Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemie, datorită activității deficit piruvatchinază de celule roșii din sânge

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemie, Sugestii deficit eritrocitare piruvat kinazei - o formă relativ rare de anemie hemolitica, care este moștenit în mod recesiv autosomal, Acesta oferă manifestari clinice în homozigoți, venituri cu semne de hemoliza intracelulara, macrocitoza de eritrocite, conținut scăzut de potasiu. Există mai mult 200 cazuri de purtători homozigote de activitate deficit piruvatkinaznoy.

Patogenie

Piruvat kinaza este una dintre enzimele, încheierea glicoliză. Acest link glicolizei și ATP format nikotinamiddinukleotid. Majoritatea pacienților cu deficit de activitate piruvat kinazei este redusă în conținutul celulelor roșii ale acestor doi metaboliți, In unele cazuri, conținutul de ATP este normal, dar deranjat stabilității ATP timpul incubației. Niveluri normale de ATP găsite la reticulocitoză semnificativă. Acest lucru se datorează prezenței de reticulocite și posibilitatea de mitocondriale ATP nu doar prin glicoliză, dar, de asemenea, ca urmare a fosforilării oxidative.

Consecința deficit piruvat kinază De asemenea, este acumularea produselor de glicolizei, format la etapele anterioare - fosfofenolpiruvata, 3-fosfoglicerat, și mai ales 2,3 difosfogliceratului. Conținut piruvatanlaktata scade in celulele rosii din sange.

Lipsa de ATP în eritrocite piruvat kinază deficit Aceasta duce la o perturbare a funcției pompei ATP-aznogo globule roșii și la pierderea de ioni de potasiu, în care concentrația de sodiu ionilor în eritrocitele non creștere-. Acest lucru determină o scădere a conținutului de ioni monovalenți în eritrocitele, deshidratarea celulei și contracția acestuia. Acest fenomen este denumit dessikotsitoz. Scăderea celulele rosii din sange de apă complică procesul de oxigenare și oxigen de presă de hemoglobina. În acest sens, anumit rol compensatoriu jucat de o acumulare semnificativă în eritrocite de 2,3 acid difosfoglitserinovoy.

Afinitatea hemoglobinei pentru oxigen este redus prin interacțiunea cu 2,3 ​​difosfogliceratului. Prin urmare, la concentrații mai mari de 2,3 difosfogliceratului revine oxigen în țesuturi este facilitată.

Manifestările clinice ale activității deficit piruvat kinază

Manifestările clinice ale activității deficit piruvat kinază depind de gradul de hemoliză. În unele cazuri, creșterea hemolizei se manifestă la naștere și este însoțită de apariția crizei hemolitice severe, cauzând nevoia de transfuzii de sange pentru a menține hemoglobina la nivelul sub-normala. In alte cazuri, boala poate să apară aproape asimptomatice cu primele semne de creștere a hemoliza (sclera subikterichnost și piele) în vârstă de 17-30.

În general; comparativ cu microspherocytosis, deficit piruvat kinază are o mai severă.

Aproape toti pacientii cu splina palpabila. Ușoară creștere a acesteia prezentate unele anomalii purtători heterozigote, deși au anemie, obișnuit, dispărut. Un număr de pacienți posibil splenomegalie. O creștere semnificativă a ficatului rar găsite. La pacienții cu ulcere de gamba izolate identificate.

Indicatori de laborator de activitate a deficitului de piruvat kinază

Majoritatea pacientilor cu deficit de activitate piruvat kinazei observat anemie moderată (4,34- 6,21 mmol / l, sau 70-100 g / l), Cu toate acestea, în timpul crizelor hemoglobina poate fi redusă la 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Conținut eritrotsitov- 2,5-3,0 T 1 L. Criza hemolitic poate fi cauzată de o infecție. Există cazuri de câștig hemoliza in timpul menstruatiei.

Celule rosii din sange de la pacientii cu deficit de piruvat kinază caracterizat prin macrocitoza cu normohromiey, ușoară anizocitoză și poikilocytosis. Nu a fost o polychromatophilia convenabil. Uneori găsit celule rosii din sange si mishenevidnye celulele rosii din sange fustei sau sub formă de dud, adesea identificat punktatsiya eritrocite bazofile, Corpusculii Jolly. Unii pacienți din sângele periferic a relevat un număr semnificativ de erythrokaryocytes, în timpul crizei, ea poate fi crescută până la 60-70 %. ESR, numărului de celule albe din sânge, leukogram, numărul de trombocite în limite normale. Ca și în cazul altor forme de anemie hemolitica, in maduva osoasa a relevat o iritare bruscă de germeni roșu hematopoieza.

Nivelul de bilirubina, obișnuit, crescut datorită indirect.

Liber hemoglobina plasmă normal, dar poate fi un nivel de haptoglobina redusă. Hemosiderina in urina este absent. Conținutul hemoglobinei fetale și hemoglobina A₂ în limite normale.

Rezistență osmotică de deficit eritrocite piruvat kinază, în majoritatea cazurilor normale, uneori redus de zi incubație. Autogemoliz, obișnuit, actualizat la grade diferite. Există cazuri de deficit de piruvat kinaza cu autogemolizom normală. În prima raportate cazuri de deficit de piruvat kinază a fost înregistrată de tip II autogemoliza, corectează adăugarea de ATP, și nu corectarea sau corectarea ușor adăugarea de glucoză. Ulterior, multe cazuri au fost descrise cu tipul deficit enzimatic I autogemoliza sau nu. Prin urmare, nu se recomandă aplicarea metodei autogemoliza pentru diagnosticul diferențial al anemii hemolitice. Durata de viata a celulelor rosii din sange, cu deficit de activitate piruvat kinazei este întotdeauna scurtat.

Tipul moștenire activitate piruvat kinazei autozomal recesiva. Heterozygotes practic sănătoase, Conform diferiți cercetători, severitatea deficitului au variat de la 50 la 70 % norme.

Activitatea de diagnostic de deficit piruvat kinază

Diagnosticul de deficit piruvat kinaza de celule roșii din sânge poate fi de așteptat să livreze în cazul anemiei hemolitice, curge de-a lungul anilor cu creșterea în splină, lipsa de sânge periferic frotiuri semne microspherocytosis, elliptotsitoza și stomatotsitoza.

Testele calitative pentru determinarea activității kinazei piruvat. În acest scop, metoda este utilizată pe scară largă pată fluorescentă, bazat pe, că în cursul reacției, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oxidat și fluorescența dispare.

Activitatea piruvat kinazei la persoanele sanatoase au variat de la 4,0 la 7,7 mmol (min / 1010 eritrocite) sau 4,0 la 7,7 Putere. Majoritatea activității enzimei bolii homozigotă puțin 1 Putere. Cu toate acestea, pot exista cazuri ușoară scădere în activitatea enzimei. Diagnosticul de o forma rara de anemie hemolitica este foarte dificil, și un diagnostic se poate face numai în studiul cineticii enzimatice.

Diagnosticul diferențial al anemie hemolitica, asociate cu deficitul de piruvat kinaza

Diagnosticul diferențial al anemie hemolitica, asociate cu deficitul de piruvat kinaza, necesare pentru a efectua alte forme de anemie hemolitica ereditare.

Deoarece cei mai multi pacienti cu deficit de activitate piruvat kinaza, spre deosebire de persoanele fizice, suferință microspherocytosis, elliptotsitozom, stomatocitozom, anemie hemolitica, transport condiționat hemoglobinei instabilă, și boala talasemie este moștenit într-o autosomal recesiv, că această patologie se găsește doar în aceeași generație și aproape niciodată văzut în rândul părinților.

Când anemie ereditară, transport condiționat hemoglobinei instabilă, în special în boala severa, uneori proband este primul transportator mutației, iar apoi boala este transmisă generației următoare. De aceea, diagnosticul diferential trebuie să fie efectuată cu hemoglobinopathies, transport condiționat hemoglobinei instabilă, precum și anemie hemolitica moștenit recesiv, cauzate de activitatea defectuoasă a altor enzime.

Acesta joacă un rol de sprijin stabilitate hemoglobinei, electroforeză yego. Pentru a exclude alte fermentopathia investigat activitatea altor enzime de eritrocite, și de a exclude anemia hemolitică autoimună efectuate Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Metoda Fluorescent pentru determinarea activității de piruvatkiiazy Beutler

Reactivi.

1. Acidul Fosfoenolpirovinogradnaya (tritsiklogeksilammoniynaya sare) 0,15 Soluție M de, neutralizat la pH 7,0-8,0 0,2 Soluție M de NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 Soluție M de, neutralizate (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 Soluție M de, neutralizate (0,1 ml).
4. Sulfat de magneziu 0,08 Soluție M de (0,1 ml).
5. Soluție tampon fosfat de potasiu 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Distillirovannaya apă (0,62 ml). Amestecul poate fi depozitat la - 20 ° C nu mai mult de o săptămână.

Metodă.

Pentru cercetare uz sânge, luat cu heparină sau citrat de sodiu. Se centrifughează, plasma aspirat și pregăti 20 % suspensie de celule roșii din sânge prin adăugarea a patru volume de soluție de clorură de sodiu izotonică.

Suspensie de eritrocite într-o cantitate 0,02 ml este amestecată cu 0,2 ml de reactiv și se incubează timp de 30 minute la 37 ° C. O picătură a fost pus pe hârtie de filtru, iar navigarea pe Fluoroscopul. Fluorescenta Baseline fost detectat imediat după adăugarea de eritrocite la amestec înainte de incubare. În mod normal, după 30 de minute de incubare dispare, și activitatea de resturi deficit piruvat kinază. Aceasta este, NADH care fluorescență sub influența radiațiilor UV în zona, aproape de vizibil, întrucât NAD nu fluorescenta. Deoarece soluția de mai sus este instabilă și ușor degradat, necesită o monitorizare. Ar trebui să se separe cu atenție stratul de celule albe din sange, deoarece activitatea de activitate piruvat enzimei eritrocite deficit kinază în leucocite poate fi normal.