El diagnóstico de la infertilidad causada inmunológicamente

Durante una vida larga casado sin el uso de anticonceptivos, y en presencia de la micro-región de las membranas mucosas de los órganos genitales puede ocurrir gradualmente detectar antígenos de inmunización de los espermatozoides. El examen físico de los cónyuges, que consiste en un matrimonio estéril, no se puede determinar la causa de la infertilidad en las 10-15 % casos. Es en este grupo de cónyuges infértiles cuando se aplican métodos especiales de investigación canal cervical secreto, anticuerpos plasmáticos de semen y esperma suero a menudo se detectan (ASAT), Utiliza las pruebas cualitativas y cuantitativas de investigación inmunológica.

Prueba Postkoytalnыy (FCT)

Prueba Postkoytalnыy (FCT) Se refiere a inmunoensayo cualitativo. Un resultado negativo indica la ausencia de espermatozoides en el secreto canal cervical, pero no se puede identificar la causa de su ausencia.

Método. Por el número de espermatozoides móviles en el secreto canal cervical, obtenido después del coito, establecer el alcance de violaciónes de su capacidad de penetración con infertilidad o inmunidad a ellos moco del canal cervical.

FCT es necesario llevar a cabo las siguientes condiciones: El estudio debe llevarse a cabo en el período de la ovulación, que reveló colpocytologic u otro método, después cónyuges abstinencia previos dentro de 2-3 días.

La metodología del. Después de que el coito usual para una mujer 30 minutos deben mentir sobre su espalda, doblando las rodillas. Las duchas vaginales y la limpieza de lo prohibido, Basta compresa sanitaria, que se elimina durante la captura para el estudio de moco del canal cervical. Después de 2-4 horas, permitida y tras 6-10 horas (tiempo, transcurrido antes del estudio, se indica en el análisis) después de cérvix coito expuesto usando un espejo Cuzco y el moco endocervical aspiración o una jeringa de tuberculina (sin aguja), una pipeta con una pera de goma, o catéter de polietileno.

Al lavar el instrumento no debe utilizarse desinfectantes, ya que afectan a la motilidad del esperma. Una gota de la mucosa resultante del canal cervical se transfiere a un portaobjetos de vidrio calentado, cubreobjetos recubierto, Territorio lubricado con parafina líquida a la fuga. Formulación mikroskopiruyut inmediatamente (ocular 7X, Objetivo de 40X), determinar el número y la naturaleza de la motilidad del esperma. El fármaco puede ser detectada con espermatozoides activos motilidad progresiva, movimiento oscilante (el fenómeno de la oscilación) y fijo.

Aceptan proporcionan cinco tipos de conclusiones FCT.

• Excelente (normas pertinentes): en cinco campos de visión de hasta 15-20 con espermatozoides activos movilidad progresiva y más. Los espermatozoides con el fenómeno de oscilación es menor que 25 %.
• Satisfactorio: en cinco campos de visión de hasta 10 espermatozoides activos movilidad progresiva y menos 25 % espermatozoides con el fenómeno de oscilación.
• Pobre: Menos 5 espermatozoides en cinco campos de visión.
• Menos: ausencia de espermatozoides.
• Dudoso: en cinco campos de visión más 5 espermatozoides activos inmóviles y mucho más 25 % el fenómeno de la oscilación.

Cuando el quinto tipo de FCT menudo observado incompatibilidad inmunológica entre los cónyuges, por lo tanto, necesario determinar la ACAT. Identificar ACAT endocervical secreto, plasma, semen o suero sanguíneo y mostrarlos (aglutinación o inmovilizado) Se requiere el nombramiento de inmunoensayos cuantitativos.

Un PBC negativo Los estudios comienzan con una definición de penetrar (penetración) la capacidad de los espermatozoides a través de prueba de penetración (Viernes) y la susceptibilidad a la secreción de esperma del canal cervical usando un contacto de prueba de los espermatozoides y el moco cervical (TKSTSS).

Prueba Penetracionnyj (TP)

La longitud capilar fina 10 Ver escrito durante la ovulación el moco del canal cervical. Un extremo abierto del capilar se cierra arcilla, y la segunda se coloca en un tubo de ensayo con una prueba de eyaculado fresco (no más 3 horas después de la eyaculación). Con arcilla en el capilar está unido a la posición vertical del tubo. La muestra se incuba en un termostato a una temperatura 37 ° C. 1 no. Sobre la calidad del eyaculado se juzga por la profundidad de penetración de los espermatozoides en el moco del canal cervical. Hay tres tipos de gases de efecto invernadero.

• Afirmativa - La profundidad de penetración (la mayor distancia en centímetros, viajado al menos espermatozoides sola) arriba 5 cm; el número de espermatozoides en el punto de máxima penetración más 5 a la vista, y el número de espermatozoides móviles en el tercio superior del capilar es mayor que 50 %.
• Dudoso - Una profundidad de penetración hasta 5 Ver menos conteo de esperma 5, su movilidad en el tercio superior de los tramos capilares 50%.
• Menos - La profundidad de penetración de los alcances de esperma 1 cm.

La capacidad de los espermatozoides a la penetración Depende de la fase del ciclo menstrual. Ella comienza a emerger desde el noveno día del ciclo menstrual,, activando gradualmente, alcanza su máxima expresión en el período de la ovulación, celebrada en este nivel durante dos días, y luego disminuye gradualmente.

Semen de contacto de prueba y el moco cervical (TKSTSS)

En la diapositiva se coloca una pequeña gota de moco del canal cervical, tomado de las mujeres durante la ovulación, y un número de la misma caída de tamaño de eyaculado. Ambos gotas están cubiertos con una cubierta de vidrio, que se presiona ligeramente hacia abajo para, unido a una caída. El fármaco se coloca en una cámara húmeda (Placa de Petri con algodón humedecido) y se incubaron en un termostato a una temperatura 37 ° C. 1 no.

En estas condiciones, el esperma normal de penetrar el secreto del canal cervical normal, como puede verse bajo el microscopio a una ampliación de 200X. Para tener en cuenta la reacción cerca del límite entre dos medios cuenta el número de penetrar el secreto de los espermatozoides canal cervical en dos campos adyacentes de vista.

Con excelente TKSTSS en dos campos de visión revela más 25 espermatozoides móviles activamente en el fenómeno de oscilación menos 25 %. Si TKSTSS satisfactoria en dos campos de visión reveló más 15 esperma activamente móviles, TKSTSS en baja - a menos de 15. Un TKSTSS penetración ausente negativo, Si cuestionable - un fenómeno de oscilación excede 25 %.

En esta prueba, como en PCT, el fenómeno de la oscilación, superior 25 %, probable, Indica la presencia de la ACAT y requiere el nombramiento de inmunoensayos cuantitativos.

El uso de semen y secreciones cervicales hombres estériles y fértiles de canal en diversas cantidades a utilizar TKSTSS identificar marido infértil.

• Ejemplo 1. Tomado de un canal secreto de cuello uterino en las mujeres parejas infértiles y hombres sanos eyaculado de control. Excelente TKSTSS indica una capacidad débil penetración de los espermatozoides de su marido, y la susceptibilidad de la secreción normal del canal cervical.
• Ejemplo 2. Tomado secreto completo del canal mujer sana cervical y su eyaculación esposo de parejas infértiles. Inadecuado TKSTSS indica una débil penetración del esperma.
• Ejemplo 3. Mujeres endocervicales parejas infértiles secretas adoptadas y hombres sanos eyaculado de control. Mala TKSTSS indica inferioridad canal cervical secreto, que obviamente no penetran espermatozoides normales.

Pruebas inmunológicas cuantitativas

Mikroagglyutinatsionny prueba Friberg

Mikroagglyutinatsionny prueba Friberg (TF) suficientemente sensible y está disponible para los laboratorios de diagnóstico clínico. El uso de TF puede determinar la presencia de ACAT y título de aglutinación en varios materiales (eyaculación de plasma, extractos de moco del canal cervical y en el suero de ambos cónyuges).

Reactivos:

1. Solución salina tamponada con fosfato (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Aceite Vazelinovoe.

Equipos: microscopio, jeringa de tuberculina, mikroagglyutinatsionnye pipeta 1 ml, capacidad micropipeta 0,1 ml.

Método. Suero de ensayo de sangre se inactiva por incubación en una incubadora a 56 ° C. 30 m. Eyacular, obtenido por masturbación, inmediatamente diluida para que el FSB, la concentración de esperma fue 40 millón. en 1 ml.

Debido a que el material (eyaculación de plasma, extraer el secreto del canal cervical o suero) se prepara una serie de diluciones 1:4 a 1:128 utilizando como líquido para FSB dilución. En pozos con mikroagglyutinatsionnyh aceite de parafina Planchettes jeringa de tuberculina con una aguja se introduce (bajo aceite vazelinovoe) Pequeñas gotas de cada dilución del material de prueba. Después de cada muestra se lava cuatro veces la jeringa. En cada dilución se añade a la 5 veces más pequeña gota de eyaculado, y por 4 h a temperatura ambiente detectada aglutina. Última reproducción, mediante el cual bajo un microscopio con una ampliación de 100X detectado 3 aglutinan bajo revisión y más, título de aglutinación corresponde ACAT.

Prueba Spermoimmobilizuyuschy Izodzhima (SIT).

ACAT título del suero de inmovilización, plasma o semen extracto de canal cervical secreto se establece por el número de espermatozoides móviles en la presencia de antígenos (esperma).

Componentes.

1. Eyacular, que se produce y preparada de manera similar, para TF utilizando FSB; motilidad exceda 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya suero de conejillos de indias.

3. Suero humano inmune (CISH), dando en presencia de complemento a través 1 h de incubación inmovilización 90 % esperma.

4. Suero humano normal (NCHS), inactivado por calentamiento a una temperatura 56 ° C. 30 m.

5. Prueba de suero inactivado, plasma y el semen extraen canal cervical secreto.

Método. Para evaluar la actividad del complemento inmovilizar el primero tubo se introduce 0,5 ml de solución de cloruro de sodio isotónica, para determinar los cambios en la motilidad de esperma sin ASAT el tubo segunda prueba - 0,5 ml NHS, control de inmovilización tercer tubo - 0,5 ml de CISH y determinar la ACAT inmovilizar el cuarto tubo - 0,5 ml de suero, o plasma del eyaculado, extracto o secreción endocervical.

A continuación, cada tubo se introduce por 0,1 ml complemento. Se añade la última cosa a todos los tubos 0,05 ml suspensión de esperma en una concentración 40 millón. en 1 ml. Trípode tubos se colocaron en una incubadora a una temperatura 37 ° C 1 no. Los tubos se sacaron de la estufa y cuidadosamente sacudido para reflejar esperma aglutinado reiterada.

Para evaluar los resultados bajo microscopio de alta magnificación (400X) calculó el porcentaje de espermatozoides móviles en una gota del tubo de ensayo, depositado sobre un portaobjetos de vidrio y se cubre con una cubierta. Del mismo modo, se establece el porcentaje de espermatozoides móviles en las gotitas de los tubos de ensayo con el NHS y el CISH. El resultado de la reacción en cuenta por la fórmula

SIT = K / A

donde K - el número de espermatozoides móviles en el control con el CISH y el NHS;

Acerca de - el número de espermatozoides móviles en un tubo de ensayo (prueba de suero, o plasma del eyaculado, o el secreto del canal cervical).

Con SIT promedio<2 la prueba es negativa (número de células de espermatozoides móviles en el control y en los tubos de ensayo de aproximadamente la misma), Si el índice CTI>2 - La prueba es positiva, t. es. en el material de (suero, plasma o semen extraen canal cervical secreto) se inmovilizan ACAT.

• Ejemplo 1. Control de tierra a CISH - 10 % espermatozoides móviles. El segundo control con el NHS - 80% espermatozoides móviles. Los dos controles juntos - 90 % espermatozoides móviles. En el tubo de ensayo - 80 % espermatozoides móviles.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

La prueba es negativa, inmovilizada ausente ACAT.

• Ejemplo 2. En el tubo de ensayo - 40 % espermatozoides móviles, Sin embargo, en el control, en el Ejemplo 1.

KN = 90/40 = 2,2

La prueba positiva. Hay anticuerpo inmovilizado (ASAT), a través del cual el esperma de motilidad reducida significativamente.