El diagnòstic de la infertilitat causada immunològicament

Durant una vida llarga casat sense l'ús d'anticonceptius, i en presència de la micro-regió de les membranes mucoses dels òrgans genitals pot ocórrer gradualment detectar antígens d'immunització dels espermatozoides. L'examen físic dels cònjuges, que consisteix en un matrimoni estèril, no es pot determinar la causa de la infertilitat en les 10-15 % casos. És en aquest grup de cònjuges infèrtils quan s'apliquen mètodes especials d'investigació canal cervical secret, anticossos plasmàtics de semen i esperma sèrum sovint es detecten (ASAT), Utilitza les proves qualitatives i quantitatives d'investigació immunològica.

Prova Postkoytalnыy (FCT)

Prova Postkoytalnыy (FCT) Es refereix a immunoassaig qualitatiu. Un resultat negatiu indica l'absència d'espermatozoides en el secret canal cervical, però no es pot identificar la causa de la seva absència.

Mètode. Pel nombre d'espermatozoides mòbils en el secret canal cervical, obtingut després del coit, establir l'abast de violacions de la seva capacitat de penetració amb infertilitat o immunitat a ells moc del canal cervical.

FCT cal dur a terme les següents condicions: L'estudi s'ha de fer en el període de l'ovulació, que va revelar colpocytologic o un altre mètode, després cònjuges abstinència previs dins de 2-3 dies.

La metodologia del. Després que el coit usual per a una dona 30 minuts han de mentir sobre la seva esquena, doblegant els genolls. Les dutxes vaginals i la neteja del prohibit, Només cal compresa sanitària, que s'elimina durant la captura per a l'estudi de moc del canal cervical. Després de 2-4 hores, permesa i després 6-10 hores (temps, transcorregut abans de l'estudi, s'indica en l'anàlisi) després de cèrvix coit exposat usant un mirall Cusco i el moc endocervical aspiració o una xeringa de tuberculina (sense agulla), una pipeta amb una pera de goma, o catèter de polietilè.

En rentar l'instrument no s'ha d'utilitzar desinfectants, ja que afecten la motilitat de l'esperma. Una gota de la mucosa resultant del canal cervical es transfereix a un portaobjectes de vidre escalfat, cobreobjectes recobert, Territori lubricat amb parafina líquida a la fuga. Formulació mikroskopiruyut immediatament (ocular 7X, Objectiu de 40X), determinar el nombre i la naturalesa de la motilitat de l'esperma. El fàrmac pot ser detectada amb espermatozoides actius motilitat progressiva, moviment oscil·lant (el fenomen de l'oscil·lació) i fix.

Accepten proporcionen cinc tipus de conclusions FCT.

• Excel·lent (normes pertinents): en cinc camps de visió de fins a 15-20 amb espermatozoides actius mobilitat progressiva i més. Els espermatozoides amb el fenomen d'oscil·lació és menor que 25 %.
• Satisfactori: en cinc camps de visió de fins 10 espermatozoides actius mobilitat progressiva i menys 25 % espermatozoides amb el fenomen d'oscil·lació.
• Pobre: Menys 5 espermatozoides en cinc camps de visió.
• Menys: absència d'espermatozoides.
• Dubtós: en cinc camps de visió més 5 espermatozous actius immòbils i molt més 25 % el fenomen de l'oscil·lació.

Quan el cinquè tipus de FCT sovint observat incompatibilitat immunològica entre els cònjuges, per tant, necessari determinar l'ACAT. Identificar ACAT endocervical secret, plasma, semen o sèrum sanguini i mostrar- (aglutinació o immobilitzat) Es requereix el nomenament de immunoassaigs quantitatius.

Un PBC negatiu Els estudis comencen amb una definició de penetrar (penetració) la capacitat dels espermatozoides a través de prova de penetració (Divendres) i la susceptibilitat a la secreció d'esperma del canal cervical usant un contacte de prova dels espermatozoides i el moc cervical (TKSTSS).

Prova Penetracionnyj (TP)

La longitud capil·lar fina 10 Veure escrit durant l'ovulació el moc del canal cervical. Un extrem obert del capil·lar es tanca argila, i la segona es col·loca en un tub d'assaig amb una prova d'ejaculat fresc (no més 3 hores després de l'ejaculació). Amb argila en el capil·lar està unit a la posició vertical del tub. La mostra s'incuba en un termòstat a una temperatura 37 ° C. 1 no. Sobre la qualitat de l'ejaculat es jutja per la profunditat de penetració dels espermatozoides en el moc del canal cervical. Hi ha tres tipus de gasos d'efecte hivernacle.

• Afirmativa - La profunditat de penetració (la major distància en centímetres, viatjat almenys espermatozoides sola) dalt 5 cm; el nombre d'espermatozoides en el punt de màxima penetració més 5 a la vista, i el nombre d'espermatozoides mòbils en el terç superior del capil·lar és més gran que 50 %.
• Dubtós - Una profunditat de penetració fins 5 Veure menys recompte d'esperma 5, la seva mobilitat en el terç superior dels trams capil·lars 50%.
• Menys - La profunditat de penetració de l'abast d'esperma 1 cm.

La capacitat dels espermatozoides a la penetració Depèn de la fase del cicle menstrual. Ella comença a emergir des del novè dia del cicle menstrual,, activant gradualment, assoleix la seva màxima expressió en el període de l'ovulació, celebrada a aquest nivell durant dos dies, i després disminueix gradualment.

Semen de contacte de prova i el moc cervical (TKSTSS)

A la diapositiva es col·loca una petita gota de moc del canal cervical, pres de les dones durant l'ovulació, i un nombre de la mateixa caiguda de mida de ejaculat. Tots dos gotes estan coberts amb una coberta de vidre, que es pressiona lleugerament cap avall per, unit a una caiguda. El fàrmac es col·loca en una càmera humida (Placa de Petri amb cotó humitejat) i es van incubar en un termòstat a una temperatura 37 ° C. 1 no.

En aquestes condicions, l'esperma normal de penetrar el secret del canal cervical normal, com es pot veure sota el microscopi a una ampliació de 200X. Per tenir en compte la reacció prop del límit entre dos mitjans compte el nombre de penetrar el secret dels espermatozoides canal cervical en dos camps adjacents de vista.

Amb excel·lent TKSTSS en dos camps de visió revela més 25 espermatozoides mòbils activament en el fenomen d'oscil·lació menys 25 %. Si TKSTSS satisfactòria en dos camps de visió revelar més 15 esperma activament mòbils, TKSTSS en baixa - a menys de 15. Un TKSTSS penetració absent negatiu, Si qüestionable - un fenomen d'oscil·lació excedeix 25 %.

En aquesta prova, com en PCT, el fenomen de l'oscil·lació, superior 25 %, probable, Indica la presència de l'ACAT i requereix el nomenament de immunoassaigs quantitatius.

L'ús de semen i secrecions cervicals homes estèrils i fèrtils de canal en diverses quantitats a utilitzar TKSTSS identificar marit infèrtil.

• Exemple 1. Pres d'un canal secret de coll uterí en les dones parelles infèrtils i homes sans ejaculat de control. Excel·lent TKSTSS indica una capacitat feble penetració dels espermatozoides del seu marit, i la susceptibilitat de la secreció normal del canal cervical.
• Exemple 2. Pres secret complet de la cadena dona sana cervical i la seva ejaculació espòs de parelles infèrtils. Inadequat TKSTSS indica una feble penetració de l'esperma.
• Exemple 3. Dones endocervicals parelles infèrtils secretes adoptades i homes sans ejaculat de control. Mala TKSTSS indica inferioritat canal cervical secret, que òbviament no penetren espermatozoides normals.

Proves immunològiques quantitatives

Mikroagglyutinatsionny prova Friberg

Mikroagglyutinatsionny prova Friberg (TF) prou sensible i està disponible per als laboratoris de diagnòstic clínic. L'ús de TF pot determinar la presència de l'ACAT i títol d'aglutinació en diversos materials (ejaculació de plasma, extractes de moc del canal cervical i en el sèrum de tots dos cònjuges).

Reactius:

1. Solució salina tamponada amb fosfat (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Oli Vazelinovoe.

Equips: microscopi, xeringa de tuberculina, mikroagglyutinatsionnye pipeta 1 ml, capacitat micropipeta 0,1 ml.

Mètode. Sèrum d'assaig de sang s'inactiva per incubació en una incubadora a 56 ° C. 30 m. Ejacular, obtingut per masturbació, immediatament diluïda perquè el FSB, la concentració d'esperma va ser 40 milió. en 1 ml.

A causa de que el material (ejaculació de plasma, extreure el secret del canal cervical o sèrum) es prepara una sèrie de dilucions 1:4 a 1:128 utilitzant com a líquid per FSB dilució. En pous amb mikroagglyutinatsionnyh oli de parafina planchettes xeringa de tuberculina amb una agulla s'introdueix (sota oli vazelinovoe) Petites gotes de cada dilució del material de prova. Després de cada mostra es renta quatre vegades la xeringa. En cada dilució s'afegeix a la 5 vegades més petita gota d'ejaculat, i per 4 h a temperatura ambient detectada aglutina. Darrera reproducció, mitjançant el qual sota un microscopi amb una ampliació de 100X detectat 3 aglutinen sota revisió i més, títol d'aglutinació correspon ACAT.

Prova Spermoimmobilizuyuschy Izodzhima (SIT).

ACAT títol del sèrum d'immobilització, plasma o semen extracte de canal cervical secret s'estableix pel nombre d'espermatozoides mòbils en la presència d'antígens (esperma).

Components.

1. Ejacular, que es produeix i preparada de manera similar, per TF utilitzant FSB; motilitat excedeixi 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya sèrum de conillets d'índies.

3. Sèrum humà immune (CISH), donant en presència de complement a través 1 h d'incubació immobilització 90 % esperma.

4. Sèrum humà normal (NCHS), inactivat per escalfament a una temperatura 56 ° C. 30 m.

5. Prova de sèrum inactivat, plasma i el semen extreuen canal cervical secret.

Mètode. Per avaluar l'activitat del complement immobilitzar el primer tub s'introdueix 0,5 ml de solució de clorur de sodi isotònica, per determinar els canvis en la motilitat d'esperma sense ASAT el tub segona prova - 0,5 ml NHS, control d'immobilització tercer tub - 0,5 ml de CISH i determinar l'ACAT immobilitzar el quart tub - 0,5 ml de sèrum, o plasma del ejaculat, extracte o secreció endocervical.

A continuació, cada tub s'introdueix per 0,1 ml complement. S'afegeix l'última cosa a tots els tubs 0,05 ml suspensió d'esperma en una concentració 40 milió. en 1 ml. Trípode tubs es van col·locar en una incubadora a una temperatura 37 ° C 1 no. Els tubs es van treure de l'estufa i acuradament sacsejat per reflectir esperma aglutinat reiterada.

Per avaluar els resultats sota microscopi d'alta magnificació (400X) va calcular el percentatge d'espermatozoides mòbils en una gota del tub d'assaig, dipositat sobre un portaobjectes de vidre i es cobreix amb una coberta. De la mateixa manera, s'estableix el percentatge d'espermatozoides mòbils en les gotetes dels tubs d'assaig amb l'NHS i el CISH. El resultat de la reacció en compte per la fórmula

SIT = K / A

on K - el nombre d'espermatozoides mòbils en el control amb el CISH i el NHS;

Sobre - el nombre d'espermatozoides mòbils en un tub d'assaig (prova de sèrum, o plasma del ejaculat, o el secret del canal cervical).

Amb SIT mitjana<2 la prova és negativa (nombre de cèl·lules d'espermatozoides mòbils en el control i en els tubs d'assaig d'aproximadament la mateixa), Si l'índex CTI>2 - La prova és positiva, t. és. en el material de (sèrum, plasma o semen extreuen canal cervical secret) s'immobilitzen ACAT.

• Exemple 1. Control de terra a CISH - 10 % espermatozoides mòbils. El segon control amb el NHS - 80% espermatozoides mòbils. Els dos controls junts - 90 % espermatozoides mòbils. En el tub d'assaig - 80 % espermatozoides mòbils.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

La prova és negativa, immobilitzada absent ACAT.

• Exemple 2. En el tub d'assaig - 40 % espermatozoides mòbils, No obstant això, en el control, en l'Exemple 1.

KN = 90/40 = 2,2

La prova positiva. Hi ha anticòs immobilitzat (ASAT), a través del qual l'esperma de motilitat reduïda significativament.