmune VIII (siendo mucho menos - Factor V).

Con profunda deficiencia de factor XIII (una patología hereditaria muy rara) todas las pruebas de coagulación son normales, pero disolver coágulos en 5 M y urea 7 M.

Ayuda a diferenciar los distintos deficiencia de factores de coagulación también representan la extensión y, especialmente, términos de pruebas de lecturas de la normalización a los pacientes después de la administración intravenosa de productos sanguíneos, t. es. Ajustado en vivo por el Método A. 3. Barkagan.

Esta técnica es particularmente eficaz cuando una gran diferencia en la esperanza de vida en circulación factor de diferenciable. Así, un medio complejo de protrombina duración de vida varía desde unas pocas horas (factor vii) a varios días (factor II). Una posición intermedia entre los toman X Factor (2-2.5 Días) y V (12-18).

Por lo tanto, después de transfusiones masivas de los aumentos del índice de plasma chorro de protrombina con deficiencia de factor VII es muy corto, deficiencia del factor V - algo más largo (aproximadamente 4-6 veces), una deficiencia del factor X y, especialmente, II por un período más largo (durante 1-2 días). Es significativo en este sentido y el efecto sobre drogas índice de protrombina PPSB (concentrado de factor VII, IX, X y II). También normaliza breve tiempo de protrombina, la deficiencia de factor VII, y más durable (muchas veces!) deficiencia del factor X y II. Ya que este medicamento no es el factor V, Esta deficiencia no se corrige ellas.

Una diferencia similar se revela en la transfusión y la sustitución de la terapia de coagulación Factores mecanismo interno (XII, XI, IX y VIII), que registraron una prueba de tromboplastina parcial activada.

De particular interés es factor de corrección de nivel de los altavoces VIII y TTPa lecturas cuando la terapia de transfusión de la hemofilia A y la enfermedad de von Willebrand. La primera de estas condiciones se detecta sangrado inmediatamente máxima mejora después de la transfusión (rociar, rápido!) Plasma antihemofílico crioprecipitado o administración, seguido de una bastante rápida (de 10 a 18 h) una disminución constante en su, mientras que vWF se observa cierta actividad aumento de coagulación dentro de unas pocas horas después de la transfusión, y luego su decadencia - mucho más lentamente, de. A este respecto, en el tratamiento de la enfermedad de von Willebrand rara vez se utiliza más transfusiones de sustitución, que la hemofilia A.

Un estudio de la actividad funcional de factores y componentes de la calicreína-quinina coagulación y sistemas fibrinolíticos utilizando sustratos cromogénicos

Los métodos se basan en el estudio de la actividad de enzimas proteolíticas y sus inhibidores, involucrada en la coagulación sanguínea, la formación de la fibrinolisis y quinina, en intensidad y la velocidad de escisión específicamente sensibles a estas enzimas péptidos, que se libera durante la degradación del agente colorante (b-нитроанилин).

El grado de coloración de la mezcla de reacción determinado por espectrofotometría, y su intensidad se juzga en la actividad de las enzimas correspondientes (factor de coagulación, kallikreina, plasmina y otros.), y para impedir el proceso - la actividad de los inhibidores de la enzima.

Así, por ejemplo,, efecto de la heparina y la antitrombina III se puede evaluar mediante la escisión de sustratos cromogénicos debilitamiento de factor Xa o trombina, y la actividad de α₂-antiplasmina - para la reducción del sustrato cromogénico de plasmina correspondiente. Sustratos cromogénicos o tener una designación numérica (por ejemplo,, s-2222), o se hace referencia a un hromozinami prefijo abreviado, denota la enzima, a la que el sustrato sensible (por ejemplo,, Chromozym PL - субстрат плазмина, Chromozym TH - субстрат тромбина, Chromozym PK - precalicreína sustrato / calicreína, etc.. d.).

Sustratos cromogénicos se extienden las capacidades del estudio del sistema hemostático, pero no hay suficiente disponible para muchos laboratorios. Algunos estudios, hecho con su ayuda, Ellos tienen ventajas sobre las pruebas de coagulación convencionales y les dan los resultados que coinciden; en otros casos, su uso simplifica y acelera estudio, Esto hace que sea más preciso; en tercero - estas técnicas tienen un significado independiente y no se pueden reemplazar las pruebas de coagulación (por ejemplo,, definición precalicreína).

Determinación inmunológica de los componentes del sistema hemostático

Determinación inmunológica de los componentes del sistema hemostático se lleva a cabo por métodos:

• Immunoprecipitacii;
• Inmunoelectroforesis;
• Radioinmunoensayo y el otro con el antisuero apropiado

Este contenido prevista de antígeno en el plasma sanguíneo de un factor de coagulación (o sus fragmentos), no actividad funcional, que puede reducirse drásticamente con el antígeno normal en el plasma. Esta situación es típica para todos los casos, Cuando se sintetiza en el cuerpo anormal (funcionalmente defectuosa) factores, preservar su antigenicidad, pero que carecen de la capacidad para participar en la hemostasia.

Esto le permite distinguir entre el cese completo de la síntesis de los factores pertinentes y la formación de formas anormales.

Sin embargo, varios componentes del sistema hemostático sólo se pueden determinar inmunológicamente.

Este grupo incluye a tales estudios importantes, como la definición de los siguientes componentes:

• b-тромбоглобулина;
• a2-макроглобулина;
• proteína C y S;
• antígenos de factor VIII:C y VIII:R_memoria;
• Fibrinólisis Producto (PDF);
• neoantigenov kompleksov trombina - antitrombina III y plasmina - antiplasmina;
• un número de otras pruebas.

Por lo tanto, estudio inmunológico complementar significativamente la evaluación funcional de los diferentes componentes del sistema de la hemostasia.

Las pruebas de diagnóstico, basado en el uso de drogas como reactivos de venenos de serpiente

Desde hace tiempo se ha establecido, que muchos venenos de serpiente contienen enzimas proteolíticas altamente activos, causando coagulación de la sangre y el impacto en los diferentes eslabones de la cascada de la coagulación. En consecuencia, venenos de serpiente y aislado de coagulasa ellos ampliamente utilizados para la detección de trastornos hemostáticos, La determinación cuantitativa de los factores de coagulación, detección y cuantificación de complejos de monómero de fibrina soluble (RFMK) y un número de otros estudios.

Las muestras de veneno de serpiente es a menudo mucho más fácil y hacer un diagnóstico más oportuno de trastornos hemostáticos.

La tabla muestra los datos sobre el mecanismo de acción de los venenos en el uso de diagnóstico de coagulación de la sangre y las oportunidades de cada.

Estas capacidades se expanden aún más el uso simultáneo de varios venenos y pruebas de coagulación común simples. Así, por ejemplo,, el uso simultáneo de las pruebas de coagulación con efa veneno de víbora, y hace que sea fácil para diferenciar entre la deficiencia de factor VII, HV y II (en la siguiente tabla), y con una corrección adicional del plasma normal filtrada (factor de potencia V y II) -defitsit Factor X y V.

Determinación de los anticoagulantes fisiológicos básicos

El más importante es la determinación de la actividad de los principales anticoagulantes fisiológicos - antitrombina III, una disminución que puede determinarse genéticamente (Trombofilia primaria) o secundaria debido al consumo intensivo (DIC, Trombosis masiva) o acelerado metabolismo (tratamiento con heparina, L-asparaginasa, anticonceptivos sintéticos) y el bloqueo de complejos inmunes, paraproteinami, fibronectina, proteínas de fase aguda.

En cualquier caso, la reducción en la actividad de la antitrombina III por debajo de 60-65 % Es compatible con coagulación intravascular, Se está haciendo efecto anticoagulante de la heparina menos pronunciada. Sin embargo, muy a menudo entre el nivel de antitrombina III y disminución de la sensibilidad a la heparina ninguna ley de cumplimiento.

Por lo general, es un debilitamiento de la acción anticoagulante de la heparina sustancialmente predomina sobre el grado de disminución en la actividad de la antitrombina III. Probadas, que los déficits en diversas formas de heparina su afinidad antitrombina III pueden variar en diferentes grados. Además, diferentes fracciones de heparina, la relación de los cuales en medicamentos muy cambiante, también tienen una afinidad diferente por la antitrombina III. Por lo tanto, prácticamente, es importante para investigar tanto la actividad de la antitrombina III real, y su capacidad para girar bajo la influencia de rápida acción anticoagulante heparina.

La actividad anticoagulante de la antitrombina III

La actividad anticoagulante de la antitrombina III Está determinada por la capacidad del plasma de prueba (divorciado - El método o Copley Winterstein desnaturalización térmica desfibrinada a una temperatura 56 ° C - métodos Loligera, Abildgaarda et al.) inactivar durante un determinado período de la entrada de la trombina fuera. La actividad de la trombina residual en un plasma se puede determinar por su actividad de coagulación (de fibrinogene, sulfato de bario plasma adsorbido) o mediante escisión de un sustrato cromogénico, sensible a la trombina o Factor Xa (como antitrombina III inactiva este factor).

Heparina-kofaktornaya aktivnosti

La actividad del cofactor de heparina contenida en antitrombina III plasma período más largo determinado por una prueba de tolerancia del plasma a la heparina, que puede ser considerado como indicativo, porque da una amplia dispersión de los valores normales y reproducirse lo suficientemente.

Mucho más precisa pruebas izvodimy JUEGO, que investigó el efecto de diferentes concentraciones de heparina sobre la trombina de plasma estudio de tiempos, que contiene una pequeña cantidad de plaquetas. La comparación se lleva a cabo con alargamiento de tiempo de trombina de control de plasma normal, a las que se añaden las mismas muestras de heparina.

Así, se añaden-trombina heparina ensayo para estudiar el plasma sanguíneo a la cantidad de heparina, que prolongar el control de trombina tiempo con 15 de 32 a 35 con (baja concentración) y hasta 95-110 (alta concentración de heparina). A partir de estos datos, el índice de actividad se calcula antitrombinas plasma (AAP) y plasma anticoagulante reserva (CBA).

También es ampliamente utilizado técnicas similares para estimar el grado de inactivación de la trombina en las pruebas de coagulación, y los sustratos cromogénicos.

La detección inmunológica del antígeno de la antitrombina III

La detección inmunológica del antígeno de la antitrombina III Se le permite diferenciar entre los diferentes tipos de trombofilia:

• con la síntesis inadecuada de la antitrombina III (reducción de los niveles del marcador antigénico actividad reducen adecuadamente);
• con la síntesis conservado de anormales y funcionalmente defectuosos sus formas (el nivel de marcador antigénico es mucho mayor, la actividad de).

Las proteínas C y S, тромбомодулин и un₂-macroglobulina determinado por métodos inmunoenzimáticos.