Diagnose von immunologisch verursacht Unfruchtbarkeit

Während einer langen verheiratet Leben ohne die Verwendung von Verhütungsmitteln, und in Gegenwart von Mikro in Schleimhäute des Genital allmählich auftreten können beschmutzen Immunisierungsantigene der Spermatozoen. Die körperliche Untersuchung der Ehegatten, bestehend in einer unfruchtbaren Ehe, können die Ursache für Unfruchtbarkeit bei 10-15 nicht bestimmen % Fälle. Es ist in dieser Gruppe von unfruchtbaren Ehepartner bei der Anwendung von speziellen Untersuchungsmethoden geheim Zervikalkanal, Samenplasma und Serum Sperma-Antikörper sind häufig erkannt (ASAT), Nutzt quantitative und qualitative Tests der immunologischen Forschung.

Postcoital Test (FCT)

Postcoital Test (FCT) Er bezieht sich auf qualitative Immunoassay. Ein negatives Ergebnis zeigt die Abwesenheit von Sperma in den Zervikalkanal geheimen, aber Sie können die Ursache für ihre Abwesenheit nicht identifizieren.

Verfahren. Durch die Anzahl der beweglichen Spermien in den Gebärmutterhalskanal Geheimnis, nach dem Koitus erhalten, gründen das Ausmaß der Verletzungen ihrer Durchschlagskraft in Unfruchtbarkeit oder Immunität zu ihnen Schleim des Zervikalkanals.

FCT ist notwendig, die folgenden Bedingungen durchzuführen: Die Studie soll in der Zeit des Eisprungs durchgeführt werden, die colpocytologic oder andere Verfahren offenbart, nach vorheriger Abstinenz Ehegatten in 2-3 Tagen.

Die Methodik der. Nach der üblichen Koitus für eine Frau 30 Minuten sollte auf dem Rücken liegen,, Biegen Sie Ihre Knie. Spülungen und Reinigungs die verboten, brauchen nur Damenbinde, die bei der Erfassung für die Untersuchung von Schleim des Cervikalkanals entfernt wird. Nach 2-4 Stunden, zulässig und nach 6-10 Stunden (Zeit, vor der Studie verstrichene, in der Analyse angegeben) nach dem Geschlechtsverkehr Gebärmutterhals mit einem Spiegel Cuzco und endozervikale Schleim abgesaugt oder Tuberkulinspritze ausgesetzt (ohne Nadel), eine Pipette mit einem Gummiball, oder Polyethylenkatheter.

Beim Waschen Sie das Gerät nicht Desinfektionsmittel verwendet werden,, wie sie die Beweglichkeit der Spermien beeinflussen. Ein Tropfen der erhaltenen Schleim des Gebärmutterhalskanal wird auf eine erwärmte Glasobjektträger übertragen, beschichtete Deckglas, Territory mit flüssigem Paraffin geschmiert zu lecken. Formulierung sofort mikroskopiruyut (Okular 7X, 40X-Objektiv), Bestimmen der Anzahl und der Art der Beweglichkeit der Spermien. Das Medikament kann mit aktiven Spermien progressive Motilität nachgewiesen werden, oszillierende Bewegung (das Phänomen der Schaukel) und Fest.

Akzeptierte bieten fünf Arten von Schlussfolgerungen FCT.

• Groß (der entsprechende): in fünf Blickfelder bis zu 15-20 mit aktiver Spermien progressive Mobilität und mehr. Sperma mit dem Phänomen der Schwingung kleiner ist als 25 %.
• Befriedigend: in fünf Blickfeldern zu 10 aktive Spermien progressive Mobilität und weniger 25 % Spermien mit dem Phänomen der Schaukel.
• Schlecht: Weniger 5 Spermatozoen in fünf Sichtfeldern.
• Negativ: Fehlen von Spermien.
• Zweifelhaft: in fünf Bereichen mehr anzeigen 5 aktiv-beweglichen Spermien und mehr 25 % das Phänomen der Schaukel.

Wenn der fünfte Art von FCT oft Immun Unvereinbarkeit Ehegatten beobachtet, Daher muss die ACAT bestimmen. Um ACAT Geheimnis endocervical identifizieren, Plasma, Sperma oder Blutserum und zeigt sie (Agglutination oder immobilisiert) Es erfordert die Ernennung von quantitativen Immunoassays.

Eine negative PBC Studien beginnen mit einer Definition des durchdringenden (Penetration) die Fähigkeit der Spermien über penetrative Test (Fr.) und die Anfälligkeit für Spermien Sekretion des Gebärmutterhalskanal mit Hilfe eines Kontakttest von Sperma und Zervixschleim (TKSTSS).

Ein Penetrationstest (TP)

Die dünne Kapillare Länge 10 finden während des Eisprungs eingegeben Schleim des Zervikalkanals. Einem offenen Ende der Kapillare Ton schließt, und in einem zweiten Fläschchen mit dem Test-Frisch Ejakulat platziert (nicht mehr 3 Stunden nach der Ejakulation). Mit Ton Kapillare senkrecht zur Rohr befestigt. Die Probe wird in einen Thermostaten bei einer Temperatur inkubiert, 37 ° C 1 Nein. Auf die Qualität des Ejakulats wird durch die Eindringtiefe der Spermien im Schleim der Gebärmutterhalskanal beurteilt. Es gibt drei Arten von GHG.

• Positiv - Die Eindringtiefe (der größte Abstand in Zentimetern, mindestens einzelnes Spermium gereist) über 5 cm; die Anzahl der Spermien in dem Punkt der maximalen Penetration noch 5 in Sicht, und die Anzahl der beweglichen Spermien im oberen Drittel der Kapillare größer ist als 50 %.
• Zweifelhaft - Einer Eindringtiefe bis zu 5 Weniger Spermienzahl 5, ihre Beweglichkeit im oberen Drittel der Kapillare erreicht 50%.
• Negativ - Die Eindringtiefe des Spermienlauf 1 cm.

Die Fähigkeit von Sperma gegen Penetration Es hängt von der Phase des Menstruationszyklus. Sie fängt an, aus dem 9. Tag des Menstruationszyklus entstehen,, nach und nach Aktivierung, Er erreicht seinen höchsten Ausdruck in der Zeit des Eisprungs, auf dieser Ebene für zwei Tage, und dann allmählich abnimmt,.

Test Kontakt Samen und Zervixschleim (TKSTSS)

Auf der Folie wird einen kleinen Tropfen von Schleim aus dem Gebärmutterhalskanal, von Frauen während des Eisprungs genommen, und eine Anzahl von der gleichen Größe Tropfen Ejakulat. Beide Tropfen mit einem Deckglas abgedeckt, die leicht nach unten zu drücken, verbunden fallen. Das Arzneimittel wird in einer feuchten Kammer platziert (Petrischale mit angefeuchtetem Wattestäbchen) und in einem Thermostat bei einer Temperatur inkubiert, 37 ° C 1 Nein.

Unter diesen Bedingungen normalen Spermiendringen das Geheimnis des normalen Zervikalkanal, wie unter einem Mikroskop bei einer Vergrßerung 200X ersichtlich. Für die Reaktion in der Nähe der Grenze zwischen zwei Medien entfallen zählt die Zahl der durchdringenden, das Geheimnis der Zervikalkanal Spermien in zwei benachbarten Sichtfeldern.

Mit ausgezeichneten TKSTSS in beiden Bereichen zeigt mehr anzeigen 25 aktiv beweglichen Spermien in das Phänomen der Schaukel weniger 25 %. Wenn zufriedenstellend TKSTSS in zwei Sichtfelder ergab mehr 15 aktiv beweglichen Spermien, in armen TKSTSS - weniger 15. Ein negativer abwesend Eindringen TKSTSS, wenn fraglich - ein Phänomen der Schwingung überschreitet 25 %.

In diesem Test, wie in der PCT, das Phänomen der Schaukel, mehr als 25 %, wahrscheinlich, Es zeigt die Anwesenheit von ACAT und erfordert die Ernennung von quantitativen Immunoassays.

Verwenden von Sperma und Zervikalsekret Kanal unfruchtbare und fruchtbare Männer in verschiedenen Mengen zur Verwendung TKSTSS identifizieren unfruchtbaren Mann.

• Beispiel 1. Taken einen geheimen Kanal des Gebärmutterhalses bei Frauen unfruchtbare Paare und Kontrolle Ejakulat gesunde Männer. Ausgezeichnete TKSTSS zeigt eine schwache Penetrationsfähigkeit der Spermien ihres Mannes, und die Anfälligkeit der normalen Sekretion des Gebärmutterhalskanal.
• Beispiel 2. Taken voller Geheimnis der Zervikalkanal gesunde Frau und ihr Ehemann Ejakulat von unfruchtbaren Paaren. Bad TKSTSS zeigt eine schwache Eindringen von Spermien.
• Beispiel 3. Taken geheimen endocervical Frauen unfruchtbare Paare und Kontrolle Ejakulat gesunde Männer. Bad TKSTSS zeigt Minderwertigkeits geheimen Zervikalkanal, die offensichtlich nicht normalen Spermien durchdringen.

Quantitative immunologische Tests

Mikroagglyutinatsionny Test Friberg

Mikroagglyutinatsionny Test Friberg (TF) ausreichend empfindlich und ist für klinische diagnostische Laboratorien verfügbar. Verwendung TF kann die Anwesenheit von ACAT und Agglutinationstiter in verschiedenen Materialien zu bestimmen (Plasma Ejakulat, Extrakte von Schleim des Gebärmutterhalskanal und im Serum der Ehegatten).

Reagenzien:

1. Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe Öl.

Ausrüstung: Mikroskop, Tuberkulinspritze, mikroagglyutinatsionnye Pipette 1 ml, Mikropipette Kapazität 0,1 ml.

Verfahren. Bluttestserum wird durch Inkubation in einem Inkubator bei inaktiviert 56 ° C 30 m. Ejakulieren, durch Masturbation gewonnen, sofort, so dass der FSB verdünnt, die Konzentration der Spermien 40 Million. in 1 ml.

Aufgrund des Materials (Plasma Ejakulat, extrahieren, das Geheimnis der Zervikalkanal oder Serum) bereitet eine Reihe von Verdünnungen 1:4 bis 1:128 Verwendung als Flüssigkeit zur Verdünnung FSB. In Vertiefungen mit Paraffinöl mikroagglyutinatsionnyh Planchettes Tuberkulin-Spritze mit einer Nadel eingeführt (unter vazelinovoe Öl) Kleine Tropfen jeder Verdünnung des Testmaterials. Nachdem jede Probe wird viermal die Spritze gewaschen. In jeder Verdünnung wird, um den Mehr 5 mal kleiner Tropfen Ejakulat, und 4 h bei Raumtemperatur nachgewiesen Agglutinate. Letzte Zucht, wobei unter einem Mikroskop bei 100-facher Vergrößerung nachgewiesen 3 agglutinate Berichts und mehr, Agglutinationstiter entspricht ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy Test Izodzhima (SIT).

Titer Immobilisierung ACAT Serum, Plasma oder Samenextrakt geheimen Gebärmutterhalskanal wird durch die Anzahl der beweglichen Spermien in Gegenwart von Antigenen eingestellt (Sperma).

Components.

1. Ejakulieren, der erzeugt wird, und in ähnlicher Weise hergestellt, für TF mit FSB; Motilität überschreiten 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya Serum von Meerschweinchen.

3. Immune Humanserum (Ichs), was in Gegenwart von Komplement durch 1 h Inkubation Immobilisierung 90 % Sperma.

4. Normales Humanserum (NCHS), durch Erhitzen bei einer Temperatur inaktiviert 56 ° C 30 m.

5. Test inaktivierten Serum, Plasma und Samen zu extrahieren geheimen Zervikalkanal.

Verfahren. Um zu bewerten, Komplementaktivität Immobilisierung des ersten Rohres eingeführt 0,5 ml isotonischer Natriumchloridlösung, die Änderungen der Spermienmotilität ohne ASAT der 2. Reagenzglas ermitteln - 0,5 ml NHS, Steuer Immobilisierung dritte Rohr - 0,5 ml ICHS und die ACAT bestimmen Immobilisierung der 4. Röhre - 0,5 ml Serum, oder Plasma des Ejakulats, Extrakt oder Sekretion endocervical.

Dann wird jedes Röhrchen eingeführt durch 0,1 ml Komplement. Das letzte, was zu allen Röhrchen hinzugefügt 0,05 ml Spermiensuspension in einer Konzentration 40 Million. in 1 ml. Stativrohre wurden in einem Inkubator bei einer Temperatur platziert 37 ° C 1 Nein. Die Rohre aus dem Ofen entnommen und vorsichtig geschüttelt, um abgesetzte agglutinierten Spermien widerspiegeln.

Um die Ergebnisse unter hoher Vergrößerung Mikroskop bewerten (400X) in einem Tropfen Reagenzglas berechnet den Prozentsatz der beweglichen Spermien, auf einem Glasträger aufgebracht und mit einem Deckel abgedeckt. Ebenso den Prozentsatz der beweglichen Spermien in den Tröpfchen der Teströhrchen mit dem NHS und ICHS setzt es. Das Ergebnis der Reaktion berücksichtigt durch die Formel

SIT = K / A

wobei K - die Zahl der beweglichen Spermien in der Steuerung mit dem Internationalen Komitees und der NHS;

Über - die Anzahl der beweglichen Spermien in einem Reagenzglas (Serumtest, oder Plasma des Ejakulats, oder das Geheimnis des Gebärmutterhalskanal).

Mit einem durchschnittlichen SIT<2 der Test negativ (Anzahl der beweglichen Spermien in der Steuerung und in der Teströhrchen von etwa gleich), Wenn der CTI>2 - Der Test ist positiv, t. es ist. im Material (Serum, Plasma oder Samen zu extrahieren geheimen Zervikalkanal) immobilisiert ACAT.

• Beispiel 1. Bodenkontrolle zu ICHS - 10 % beweglichen Spermien. Die zweite Steuer mit NHS - 80% beweglichen Spermien. Die beiden Kontrollen zusammen - 90 % beweglichen Spermien. Im Reagenzglas - 80 % beweglichen Spermien.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Der Test ist negativ, immobilisierten ACAT abwesend.

• Beispiel 2. Im Reagenzglas - 40 % beweglichen Spermien, Jedoch wird in der Steuerung, Beispiel 1.

KN = 90/40 = 2,2

Die positiven Test. Es immobilisierten Antikörper (ASAT), durch die Beweglichkeit der Spermien deutlich reduziert.