Наследственная гемолитическая анемия, causa de l'activitat de la deficiència de piruvat quinasa de les cèl·lules vermelles de la sang

Наследственная гемолитическая анемия, связанная с недостаточностью эритроцитарной пируваткиназы — сравнительно редкая форма гемолитической анемии, которая наследуется по аутосомно-рецессивному типу, дает клинические проявления у гомозиготных носителей, протекает с признаками внутриклеточного гемолиза, макроцитозом эритроцитов, пониженным содержанием в них калия. Hi ha més que 200 случаев гомозиготного носительства дефицита пируваткиназной активности.

Patogènesi

Пируваткиназа является одним из ферментов, заключающих гликолиз. В этом звене гликолиза образуются АТФ и никотинамиддинуклеотид. У большинства больных с дефицитом активности пируваткиназы снижается содержание в эритроцитах этих двух метаболитов, в некоторых случаях содержание АТФ оказывается нормальным, но нарушается стабильность АТФ при инкубации. Нормальный уровень АТФ обнаруживается при значительном ретикулоцитозе. Это связано с наличием в ретикулоцитах митохондрий и возможности получения АТФ не только за счет гликолиза, но и за счет окислительного фосфорилирования.

Следствием дефицита пируваткиназы является также накопление продуктов гликолиза, образующихся на предшествующих этапах — фосфофенолпирувата, 3-фосфоглицерата, и особенно 2,3-дифосфоглицерата. Содержание пируватанлактата в эритроцитах снижается.

Недостаток АТФ в эритроцитах при дефиците пируваткиназы приводит к нарушению функции АТФ-азного насоса эритроцитов и к потере ионов калия, при этом концентрация ионов натрия в эритроцитах не возрастает. Это обусловливает уменьшение содержания в эритроцитах одновалентных ионов, дегидратацию клетки и ее сморщивание. Такое явление называют дессикоцитоз. Уменьшение в эритроцитах количества воды затрудняет процесс оксигенации и отдачи кислорода гемоглобином. В этом отношении определенную компенсаторную роль играет значительное накопление в эритроцитах 2,3-дифосфоглицериновой кислоты.

Сродство гемоглобина к кислороду снижается при его взаимодействии с 2,3-дифосфоглицератом. Per tant, при повышении содержания в организме 2,3-дифосфоглицерата отдача кислорода тканям облегчается.

Клинические проявления дефицита активности пируваткиназы

Клинические проявления дефицита активности пируваткиназы зависят от степени гемолиза. В одних случаях повышенный гемолиз проявляется с рождения и сопровождается частыми тяжелыми гемолитическими кризами, вызывающими необходимость гемотрансфузий для поддержания гемоглобина на субнормальном уровне. В других случаях заболевание может протекать почти бессимптомно с появлением первых признаков повышенного гемолиза (субиктеричности склер и кожи) в возрасте 17—30 лет.

En general; en comparació amb microesferocitosis, deficiència de piruvat quinasa té una més severa.

Gairebé tots els pacients amb la melsa palpable. El lleuger augment en les seves descrites algunes anomalies portadors heterozigots, encara que tenen anèmia, normalment, que falta. Un nombre de pacients possible esplenomegàlia. Un augment significatiu en el fetge poques vegades es troba. En pacients aïllats amb úlceres a les cames identificats.

Indicadors de laboratori de l'activitat de la deficiència de piruvat quinasa

La majoria dels pacients amb deficiència de l'activitat de la piruvat quinasa va observar anèmia moderada (4,34- 6,21 mmol / l, o 70 a 100 g / l), No obstant això, durant la crisi de l'hemoglobina pot reduir-se a 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Eritrotsitov- contingut 2,5-3,0 t 1 l. Crisi hemolítica pot ser causada per la infecció. Hi ha casos d'augment de l'hemòlisi durant la menstruació.

Els glòbuls vermells de pacients amb deficiència de piruvat quinasa caracteritzat per macrocitosi amb normohromiey, lleugera anisocitosis i poiquilocitosis. Hi va haver un policromatofilia just. A vegades es troben mishenevidnye glòbuls vermells i els glòbuls vermells amb vores ondulats o en la forma de la morera, sovint identificada punktatsiya eritròcits basòfil, Corpuscles Jolly. Alguns pacients en la sang perifèrica van revelar un nombre significatiu de erythrokaryocytes, durant la crisi, pot ser augmentada fins 60-70 %. ESR, recompte de glòbuls blancs, leucograma, els recomptes de plaquetes dins del rang normal. Igual que amb altres formes d'anèmia hemolítica, en la medul·la òssia revelar una hematopoètic irritació aguda tija vermell.

El nivell de bilirubina, normalment, augmentat a causa de la indirecta.

La quantitat d'hemoglobina plasmàtica lliure normal, però es pot reduir els nivells de haptoglobina. Hemosiderina en l'orina està absent. Contingut de l'hemoglobina fetal i hemoglobina A₂ dins del rang normal.

Resistència osmòtica dels eritròcits deficiència de piruvat quinasa en la majoria dels casos normals, de vegades reduïda després de la incubació dia. Autogemoliz, normalment, millorat en diversos graus. Hi ha casos de deficiència de piruvat quinasa amb autogemolizom normals. En el primer van reportar casos de deficiència de piruvat quinasa s'ha registrat tipus II autogemoliza, corregeix l'addició d'ATP, i no corregir o corregir lleugerament l'addició de glucosa. Posteriorment, molts casos s'han descrit amb el tipus de deficiència de l'enzim que autogemoliza o cap. Per tant, no es recomana aplicar el mètode autogemoliza per al diagnòstic diferencial de les anèmies hemolítiques. La vida útil de les cèl·lules vermelles de la sang amb deficiència de l'activitat piruvat quinasa sempre s'escurça.

Tipus herència activitat piruvat quinasa autosòmica recessiva. Els heterozigots pràcticament sans, Segons diversos investigadors, la gravetat del dèficit han oscil·lat des 50 a 70 % normes.

Activitat de diagnòstic de la deficiència de piruvat quinasa

El diagnòstic de la deficiència de piruvat quinasa de les cèl·lules vermelles de la sang es pot esperar per lliurar al cas d'anèmia hemolítica, flueix al llarg dels anys amb l'augment en la melsa, falta de sang perifèrica signes frotis microesferocitosis, elliptotsitoza i stomatotsitoza.

Els assajos qualitatius per determinar l'activitat de la piruvat quinasa. Per a aquest propòsit, el mètode s'utilitza àmpliament taca fluorescent, basat en, que en el curs de la reacció, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oxida i la fluorescència desapareix.

L'activitat de la piruvat quinasa en individus sans va variar de 4,0 a 7,7 mmol (min / 1.010 eritròcits) o 4,0 a 7,7 Energia. La majoria de l'activitat enzimàtica malaltia homozigots menys 1 Energia. No obstant això, pot haver-hi casos en lleuger descens en l'activitat de l'enzim. El diagnòstic d'una forma rara d'anèmia hemolítica és molt difícil, i el diagnòstic es pot fer només en l'estudi de la cinètica enzimàtica.

El diagnòstic diferencial de l'anèmia hemolítica, associada amb la deficiència de piruvat quinasa

El diagnòstic diferencial de l'anèmia hemolítica, associada amb la deficiència de piruvat quinasa, necessari per dur a terme altres formes d'anèmia hemolítica hereditària.

Com la majoria de pacients amb deficiència en l'activitat de la piruvat quinasa a diferència dels individus, microesferocitosis patir, elliptotsitozom, stomatocitozom, anèmia hemolítica, carro condicionat hemoglobina inestable, i la malaltia talassèmia s'hereta de forma autosòmica recessiva, que aquesta patologia es troba només en la mateixa generació i gairebé mai vist entre els pares.

Quan l'anèmia hereditària, carro condicionat hemoglobina inestable, especialment en la malaltia severa, vegades provant és la primera portadora de la mutació, i llavors la malaltia es transmet a la següent generació. Per tant, el diagnòstic diferencial s'ha de fer amb hemoglobinopaties, carro condicionat hemoglobina inestable, així com anèmia hemolítica hereditària recessiva, causat per l'activitat deficient d'altres enzims.

Exerceix un paper secundari l'estabilitat d'hemoglobina, electroforesi Yego. Per excloure un altre fermentopathia investigat l'activitat d'altres enzims dels eritròcits, i excloure anèmia hemolítica autoimmune portat Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Mètode fluorescent per determinar l'activitat per piruvatkiiazy Beutler

Reactius.

1. Àcid Fosfoenolpirovinogradnaya (sal tritsiklogeksilammoniynaya) 0,15 M solució de, es va neutralitzar a pH 7,0-8,0 0,2 Solució M de NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M solució de, neutralitzat (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M solució de, neutralitzat (0,1 ml).
4. Sulfat de magnesi 0,08 M solució de (0,1 ml).
5. Solució tampó de fosfat de potassi 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Aigua Distillirovannaya (0,62 ml). La barreja pot ser emmagatzemat a - 20 ° C és no més d'una setmana.

Mètode.

Per a la investigació l'ús de sang, presa amb heparina o citrat de sodi. Es va centrifugar, aspirat i preparar plasma 20 % suspensió de cèl·lules vermelles de la sang mitjançant l'addició de quatre volums de solució de clorur sòdic isotònica.

Suspensió d'eritròcits en una quantitat 0,02 ml es barreja amb 0,2 ml de reactiu i es van incubar durant 30 en minuts 37 ° C. Una gota es col·loca en el paper de filtre, i navegar per la fluoroscopi. Fluorescència de línia de base es va detectar immediatament després de l'addició dels eritròcits a la barreja abans de la incubació. Normalment, després de 30 minuts d'incubació que desaparegui, i l'activitat de les restes de deficiència de piruvat quinasa. Això és, NADH que és fluorescent sota la influència de la radiació UV a la zona, prop visible, mentre que NAD no fluorescent. A causa de que la solució anterior és inestable i fàcilment degradat, requereix un seguiment. Vostè ha de separar amb cura la capa de cèl·lules blanques de la sang, ja que l'activitat de piruvat activitat de l'enzim quinasa d'eritròcits deficiència en leucòcits pot ser normal.