دراسة Cytochemical من السائل المنوي

رد فعل Cytochemical, أجريت مع السائل المنوي, يقدم أفكارا في التركيب الكيميائي والنشاط الوظيفي من خلاياه.

تقرير من حمض النشاط الفوسفاتيز القذف

حمض النشاط الفوسفاتيز القذف عدة مرات أكبر من نشاطها في الدم. حمض الفوسفاتيز هو جزء من إفرازات البروستاتا, يتم تحفيز انتاجها بمقدار موجهة الغدد التناسلية الذكور. باستخدام تفاعلات cytochemical تم الكشف عنه في الحيوانات المنوية وخلايا أخرى من السائل المنوي. يتم تحديد النشاط ل طريقة غولدبرغ - بركاء.

الكواشف.

1. الكحول الفورمالين (جزء واحد من استعداد 40 % الفورمالين حل في تسعة أجزاء 96% الكحول الإيثيلي).

2. Pararozanilin: 1 ز الفوكسين الأساسي للفوك- حمض sinosernistoy المنحل أثناء التسخين في 25 مل 2 N حمض الهيدروكلوريك; تبريد, تصفيتها وتخزينها في الثلاجة. كاشف مقاومة.

3. محلول مائي من نترات الصوديوم 4 %. 4. والحل من اللون الأخضر الميثيل لعازلة خلات 2 % (درجة الحموضة - 5). وجرفت الحل الناتج مع الكلوروفورم, ثم يخلط بكميات متساوية تقريبا من الكلوروفورم و 2 % الميثيل الحل الأخضر. هبط خلال اليوم, ورسمت ثم في اللون الأرجواني، وتمت إزالة الكلوروفورم مع قمع فصل.

5. البيئة Inkubatsionnaya, تتألف من عنصرين.

• وثمة عنصر: 20 تم حله ملغ النفثول-A5-الفوسفات في 0,5 (0,3) مل ثنائي ميثيل الفورماميد, إضافة 40 مل 0,1 N حل خلات الصوديوم وتصفيتها من خلال ورق الترشيح; إعداد يوما دراسيا.
• B-عنصر: 8 قطرات 4 % كانت مختلطة محلول نترات الصوديوم مع 8 قطرات pararozanilina; هي مؤقتة السابقين. للحصول على حد سواء مكونات المتوسطة حضانة متصل (درجة الحموضة 5،2-5،4). إذا لزم الأمر، تصحيح أي درجة الحموضة 50 % حمض الاسيتيك, حل القلويات الكاوية.

طريقة. يتم طرد السائل المنوي الطازج, عند عدد كبير من الحيوانات المنوية الاستغناء الطرد المركزي. من الرواسب تحضير الزجاج المصقول السكتات الدماغية رقيقة, أن, وكذلك لطخات الدم, المجفف في الهواء. مسحات المجفف الثابت عن طريق غمر لهم في كوب مع الكحول الفورمالين في 30 من (لا أكثر) وغسلها بالماء المقطر. ثم يتم مغمورة مسحات في كوب مع الحضانة المتوسطة وضعها في حاضنة عند درجة حرارة 37 ° C 2 لا. بعد ذلك، كانت تشطف في الماء المقطر, مغمورة ل 10 دقيقة في كوب بمحلول مكون من الأخضر الميثيل (counterstained لنوى), غسلها بسرعة قبالة مع الماء, المجففة مع ورقة الترشيح وفحصها من قبل نظام المجهر الغمر.

نشاط إنزيم الفوسفاتيز الحمضي يمكن التعبير عن متوسط ​​عامل cytochemical (SCK) بواسطة طريقة polukolychestvennomu Astaldi-فيرغا. وفقا للمعادلة

SCK =(3*و 2 * ب أ * 1)/100

حيث الأرقام في البسط يدل على كثافة اللون (الحد الأقصى - 3, المعتدل - 2, آثار أقدام - 1), والحروف - عن طريق النسبة المئوية للخلايا تحسب كثافة اللون معينة; الشكل 100 في المقام - أن العدد الكلي للخلايا عدها.

مثلا, معدود 100 خلية, من التي لديها كثافة اللون القصوى 20 خلية, المعتدل - 20 وبما يلي - 60 خلية. هنا:

SCK =(3*20+2*20+1*60)/100= 1،6

الفوسفاتيز حمض الحيوانات المنوية الموجودة في وحدة يطحن الأحمر البرتقالي في الجزء العلوي من الرأس.

جزء ونين مشغول من الرأس الأخضر ولا يحتوي على إنزيم الفوسفاتيز الحمضي.

تم الكشف عن لون شاحب أكثر انتشارا على الفوسفاتيز الحمضي حول الجزء السفلي من الرأس, وأحيانا يمتد إلى الرقبة من الحيوانات المنوية. معامل cytochemical الأوسط من الفوسفاتيز الحمضي في الحيوانات المنوية السائل المنوي الطبيعي هو 2،0-2،4.

في سيتوبلازم خلايا الحيوانات المنوية كشفت تراكم حبيبات, طليت بألوان زاهية في محددة (الأحمر البرتقالي) اللون. في الخلايا الداعمة للالأنابيب المنوية الملتوية, في كثير من الأحيان بشكل حاد الملون بشكل إيجابي لالفوسفاتيز الحمضي, رئيس غير اللون الشفاف (xromatin) نطفة. الناسجة والضامة تحتوي على عدد قليل من حبيبات, ملطخة بشكل إيجابي لالفوسفاتيز الحمضي. في الخلايا الليمفاوية المعزولة, وأحيانا العدلات هي الكريات الفردية, وجود نشاط إنزيم الفوسفاتيز الحمضي.

تقرير النشاط نازعة سكسينات (SDG) في السائل المنوي

Sukcinatdegidrogenaza - أنزيم, المشاركة في تفاعلات الأكسدة والاختزال, الواردة في الخلايا في عدد كبير من السائل المنوي. ومع ذلك، ما زال لم يفهم طبيعة التغيير من نشاطها في عمليات المرضية المختلفة بشكل جيد. يتم تحديد النشاط نازعة سكسينات في الخلايا بطريقة معدلة من Nartsissova.

الكواشف.

1. الأسيتون-طرل (الأسيتون - 60 مل, distillirovannaya المياه - 40 مل, طرل B - 250 ملغ).

2. والحل من اللون الأخضر الميثيل 2 % (نفس صبغة, والذي يستخدم لالفوسفاتيز الحمضي).

3. البيئة Inkubatsionnaya, تتكون من العناصر التالية:

و) العازلة الفوسفات (درجة الحموضة 7،2-7،4) - 10 مل;

إلى) 5,4 % حل سكسينات الصوديوم - 10 مل;

في) complexone III (13 ملغ مخففة في 5 مل من الماء المقطر);

ز) الماء المقطر - 5 مل;

د) nitrotetrazolium الأرجواني (10 ملغ مخففة في 10 مل من الماء).

يتم خلط جميع المكونات في حزمة واحدة وتخزينها في الثلاجة. متوسطة أعدت يمكن إعادة استخدامها - ل 10 أيام أو أكثر.

طريقة. مسحات, أعدت من السائل المنوي, ثابت في الأسيتون لTrilon- 30 من, غسلها بالماء المقطر وتجفف في الهواء. ثم يتم مغمورة مسحات في الحضانة المتوسطة وضعها في حاضنة عند درجة حرارة 37 ° C 1 لا, وبعد ذلك يتم غسلها بالماء المقطر وdokrashivayut الأخضر الميثيل ل 10 م. ثم مرة أخرى غسلها بسرعة مع الماء, المجففة مع ورقة الترشيح وفحصها من قبل نظام المجهر الغمر.

الحيوانات المنوية طبيعية لها نشاط عال من سكسينات نازعة, ممثلة حبيبات زرقاء اللون الارجواني كبيرة, أن, دمج معا, تشكيل كتلة كثيفة, ملء الحيوانات المنوية الرقبة, تم العثور على بعض الكريات الحيوانات المنوية فرد حول الرأس.

حساب تنصهر معا حبيبات غير ممكن, لذلك، لتحديد نشاط سكسينات نازعة الجزء الملون الحيوانات المنوية تقاس ميكرومتر. على طول رسمت خصيصا لسكسينات نازعة من الحيوانات المنوية ويتم الحكم على درجة نشاط الإنزيم في الحيوانات المنوية. مع ميكرومتر العين وطول الكائن ميكرومتر يقاس في الجزء الملون محدد 100 spermatozoidax. مضيفا طول تحسب في أقسام الملون من الحيوانات المنوية، وتقسيم الرقم الناتج من قبل 100, تتلقى متوسط ​​طول, معربا عن النشاط suktsinatdegidrogenaznuyu عن الحيوانات المنوية واحد. عادة، فمن 4،3 ± 0،7 م. هذا النشاط حساب LDH هو أكبر قدر من المعلومات، وبالتالي ينصح استخدامه لأغراض بحثية.

لتطبيق واسع في الممارسة العملية، وهذه الطريقة معقدة جدا, هو الأفضل للتعبير عن كمية سكسينات نازعة Astaldi-طريقة فيرغا. المتوسط ​​LDH معامل cytochemical من الحيوانات المنوية في السائل المنوي هو طبيعي 2,7 ± 0،3.

في خلايا الحيوانات المنوية تم الكشف عن النشاط LDH في شكل مجموعات كبيرة حبيبات زرقاء بنفسجية, كثيرا ما تندمج كتل كبيرة, تقع في مناطق مختلفة من السيتوبلازم. عامل cytochemical المتوسطة في خلايا الحيوانات المنوية الروافد 2,0. مع نضوج خلايا السائل المنوي ويزيد من نشاط LDH في الحيوانات المنوية الناضجة يتجاوز 2,0. في السيتوبلازم لبعض الخلايا الليمفاوية وجدت اطحن SDG.

تقرير النشاط البيروكسيديز في السائل المنوي

الحيوانات المنوية, خلايا الحيوانات المنوية والخلايا الداعمة للالأنابيب المنوية الملتوية البيروكسيد مفقود.

وأعرب العدلات المحببة النشاط القذف الغلوثانيون إلى حد كبير، ويمكن أن تختلف تبعا لطبيعة العملية المرضية, وكذلك في الدم المحيطي. مستوى النشاط البيروكسيديز في العدلات مهم لتقييم الوضع الوظيفي والنشاط من العملية الالتهابية في الأعضاء التناسلية الذكرية. مسحات الملون السائل المنوي غراهام-الربوة والنشاط المحاسبية للانزيم Astaldi-فيرغا هي مشابهة لطخة الدم.

يتم تحديد النشاط البيروكسيديز في خلايا السائل المنوي من قبل طريقة غراهام-الربوة.

الكواشف.

1. الكحول الفورمالين (نفسه, وأن الفوسفاتيز الحمضي).

2. Peroksidaznыy كاشف: ʙenzidin (على طرف مشرط) الذائبة في 6 مل 96 % الكحول الإيثيلي, إضافة 4 مل من الماء المقطر 0,02 مل 3 % ماء الأوكسجين. كاشف صالحة للاستعمال لمدة 5-6 أيام.

3. رومانوفسكي صبغ في التخفيف من 1-2 قطرات على 1 مل من الماء المقطر.

طريقة. السائل المنوي الطازج كانت ثابتة مسحات ل 30 الفورمالين مع الكحول, غسلها بالماء الجاري والمجففة. ثم صب السكتات الدماغية كاشف البيروكسيد لمدة 5-7 دقائق, غسلها جيدا في مياه جارية والمجففة. بعد ذلك أنها dokrashivayut 15 20 دقيقة صبغ رومانوفسكي, غسلها بالماء الجاري, المجففة وmikroskopiruyut باستخدام نظام المجهر الغمر.

عندما رد إيجابي على البيروكسيد في المحببة العدلة تكشف حبيبات ذهبية اللون البني كبيرة في أعداد كبيرة. مع عدد كبير من خلايا الدم البيضاء الضرورية لحساب متوسط ​​معامل cytochemical (SCK). سيتوبلازم الناسجة الغلوثانيون الفردية بوصفها مجموعات صغيرة مثل حبيبات.

تقرير من الجليكوجين في السائل المنوي

التغييرات في محتوى الجليكوجين في خلايا مختلفة تؤثر على وظيفتها أو دليل على تطور عملية المرضية. ويتم تحديد الجليكوجين في الخلايا خارج بواسطة مكمانوس.

الكواشف.

1. محلول مائي لحمض الدوري 1 % (تستعد لاستخدام).

2. المياه Sernistaya: 5 مل 10 % البوتاسيوم أو الصوديوم metabisulphite, 5 مل 1 N حمض الهيدروكلوريك, الماء ل 100 مل (تستعد لاستخدام).

3. كاشف الشفاء: 1 ز الفوكسين الأساسي للحمض fuksinosernistoy, سحق مسبقا في بمدافع الهاون الخزف, تذوب تحت الهز المستمر ل 5 دقيقة 200 مل من الماء المغلي المقطر, مرت من خلال مرشح ورقة وأضيف مع التبريد ل 50 ° C 20 مل 1 N حمض الهيدروكلوريك, وعندما تبرد ل 25 ° C - 1 ز البوتاسيوم أو الصوديوم metabisulphite. يتم الاحتفاظ كاشف مستعد في الثلاجة ل 24 ح بعدها المستنير وتصبح غير صالحة للاستهلاك vitsya

4.محلول مائي من اللون الأخضر الميثيل 2 %, غسلها مع الكلوروفورم

5.ميثيل الكحول النقي كيميائيا.

طريقة.

مسحات رقيقة المجفف السائل المنوي ثابتة ميثيل الكحول النقي كيميائيا ل 3 م, تشطف بالماء المقطر ومغمورة في كوب مع 1 % مائي حمض iodic 5 م. ثم كانت تغسل مسحات مع الماء المقطر, مجفف, كبريتية تشطف في الماء مرة أخرى والمجففة.

مسحات مزيد من مغموسة في كوب مع كاشف شيف ل 15 م, شطف لهم في ثلاثة أجزاء من الماء الكبريتي (بواسطة 3 دقيقة لكل منهما), مغسول 10 دقيقة في الماء ونوى الخلايا dokrashivayut 3 دقيقة الميثيل الأخضر. ثم تشطف مرة أخرى مع مسحات المياه, تصفية الورق والمجففة mikroskopiruyut باستخدام المجهر نظام الغمر.

في الحيوانات المنوية الناضجة الجليكوجين في عداد المفقودين. في السيتوبلازم من الحيوانات المنوية الشباب, خاصة مع "طوق", آثار كشفت الجليكوجين (±), في بعض الأحيان في شكل الكريات الفردية في الجزء العلوي من الرأس أو في "طوق".

في خلايا الحيوانات المنوية تم العثور على الجليكوجين بكميات كبيرة في شكل حبيبات الكرز الأحمر, يملأ السيتوبلازم كامل. مع نضوج الخلايا تفقد الجليكوجين حتى اختفائه في الحيوانات المنوية الناضجة. Spermatocitы الجليكوجين تتضمن ليس فقط في السيتوبلازم, ولكن أيضا في النواة. في الخلايا الداعمة للالأنابيب المنوية الملتوية، الجليكوجين هو حبيبات الكرز الأحمر ومنتشر. المحببة العدلة الناضجة في السائل المنوي, وكذلك في المسحات الدموية المحيطية, تحتوي على كمية كبيرة من الجليكوجين. في التهاب البروستاتا المزمن في العدلات زيادة السائل المنوي بشكل كبير من كمية الجليكوجين ويزيد من نشاط البيروكسيديز. في الخلايا الليمفاوية المعزولة وجدت في بعض الأحيان في حبيبات الجليكوجين العادية.

الضامة تحتوي على آثار من مسحات السائل المنوي الجليكوجين خلفية ملطخة بلون الكرز الأحمر, مما يدل على وجود في بلازما السائل المنوي كميات كبيرة من الجليكوسامينوجليكان (mukopolisaxaridov).

تعريف الحمض النووي الريبي (RNA) في السائل المنوي

مستويات مرتفعة من الحمض النووي الريبي في الخلايا هذا يظهر فعالية عالية ضد نموها, sekretornoй, الاصطناعية وغيرها من الأنشطة. خفض كمية من الحمض النووي الريبي في الخلايا الشابة كثيرا ما يرتبط مع انخفاض القدرة من هذه الخلايا على التجدد. يتم تحديد محتوى الحمض النووي الريبي في الخلايا طريقة قن الدجاج.

الكواشف.

1. كاشف قن الدجاج: أعدت بشكل منفصل 2 % الحلول الخضراء الميثيل وبيرونين, وجرفت بعناية الميثيل الحل الأخضر مع الكلوروفورم; يتم تحضير محلول صبغة العمل عن طريق خلط 2 % حل بيرونين (12,5 مل) و 2 % الميثيل الحل الأخضر (7,5 مل) مع اضافة 30 مل من الماء المقطر. ومقاومة للصبغة, تخزينها في الثلاجة.

2. قفل - كيميائيا نقية ميثيل الكحول.

طريقة. يتم إصلاح مسحات مع الميثانول ل 3 م, صبغ حل العاملة بيرونين ميثيل الأخضر 15 م, تشطف بسرعة بالماء وتجفيفها مع ورق الترشيح. Mikroskopiruyut باستخدام نظام المجهر الغمر. RNA بيرونين رسمت في مشرق اللون الأحمر, نواة الخلية - الاخضر الميثيل.

الحيوانات المنوية الناضجة لا تحتوي RNA. الخلايا غنية RNA الحيوانات المنوية, مما يقلل من عدد الخلايا عند استحقاقها. في spermatohonyy السيتوبلازم الغنية لونه وردي, في spermatotsytov ما يتلاشى, و في spermatids وردي فاتح. في الحيوانات المنوية الشباب "طوق" الوردي رسمت في الغالب "طوق".

نطفة, تقع في المرحلة الأخيرة من تطورها, في الخلايا الداعمة للالأنابيب المنوية الملتوية تفقد بقايا من مادة الوردي (RNA) وتصبح الحيوانات المنوية الناضجة.

في خلايا الحيوانات المنوية تحتوي على كمية كبيرة من الجليكوجين, وأعرب عن RNA بشكل ملحوظ النشاط LDH وCF. لكن, عادة, هذه الخلايا المعزولة في السائل المنوي, لذا نعول CBFV غير عملي. في مثل هذه الحالات، وتنحصر في شكل سرد الختام.

توصيف Cytochemical من الكريات البيض وهو مؤشر مهم من النشاط الوظيفي لهم. إحصاء عدد كريات الدم البيضاء في السائل المنوي مادة يتم في نفس, كما هو الحال في الخلايا الأخرى في السائل المنوي والدم المحيطي.

في مسحات الملون بالطرق المعتادة من السائل المنوي (مخاليط azurozinovymi, الهيماتوكسيلين يوزين وغيرها.), وكذلك الاستعدادات الأم ليست دائما سهلة للتمييز الكريات البيض, خلايا الحيوانات المنوية, ظهارة البروستاتا, الناسجة، وعناصر أخرى.

تقنيات Cytochemical بالتزامن مع الصرفية في كثير من الأحيان يساعد على إقامة نوع من الخلايا. هكذا, أعرب النشاط البيروكسيديز, قدمت حبات ذهبية اللون البني كبيرة, يملأ السيتوبلازم كامل من الخلايا, سمة من العدلات الناضجة, في الخلايا الأخرى لوحظ هذا رد فعل. رد فعل حاد لالجليكوجين هو نموذجي من العدلات وخلايا الحيوانات المنوية, ولكن هذه لم يكن لديك النشاط البيروكسيديز. RNA الواردة في الخلايا وتكوين الحيوانات المنوية لا المحببة ناضجة. وقد ضوحا خلايا الحيوانات المنوية رد فعل على الفوسفاتيز الحمضي, والمحببة العدلة، أعربت عن سيئة للغاية، وهلم جرا. د.