Nasledstvennaya gemoliticheskaya anæmi, på grund af aktiviteten af ​​pyruvatkinase mangel på røde blodlegemer

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anæmi, Relaterede erythrocyt pyruvatkinase mangel - en forholdsvis sjælden form for hæmolytisk anæmi, som er nedarvet i en autosomal recessiv måde, Det giver kliniske manifestationer i homozygote, provenu med tegn på intracellulær hæmolyse, makrocytose af erytrocytter, lavt indhold af kalium. Der er mere end 200 tilfælde af homozygote bærere af underskud piruvatkinaznoy aktivitet.

Patogenese

Pyruvatkinase er et af enzymerne, indgåelse glykolyse. Dette link glykolyse og ATP dannet nikotinamiddinukleotid. Størstedelen af ​​patienter med mangel på pyruvat kinase aktivitet er reduceret i indholdet af de røde blodlegemer i disse to metabolitter, I nogle tilfælde er indholdet af ATP er normal, men forstyrret stabiliteten af ​​ATP under inkubation. Normale niveauer af ATP findes på betydelig reticulocytose. Dette skyldes tilstedeværelsen af ​​reticulocytter og muligheden for mitokondrie ATP ikke kun gennem glycolysen, men også på grund af den oxidative phosphorylering.

Konsekvensen af ​​pyruvatkinase-mangel Det er også ophobning af produkterne fra glycolyse, dannet på tidligere stadier - fosfofenolpiruvata, 3-phosphoglycerat, og især 2,3-diphosphoglycerat. Indhold piruvatanlaktata fald i røde blodlegemer.

Manglen på ATP i erytrocytter pyruvatkinase-mangel Det fører til afbrydelse af funktionen af ​​ATP-aznogo pumpe røde blodlegemer og til tab af kaliumioner, hvor koncentrationen af ​​natriumioner i erytrocytterne ikke-stigende. Dette forårsager et fald i indholdet af monovalente ioner i erytrocytterne, dehydrering af cellen og dens krympning. Dette fænomen kaldes dessikotsitoz. Faldet i røde blodlegemer vand komplicerer processen med iltning og oxygen frigivelse ved hæmoglobin. I denne sammenhæng, idet en betydelig ophobning vis kompenserende rolle i erytrocytter af 2,3-syre difosfoglitserinovoy.

Affiniteten af ​​hæmoglobin til oxygen reduceres ved dets interaktion med 2,3-diphosphoglycerat. Derfor, ved højere koncentrationer for 2,3-diphosphoglycerat returnerer ilt til væv lettes.

Kliniske manifestationer af aktiviteten af ​​pyruvatkinase mangel

Kliniske manifestationer af mangel pyruvat kinase aktivitet afhængig af graden af ​​hæmolyse. I nogle tilfælde er forøget hæmolyse manifesteret ved fødslen og er ledsaget af forekomsten af ​​alvorlige hæmolytisk krise, forårsager behovet for blodtransfusioner for at opretholde hæmoglobin i de sub-normal niveauer. I andre tilfælde kan sygdommen opstå næsten symptomfri med de første tegn på øget hæmolyse (subikterichnost sclera og huden) alderen 17-30.

Generelt; sammenlignet med microspherocytosis, pyruvatkinase mangel har en mere alvorlig.

Næsten alle patienter med håndgribelig milt. Den lille stigning i sine oplyst nogle anomalier heterozygote bærere, selv om de har anæmi, normalt, mangler. En del patienter mulig splenomegali. En betydelig stigning i leveren sjældent fundet. I isolerede patienter med bensår identificeret.

Laboratorie indikatorer for aktivitet pyruvatkinase mangel

Størstedelen af ​​patienter med mangel på pyruvat kinase aktivitet observeret moderat anæmi (4,34- 6,21 mmol / l, eller 70-100 g / l), Dog kan under kriser hæmoglobin reduceres til 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Indhold eritrotsitov- 2,5-3,0 T 1 l. Hæmolytisk krise kan være forårsaget af infektion. Der er tilfælde af hæmolyse gevinst under menstruation.

Røde blodlegemer fra patienter med pyruvatkinase-mangel kendetegnet ved makrocytose med normohromiey, svag anisocytose og poikilocystose. Der var en rimelig polychromatophilia. Nogle gange fundet mishenevidnye røde blodlegemer og røde blodlegemer med flosset rand eller i form af Mulberry, ofte identificeret basofile erythrocyt punktatsiya, Jolly blodlegemer. Nogle patienter i det perifere blod afslørede en signifikant antal erythrokaryocytes, under krisen, kan den øges op til 60-70 %. ESR, hvide blodlegemer, leukogram, blodpladetal inden for normalområdet. Som med andre former for hæmolytisk anæmi, i knoglemarven afslørede en skarp irritation rødt kim hæmatopoiese.

Niveauet af bilirubin, normalt, steget som følge af indirekte.

Fri plasma hæmoglobin normal, men det kan reduceres niveauer af haptoglobin. Hæmosiderin i urinen er fraværende. Indholdet af føtalt hæmoglobin og hæmoglobin A₂ inden for normalområdet.

Osmotisk modstand af erytrocytter pyruvatkinase mangel i de fleste tilfælde normale, undertiden reduceret efter dag inkubation. Autogemoliz, normalt, opgraderet til varierende grader. Der er tilfælde af pyruvatkinase mangel med normal autogemolizom. I den første rapporterede tilfælde af pyruvatkinase-mangel er registreret type II autogemoliza, korrigerer tilsætning af ATP, og ikke forbedre eller svagt korrigere tilsætning af glucose. Efterfølgende har mange tilfælde blevet beskrevet med enzymmangel type I autogemoliza eller ingen. Derfor anbefales det ikke at anvende den metode autogemoliza til differentialdiagnose af hæmolytiske anæmier. Levetiden for røde blodlegemer med mangel på pyruvat kinase aktivitet er altid forkortes.

Typen arv pyruvat kinaseaktivitet autosomal recessiv. Heterozygoter praktisk sunde, Ifølge forskellige forskere, sværhedsgraden af ​​underskuddet har varieret fra 50 til 70 % normer.

Diagnostisk aktivitet af pyruvatkinase-mangel

Diagnosen af ​​pyruvat kinase mangel på røde blodlegemer kan forventes at levere i tilfælde af hæmolytisk anæmi, flyder gennem årene med stigningen i milten, manglende perifert blodudstrygningspræparater tegn microspherocytosis, elliptotsitoza og stomatotsitoza.

Kvalitative tests til bestemmelse af aktiviteten af ​​pyruvatkinase. Til dette formål er fremgangsmåden meget udbredt fluorescerende plet, baseret på, at der i løbet af reaktionen, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oxideret og fluorescensen forsvinder.

Aktiviteten af ​​pyruvatkinase hos raske personer varierede fra 4,0 til 7,7 mmol (min / 1010 erythrocytter) eller 4,0 til 7,7 Power. Størstedelen af ​​homozygot enzym sygdomsaktivitet mindre 1 Power. Imidlertid kan der være tilfælde svag nedgang i aktiviteten af ​​enzymet. Diagnose af en sjælden form for hæmolytisk anæmi er meget vanskeligt, og en diagnose kan kun foretages i studiet af enzymkinetik.

Differentiel diagnose af hæmolytisk anæmi, forbundet med mangel på pyruvatkinase

Differentialdiagnosticering af hæmolytisk anæmi, forbundet med mangel på pyruvatkinase, nødvendigt at foretage andre former for arvelig hæmolytisk anæmi.

Da de fleste patienter, som mangler pyruvat kinase aktivitet i modsætning enkeltpersoner, lidelse microspherocytosis, elliptotsitozom, stomatocitozom, hæmolytisk anæmi, aircondition vogn ustabil hæmoglobin, og thalassæmi sygdom er nedarvet i en autosomal recessiv, at denne patologi kun findes i den samme generation og næsten aldrig set blandt forældre.

Når arvelig anæmi, aircondition vogn ustabil hæmoglobin, især i svær sygdom, sommetider proband er den første bærer af mutationen, og derefter sygdommen er overført til den næste generation. Derfor skal differentialdiagnose udføres med hæmoglobinopatier, aircondition vogn ustabil hæmoglobin, samt recessivt nedarvet hæmolytisk anæmi, forårsaget af en mangelfuld aktivitet af andre enzymer.

Det spiller en støttende rolle hæmoglobin stabilitet, Yego elektroforese. At udelukke andre fermentopathia undersøgt aktiviteten af ​​andre enzymer af erythrocytter, og at udelukke autoimmun hæmolytisk anæmi Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Fluorescerende metode til bestemmelse af aktiviteten ved piruvatkiiazy Beutler

Reagenser.

1. Fosfoenolpirovinogradnaya acid (tritsiklogeksilammoniynaya salt) 0,15 M opløsning af, neutraliseret til pH 7,0-8,0 0,2 M opløsning af NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M opløsning af, neutraliseret (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M opløsning af, neutraliseret (0,1 ml).
4. Magnesiumsulfat 0,08 M opløsning af (0,1 ml).
5. Phosphatpufferopløsning af kalium 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Distillirovannaya vand (0,62 ml). Blandingen kan opbevares ved - 20 ° C er ikke mere end en uge.

Metode.

Til forskning brug blod, taget med heparin eller natriumcitrat. Det centrifugeres, aspireret og forberede plasma 20 % suspension af røde blodlegemer ved tilsætning af fire volumener isotonisk natriumchloridopløsning.

Erythrocytsuspension i en mængde 0,02 ml blandes med 0,2 ml reagens og inkuberet i 30 minutter ved 37 ° C. En dråbe blev anbragt på filtrerpapir, og surfe på fluoroscope. Baseline fluorescens blev detekteret umiddelbart efter tilsætning af erythrocytter til blandingen inden inkubering. Normalt efter 30 minutters inkubation det forsvinder, og aktiviteten af ​​pyruvat kinase deficiency rester. Dette er, NADH som fluorescerer under indflydelse af UV-stråling i området, tæt på synlig, mens NAD ikke fluorescerer. Fordi den ovennævnte opløsning er ustabil og nedbrydes let, kræver overvågning. Du bør nøje adskille lag af hvide blodlegemer, eftersom aktiviteten af ​​pyruvatkinase deficiency erythrocyt enzymaktivitet i leukocytter kan være normal.