Микроскопско изследване на цереброспиналната течност

Определяне cytosis

В цереброспиналната течност при здрави индивиди, съдържаща много малък брой клетки. Клиничното значение имат главно левкоцити (лимфоцити). Да разчита на белите кръвни клетки не пречат еритроцити, Те ги унищожи чрез добавяне неразреден цереброспинална течност 1/10 части фуксин оцетна киселина. Magenta цветове ядрени клетки в червено. За боядисване на левкоцити с помощта на реагента Samson (смесен 30 мл ледена оцетна киселина, 2 мл втечнен фенол, 2 мл алкохолен разтвор на фуксин 1 : 10 и гарнирани 100 мл дестилирана вода). Устойчиви Reagent, добри петна клетки и в рамките на няколко часа ги пази от цитолиза.

Нанесете като разтвор, включващ 5 мл 10 % оцетна киселина 0,1 Г-н metilvioleta. Това е по-малко стабилен, клетки се оцветяват сини.

Поради цитолитичните свойства на гръбначно-мозъчната течност да разчита на броя на клетките трябва да бъде веднага след като се. Течността се измерва в тръбата или микропипета капки пропорционално 10 части на гръбначно-мозъчната течност и 1 част разтвор оцветител и се оставя за 10-25 минути, за да боядисват клетки. За развъждане може да се използва миксер левкоцити. Клетките цереброспинална течност много бързо се придържаме към стените на тръбите, така течност, боксира ин витро, Преди изследването трябва да се размеси ротационни движения между дланите.

За изчисляване броя на клетките се използва Камара Fuchs-Rosenthal. Преброяване продукция в цялата мрежа чрез 5 мин след напълване на камерата. Брой клетки 1 L се дава с:

X =(A * 11)/(3.2*10)

където X - брой на клетките в 1 л; А - брой клетки, Брой на повърхността на екрана; 3,2 - Обем на камерата; 11/10 - Разреждане.

Позволени регистрация на графовете като фракция, напр 14/3, където 14 - Броят на клетките брои в камерата, 3 - Закръгляване обем камера. С голям брой клетки е достатъчно, за да ги брои в едната половина на мрежата и броя на получените двойно. С подчертано плеоцитоза (значително увеличение на броя клетки) позволено да брои клетки 16 Малки площади и се размножавайте, че редица от 16.

При липса на камерата Fuchs-Rosenthal може да се използва Преброяване камера Goryaeva със значително по-нисък капацитет, Ето защо тя се брои клетки най-малко три квадрата, изчислява средноаритметичното и го умножете по 1,2. Фактор 1,2 получена от формула

X =(A * 11)/(0.9*10)

където 0,9-капацитет камера, 11/10 - Разреждане.

Когато преброяване на клетките в цереброспиналната течност на неразреден един от първите капки, произтичащи от иглата пункция, поставя в Fuchs-Rosenthal и определяне на броя на клетките, както е посочено по-горе.

Обикновено, броят на клетки (лимфоцити) аз н 1 л цереброспинална течност от вентрикулите на мозъка и церебрална мозъка резервоара е 0-1, и течни, получен чрез лумбална пункция - 2-4.

Деца на възраст под три месеца 1 L гръбначно-мозъчната течност е установено, 20-23 клетки, до една година - 14-15, до две години - 11-14, от две до пет година - 10-12, 5-7 години 8-10, седем до десет година - 6-8, повече от десет години - 4-5.

Когато менингит, тумори на мозъка абсцес и броят на клетките в цереброспиналната течност се увеличава.

В проучването на хеморагичен цереброспинална течност в някои случаи е необходимо да се установи истинската му cytosis. За тази цел Метод на Фридман: хеморагичен течност печалба Самсон реагент за определяне на броя на клетките и изотоничен разтвор на натриев хлорид за преброяване на броя на червените 1 л цереброспинална течност.

Например, брой клетки в 1 L - 20, на броя на червените кръвни клетки - 3600. На броя на червените кръвни клетки и белите кръвни клетки разпознават пациента от общия анализ, извършва преди лумбална пункция. Например, аз н 1 мл кръв 4 200 000 еритроцитите, 7000 левкоцити. Затова човек трябва да левкоцити 4200000/7000 = 600 еритроцити.

За да се получи истинската стойност на cytosis отъждествяват:

На 600 червени кръвни клетки - 1 левкоцит;

На 3600 еритроцити - X левкоцити, Следователно,

X = 3600/600 = 6 леикоцитов.

True цереброспиналната течност cytosis 20-6 = 14 клетки 1 л.

Прилагането на този метод се ограничава, от гръбначно-мозъчната течност със значителен примес на кръв не е подходящ за такова проучване.

Определяне на броя на еритроцитите в цереброспиналната течност Разположен е да се установи степента на интракраниални кръвоизливи на пациента.

В присъствието на 1 л 2000-5000 еритроцити цереброспинална течност става розово, 900-1000 Еритроцити - само леко опалесциращ. Безцветната течност може да се открие от долните червените кръвни клетки. Клиничното значение е увеличаването на динамиката на нивото на червените кръвни клетки.

Клетъчна диференциация цереброспинална течност проведе в броене камера във формата на родния и оцветени.

В голямо увеличение (окуляр 10Х или 15Х, 40Х обектив) при преброяването на камерата се обръща внимание на размера на клетките, форма, разположението и големината на ядрата, наличието на включвания в цитоплазмата на. Лесно е да се диференцират лимфоцити, неутрофилни гранулоцити, макрофаги. Обикновено, в цереброспиналната течност, съдържаща само лимфоцити.

За пълното характеризиране на клетъчния състав на гръбначно-мозъчната течност учи оцветени препарати. Клетките се оцветяват течност лоши, с изключение на кръвните клетки. Има няколко начина за оцветяване: от Росина, Лесна победа, цитонамазка, Алексеев, Май-Грюнвалд, Pappengeymw.

Определяне на естеството на метода на флуоресцентна микроскопия плеоцитоза

Обезмаслено покритие стъкло и капка от цереброспинална течност я смесете с флуорохром боя (смес от водни разтвори на соли на акридин оранжево и подвидамин през размножителния 1:20000). Смесената лекарството се изследва под флуоресцентен микроскоп ML-2 в синьо-виолетова светлина във видимия спектър, използват комбинации от възбуждане филтри: FS 1-4, FBS 14-4, BS 8-2 и потапяне обектива заключващия филтърни LS-1. Както neflyuorestsiruyuschego потапяне масло, използвано за научноизследователска диметил (ортофталова киселина диметилестер).

В тъмния фон на полето на виждане и лимфоцити polynuclears лесно идентифицирани от зелената светлина на цитоплазмата. Count ред 100 клетка, като се има предвид броят на лимфоцити и неутрофили.

Лимфоцитите различно от естеството на неутрофили ядро (glybchatoy конструкция с оранжеви включвания) и светло зелен флуоресцентен.

Неутрофилни гранулоцити има ясна структура, им ядра хроматин дифузно осветена, униформа ярка- зелен. Цитоплазмена жълто- зелен, разпръсна червена тухла гранули.

В случаи на незначителни cytosis родния цереброспинална течност се центрофугира и проучването на утайка.

Fluorescent микроскопско изследване на гръбначно-мозъчната течност го прави лесно да се заключи, че неутрофилите, лимфоцитна или полиморфонуклеарен клетка природата плеоцитоза.

Морфологични характеристики на клетки на гръбначно-мозъчната течност

Лимфоцитите

В цереброспиналната течност от здрави хора намерен малки и средни лимфоцити (1-2 1 л) размер на 4-6 микрона. Този кръг с форма на клетки с голям ядро ​​и glybchatym много тесен цитоплазма.

Когато лимфоидна плеоцитоза (туберкулозен менингит, цистицеркоза) заедно с появяват малки и средни големи лимфоцити (89 М), от време на време, че е възможно да се открият клетки с директен разпад.

Броят на лимфоцитите (заедно с други клетки) повишаване на гръбначно-мозъчната течност в мозъчни тумори, По време на хронично менингит. Когато неврохирургически заболявания увеличаване на броя на лимфоцитите в постоперативния период настъпва след увеличаване на броя на неутрофилите и показва благоприятен изход.

Плазмени клетки

Плазмените клетки могат да бъдат открити в цереброспиналната течност само когато настоящият дълго възпаление на мозъка и менингите. Морфология плазмени клетки, такива като, в кръвта или костния мозък пунктата.

Този кръг с форма на клетки с ексцентрично разположен ядро ​​и интензивно оцветени, базофилен цитоплазма. В някои случаи сумата може да достигне тяхното 26%. Има плазмени клетки в следоперативния период и муден курс на репарационните процеси в мозъчна травма.

хистиоцити

В нормален цереброспинална течност понякога се срещат под формата на единични копия.

Оцветените препарати хистиоцити имат голям ядро ​​и относително тесен цитоплазма. Количеството клетки 7 към 10 м, кръгла или неправилна форма. Ядрото на боб или неправилна форма острие, normohromnaja. Нуклеоли са видими в родния препарати с фазово контрастна микроскопия.

Когато туберкулозен менингит в цереброспиналната течност разкрива голям брой хистиоцити, раздалечени и клъстери, тяхната цитоплазма базофилна, рисувани по-интензивно.

Според наличните данни, някои видове глиални клетки могат да се трансформират в хистиоцити. Голям брой хистиоцити се открива в цереброспиналната течност на пациенти, претърпя операция на мозъка или гръбначния стълб (което показва реакция активна тъкан и нормални лечебни рани), и при лица, страдащи от туберкулозен менингит и цистицеркоза в застой текущата възпалението. Когато мозъчни тумори с инвазия в субарахноидалното пространство или хистиоцити в камерна стена могат да се появят в цереброспиналната течност във връзка с променени клетки и макрофаги, което е типично за появата около реактивен зоната на тумора.

Макрофаги

Макрофагите са образувани от един единствен- ендотелни клетки и мулти-арахноидните матер и моноцити. Елементи на ендотелна арахноидните матер се отделят от Синцитиумът и стават заоблени клетки, притежаващ amoeboid движение и проникване в цереброспиналната течност.

Макрофагите активно поглъщат и смилат на клетките и други елементи, попадащи в цереброспиналната течност при патологични процеси, допринася за нейното пречистване. На включвания в цитоплазмата на макрофагите диференцирани лесно в камерата и в оцветен.

Макрофагите фагоцитозната еритроцити, унищожени или немодифицирани неутрофилни гранулоцити, капки мазнина, gematoidina кристали и т.н.. Често в цитоплазмата на макрофагите вакуоли с различни размери са на разположение, или една голяма вакуола, който заема почти цялата цитоплазмата, докато сърцевината е изместен към периферията. В такива случаи, клетката има формата на пръстен - cricoid макрофаги.

Обикновено макрофаги в отсъствие на гръбначномозъчната течност. Появата им в нормален броя на клетките показателно за кръвоизлив или възпаление в централната нервна система. Голям брой макрофаги в цереброспиналната течност в постоперативния период показва активното възстановяване (положителна перспектива). Малък брой макрофаги или отсъствието им, когато са изразени плеоцитоза - неблагоприятен прогностичен белег.

Гранулирани топки – пенести клетки

Гранулирани топки (пенести клетки) Макрофагите са големи с множество включвания на мастните капчици в цитоплазмата.

Това е най-често клетки закръглената форма на, магента оцветени в тъмно кафяв цвят. При лечението на гръбначния течност гранулирани топки Судан III боядисани в оранжево-червен.

Установена в цереброспиналната течност в контакт с течността в него от кисти на различни етиологии, упадъка на мозъчна тъкан (с капки мазнина), понякога в следоперативния период, в някои мозъчни тумори (kraniofaringiome, ependymomas и др.). Ако туморът е близо до камерите, Гранулираните топки често открити в цереброспиналната течност от камерите. Източникът на гранулирани топки са микроглия, и олигодендроцити, клетките на външната обвивка на съдовете и арахноидните.

Неутрофилни гранулоцити

Неутрофилите гранулоцити в цереброспиналната течност подобна на кръв неутрофилен granulopitami, тяхната цитоплазма (при преброяването на камерата и местни препарати) често опъната или има издатина (pseudopodia). Това разнообразие от наблюдавани през първите 10-15 минути след приемане на гръбначно-мозъчната течност клетки и показва запазване на неутрофилен- способността на гранулоцити да се движат. Характерен е сегментиран ядро, броят на сегментите в която варира от две до пет; прободни неутрофилите гранулоцити са редки.

При съхраняване цереброспиналната течност неутрофилни гранулоцити променени преди, от други клетки. Ядрата на неутрофилите гранулоцити може да се лизира или сегменти са закръглени, с ясни контури, свързан с тънък мост; по-късно те са под формата на отделни пелети. Макрофаги, която се съхранява само едно ядро ​​сегмент закръглена форма, на външен вид прилича Loevit клетка. Там подути неутрофилни гранулоцити с неясни контури на сегменти, заемащ почти цялата цитоплазмата. В оцветени препарати може да наблюдава всички етапи от рухването на неутрофилни гранулоцити - подуване на ядрото до пълното унищожаване на структурата на клетката, когато контурите не са видими цитоплазма, и основните сегменти са безформени, състояща се от мека окото хроматин. Членството в тези клетки към неутрофилни гранулоцити може да се настрои само чрез взаимодействие с пероксидаза: наличието на жълто-зелен или кафяви гранули в цитоплазмата на унищожените.

Понякога, в цереброспиналната течност открита неутрофилни гранулоцити с пикнотични ядра под формата на бучки с неправилна форма хиперхромни.

Неутрофилите гранулоцити се появяват в цереброспиналната течност с кръвоизливи на субарахноидалното пространство, възпалителни заболявания на нервната система, след неврохирургични операции. Наличието на неутрофилни гранулоцити в кръвта в цереброспиналната течност показва възпаление на менингите.

Преобладаването на неутрофилите непроменени доказателства от остро възпаление.

Внезапен появата на неутрофилен плеоцитоза наблюдавани при счупване на абсцес под лигавицата на мозъка.

Когато абсцес, Разположен дълбоко в мозъчната тъкан, обикновено се наблюдава изразена лека плеоцитоза с преобладаване на лимфоцитите.

Когато затихването на възпаление в цереброспиналната течност изглежда изродени форми на неутрофилни гранулоцити.

Наличието на промени и непроменени неутрофилите е характерно за продължаващата възпалителния процес. Трябва да се вземе под внимание, че немодифицирани неутрофилни гранулоцити се появяват в цереброспиналната течност в смес от свежа кръв, в такива случаи, cytosis коригиращи дефиниция.

Еозинофилен гранулоцити

Еозинофилен гранулоцити в родния проби от ликвор диференцират с други клетки от наличието на характерна голяма лъскава песъчинки, запълване на цитоплазмата. Клетки с две остриета ядрото редки, често се наблюдава моноядрена форма. Морфология в оцветени еозинофилни гранулоцити същите, в кръвта. Цереброспиналната течност често се срещат унищожени еозинофилни гранулоцити на.

Съдържание на еозинофилни гранулоцити в гръбначномозъчната течност в диапазони от цистицеркоза 1 към 46%.

Появата на менингит като усложнение на арахноидит tsistitserkoznogo се придружава от неутрофилна плеоцитоза и намаляване на броя на еозинофилни гранулоцити. За abstsedirovaniya ехинокок балон в мозъка се характеризира с наличието на неговото съдържание на неутрофилите и еозинофилите гранулоцити, който служи като помощен елемент в него разграничава от абсцес. Понякога голям брой еозинофилни гранулоцити могат да бъдат намерени в съдържанието на кисти тумори на мозъка и гръбначния мозък (неврома, kraniofaringiome, епендимома, ракови метастази в мозъка). В значително увеличение на броя на еозинофилни гранулоцити в гръбначно-мозъчната течност може да се наблюдава след вентрикуларна tsisternoskopii.

След отстраняване на мозъчни тумори с активен рана хирургическа рана увеличава броя на еозинофилни гранулоцити, че може да се разглежда като местен алергична реакция към травмата на менингите и усвояването на продуктите на разпадане тъкан.

Модифицираните клетки и сянка клетки

Благодарение цитолитичните свойства на цереброспинална течност клетки, съдържащата се в него за дълго време, запази само контурите на цитоплазмата и ядрата на остатъци. За да се определи тяхната морфологична принадлежност не е възможно. В повечето случаи тези промени са обект на неутрофилни гранулоцити, понякога е клетките на злокачествени тумори. Лесно е да се подложи на цитолиза арахноидните клетки и епендимални вентрикули.

Лечебните базофили се намират в гръбначномозъчната течност след неврохирургия.

Клетките арахноидните матер в цереброспиналната течност

Клетките арахноидните матер (арахноэндотелия) - Един слой епителни клетки, те могат да се обособи като брой на броячна камера клетки, и в оцветени, получава утайка от гръбначно-мозъчната течност. Този относително голям неправилна форма клетки или закръглени със сравнително малка кръгла или овална ядро, централно разположен.

Ядрата Клетъчните се оцветяват хипохромна, и цитоплазмата - бледо- или сиво-син цвят, по този начин е често неравни контури и съдържа включвания на частици фагоцитирани (капки мазнина, клетъчни елементи, вакуола). Цитоплазмата на клетките на арахноидните обвивка често унищожени, В такива случаи се откриват характеристика на ядрото и цитоплазмени фрагменти. Chromatin има melkopetlistuyu сърцевини или зърнеста структура, понякога много по една синя ядърце. Размерът на ядрата на 5 към 19 м.

Наличието в цереброспиналната течност на единичните клетки на арахноидните все още не е доказателство за патология, тъй като тези клетки линия на субарахноидален пространство и, ексфолиращ, попадат в цереброспиналната течност. Увеличаването на броя на клетките, наблюдавани в арахноидните арахноидит, мозъчна цистицеркоза. Съдържанието на арахноидните кисти се срещат в отделни места арахноидните клетки и тяхното symplast като групи от ядра с различни размери и наситеност на цвета, заобиколен от бледо цитоплазмата, без ясни граници между клетки.

Клетките на хороидния плексус

От хороиден сплит на камерите в гръбначномозъчната течност може да влезе многоъгълна, объл, понякога голяма цилиндрична (15-19 M) клетка. Малък (4-5 М) Намира се в центъра на ядрото, или ексцентрично, хиперхромни, еозинофилен цитоплазма, интензивно оцветени. В цитоплазмата на клетките на хороидния плексус е зърнистост, понякога под формата на включвания и бучки, размер 1-3 микрона, кръгла или неправилна форма, зеленикав или синкав цвят. Някои клетки могат да бъдат открити или заловени от вакуолна на червени кръвни клетки.

Клетките на хороидния плексус е най-често се срещат в течност от камерите на мозъка.

Клетките епендималната вентрикуларна цереброспинална течност в мозъка

Клетките епендималната вентрикуларна цереброспинална течност в мозъка, получен чрез лумбална пункция, Той е лесно унищожени в процеса на готвене и оцветяване. В оцветени намазки те имат вид на образованието, състояща се от овални ядра с деликатен структура. В някои клетки запазена цитоплазма обгражда ядрото под формата на тясна граница.

Течността от вентрикулите на мозъка са най-честите епендимални клетките със запазена структура, морфологично наподобяват клетките на арахноидните обвивка, но в основата на тяхната боядисани блед и да имат по-нежна, хомогенно разпределение на хроматин. Полюсите на овала епендимални клетки често изтъкват, В цитоплазмата има сивкав оттенък. Там са разположени отделно и големи групи от клетки, които не могат да бъдат определени от границите на отделните клетки.