Diagnose af immunologisk forårsaget infertilitet

Under en lang levetid gift uden anvendelse af svangerskabsforebyggende midler, og i nærværelse af mikro-region af slimhinder i genitalierne kan forekomme gradvist få øje immunisering antigener af spermatozoer. Den fysiske undersøgelse af ægtefællerne, består i en gold ægteskab, kan ikke fastslå årsagen til infertilitet hos 10-15 % sager. Det er i denne gruppe af infertile ægtefæller, når de anvender særlige metoder til efterforskning hemmelighed cervikalkanalen, sæd plasma og serum sæd antistoffer ofte opdages (ASAT), Bruger kvalitative og kvantitative test af immunologisk forskning.

Postkoytalnыy test (FCT)

Postkoytalnыy test (FCT) Det henviser til kvalitativ immunoassay. Et negativt testresultat indikerer fravær af sædceller i livmoderkanalen hemmelighed, men du kan ikke finde årsagen til deres fravær.

Metode. Med antallet af motile sædceller i livmoderkanalen hemmelige, opnået efter coitus, fastslå omfanget af overtrædelser af deres gennemtrængende evne med infertilitet eller immunitet over for dem slim af livmoderkanalen.

FCT er nødvendigt at foretage følgende betingelser: Bør udføres, i den periode af ægløsning, som afslørede colpocytologic eller anden metode, efter forudgående afholdenhed ægtefæller inden for 2-3 dage.

Den metode for. Efter den sædvanlige coitus for en kvinde 30 minutter skal ligge på ryggen, bøje knæene. Udskylning og rengøring af forbudte, behøver kun hygiejnebind, som fjernes under indfangning til undersøgelse af slim i den cervikale kanal. Efter 2-4 timer, tilladte og efter 6-10 timer (tid, forløbet inden undersøgelsen, angivet i analysen) efter samleje livmoderhalsen udsat hjælp et spejl Cuzco og endocervikale slim aspireret eller tuberculinsprøjte (uden kanyle), en pipette med en gummi pære, eller polyethylenkateter.

Når du vasker instrumentet bør ikke anvendes desinfektionsmidler, da de påvirker sperm motilitet. En dråbe af den resulterende slim af cervikalkanalen overføres til en opvarmet objektglas, belagt dækglas, Område smurt med flydende paraffin at lække. Formulering straks mikroskopiruyut (okular 7X, 40X målsætning), bestemmelse af antallet og arten af ​​sperm motilitet. Lægemidlet kan påvises med aktiv sperm progressive motilitet, oscillerende bevægelse (fænomenet swing) og faste.

Accepteret giver fem typer af konklusioner FCT.

• Fremragende (relevante normer): i fem synsfelter op til 15-20 med aktiv sperm progressiv mobilitet og mere. Sperm med fænomenet svingning er mindre end 25 %.
• Tilfredsstillende: i fem synsfelter op 10 aktive sædceller progressive mobilitet og mindre 25 % sæd med fænomenet swing.
• Dårlig: mindre 5 spermatozoer i fem synsfelter.
• Minus: mangel på sædceller.
• Tvivlsom: i fem synsfelter flere 5 aktivt mobile spermatozoer og mere 25 % fænomenet swing.

Når den femte type FCT ofte observeret immun uforenelighed mellem ægtefæller, derfor nødvendigt at bestemme ACAT. For at identificere ACAT hemmelige endocervikale, plasma, sæd eller blodserum og vise dem (agglutination eller immobiliseret) Det kræver udnævnelsen af ​​kvantitative immunoassays.

En negativ PBC undersøgelser begynder med en definition af gennemtrængende (penetration) evne til sædceller via penetrerende test (Fri.) og tilbøjelighed til sæd sekretion af cervikalkanalen under anvendelse af en test i kontakt sædceller og cervikal slim (TKSTSS).

Penetracionnyj test (TP)

Den tynde Kapillarlængde 10 Se indtastet under ægløsning slim i livmoderkanalen. En åben ende af kapillarrøret lukker ler, og den anden er placeret i et reagensglas med en nystøbte ejakulat (ikke mere 3 timer efter ejakulation). Med ler i kapillarrøret er fastgjort til opretstående rør. Prøven inkuberes i en termostat ved en temperatur 37 ° C. 1 ingen. På kvaliteten af ​​ejakulatet bedømmes ud fra dybden af ​​penetration af sæd i slim i livmoderkanalen. Der er tre typer af drivhusgasser.

• Bekræftende - Indtrængningsdybden (den største afstand i centimeter, rejste mindst enkelt sædcelle) ovenfor 5 cm; antallet af sædceller i punktet med maksimal penetration mere 5 i sigte, og antallet af motile sædceller i den øverste tredjedel af kapillarrøret er større end 50 %.
• Tvivlsom - En indtrængningsdybde op til 5 Se mindre sædkvalitet 5, deres mobilitet i den øverste tredjedel af de kapillære når op 50%.
• Minus - Dybden af ​​penetration af sæd når op 1 cm.

Sædcellernes evne mod gennemtrængning Det afhænger af fase af menstruationscyklus. Hun begynder at dukke op fra den 9. dag i menstruationscyklus,, gradvist aktivering, når sin maksimale ekspression i perioden ægløsning, holdt på dette niveau i to dage, og derefter gradvist aftager.

Test kontakt sæd og cervikal slim (TKSTSS)

På slæden er sat en lille dråbe af slim fra livmoderkanalen, taget fra kvinder under ægløsning, og en række af samme størrelse dråbe ejakulat. Begge dråber er dækket med et dækglas, som er en smule trykket ned i, forbundet med en dråbe. Lægemidlet anbringes i et fugtigt kammer (Petriskål med fugtet vatpind) og inkuberet i en termostat ved en temperatur 37 ° C. 1 ingen.

Under disse betingelser normale sædceller trænge hemmeligheden af ​​den normale cervikalkanalen, som det kan ses under mikroskop ved en forstørrelse 200X. For at tage hensyn til reaktionen nær grænsen mellem to medier tæller antallet af gennemtrængende hemmeligheden cervikalkanalen sædceller i to tilstødende synsfelter.

Med fremragende TKSTSS i to synsfelter afslører mere 25 aktivt motile sædceller i fænomenet swing mindre 25 %. Hvis tilfredsstillende TKSTSS i to synsfelter afslørede mere 15 aktivt mobile spermatozoer, TKSTSS i lav - mindre end 15. En negativ fraværende penetration TKSTSS, hvis tvivlsomt - et fænomen af ​​oscillation overstiger 25 %.

I denne test, som i PCT, fænomenet swing, overstiger 25 %, sandsynligvis, Det indikerer tilstedeværelsen af ​​ACAT og kræver udnævnelsen af ​​kvantitative immunoassays.

Brug sæd og cervikale sekreter kanal ufrugtbare og fertile mænd i forskellige mængder til at bruge TKSTSS identificere ufrugtbar mand.

• Eksempel 1. Taget en hemmelig kanal af livmoderhalsen i kvinder ufrugtbare par og kontrol ejakulere raske mænd. Fremragende TKSTSS indikerer en svag penetration evne af sperm af sin mand, og følsomhed over normale sekretion af livmoderkanalen.
• Eksempel 2. Taget fuld hemmelighed cervikalkanalen sund kvinde og hendes mand ejakulere af infertile par. Bad TKSTSS indikerer en svag penetration af sæd.
• Eksempel 3. Taget hemmelige endocervikale kvinder ufrugtbare par og kontrol ejakulere raske mænd. Dårlig TKSTSS indikerer underlegenhed hemmelige cervikalkanalen, som naturligvis ikke trænge normale spermatozoer.

Kvantitative immunologiske tests

Mikroagglyutinatsionny test Friberg

Mikroagglyutinatsionny test Friberg (TF) tilstrækkeligt følsomme og er tilgængelig for kliniske diagnostiske laboratorier. Brug af TF kan bestemme tilstedeværelsen af ​​ACAT og agglutination titer i forskellige materialer (plasma ejakulere, ekstrakter af slim i den cervikale kanal og i serum hos begge ægtefæller).

Reagenser:

1. Phosphatbufret saltvand (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe olie.

Udstyr: mikroskop, tuberkulin sprøjte, mikroagglyutinatsionnye pipette 1 ml, mikropipette kapacitet 0,1 ml.

Metode. Blodprøve serum inaktiveret ved inkubation i en inkubator ved 56 ° C. 30 m. Ejakulere, opnået ved masturbation, fortyndes straks, således at FSB, koncentrationen af ​​sædceller var 40 million. i 1 ml.

På grund af materialet (plasma ejakulere, udtrække hemmelighed livmoderkanalen eller serum) forbereder en række fortyndinger 1:4 til 1:128 idet der som en væske til fortynding FSB. I brønde med paraffinolie mikroagglyutinatsionnyh planchetter tuberkulin sprøjte med en nål indføres (under vazelinovoe olie) Små dråber af hver fortynding af testmaterialet. Efter hver prøve vaskes fire gange sprøjte. I hver fortynding tilsættes til 5 gange mindre dråbe ejakulat, og 4 h ved stuetemperatur påvist agglutinater. Sidste avl, hvorved under et mikroskop ved 100X forstørrelse registreret 3 agglutinat under revision, og mere, agglutination titer svarer ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy test Izodzhima (SIT).

Titer immobiliserende ACAT serum, plasma eller sæd ekstrakt hemmelige cervikale kanal er indstillet på antallet af mobile spermatozoer i nærværelse af antigener (sæd).

Komponenter.

1. Ejakulere, som er produceret og fremstillet på lignende måde, til TF hjælp FSB; motilitet overstiger 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya serum af marsvin.

3. Immune humant serum (Ichs), giver i nærværelse af komplement via 1 h inkubation immobilisering 90 % sæd.

4. Normalt humant serum (NCHS), inaktiveret ved opvarmning ved en temperatur 56 ° C. 30 m.

5. Test inaktiveret serum, plasma og sæd udtrække hemmelige cervikalkanalen.

Metode. For at evaluere komplementaktivitet immobilisering af 1. røret indføres 0,5 ml isotonisk natriumchloridopløsning, at bestemme ændringerne i spermamotilitet uden ASAT 2nd reagensglas - 0,5 ml NHS, kontrol immobilisering tredje rør - 0,5 ml ichs og at bestemme ACAT immobilisere den 4. rør - 0,5 ml serum, eller plasma af ejakulatet, ekstrakt eller sekretion endocervikale.

Derefter hvert rør blev indført ved 0,1 ml supplement. Føjes Den sidste ting at alle rør 0,05 ml spermsuspension i en koncentration 40 million. i 1 ml. Stativ rørene blev anbragt i en inkubator ved en temperatur 37 ° C 1 ingen. Rørene fjernes fra ovnen og omrystes forsigtigt for at afspejle fast agglutinerede sæd.

For at evaluere resultaterne under stor forstørrelse mikroskop (400x) beregnet procentdelen af ​​motile sædceller i en dråbe reagensglasset, deponeret på et objektglas og dækket med et dæksel. Ligeledes er det sætter procentdelen af ​​motile sædceller i dråber af reagensglassene med NHS og ichs. Resultatet af omsætningen i betragtning af formlen

SIT = K / A

hvor K - antallet af motile sædceller i kontrollen med ichs og NHS;

Om - antallet af motile sædceller i et reagensglas (serum test, eller plasma af ejakulatet, eller hemmeligheden livmoderkanalen).

Med gennemsnitlig SIT<2 testen er negativ (antal bevægelige sædceller i kontrol og i reagensglassene af omtrent samme), Hvis indekset CTI>2 - Testen er positiv, t. Det er. i materialet (serum, plasma eller sæd udtrække hemmelige cervikalkanalen) immobiliseres ACAT.

• Eksempel 1. Ground kontrol til ichs - 10 % motile sædceller. Den anden kontrol med NHS - 80% motile sædceller. De to knapper sammen - 90 % motile sædceller. I reagensglasset - 80 % motile sædceller.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Testen er negativ, immobiliseret ACAT fraværende.

• Eksempel 2. I reagensglasset - 40 % motile sædceller, Men i kontrollen, i eksempel 1.

KN = 90/40 = 2,2

Testen positive. Der er immobiliseret antistof (ASAT), hvorigennem sperm motilitet reduceres betydeligt.