Методы цитологического исследования

Под влиянием различных процессов, протекающих в злокачественных опухолях (кровоизлияние, изъязвление, некробиоз, некроз и др.), а также благодаря реактивности окружающих тканей происходят десквамация отдельных клеток, пластов и отторжение мельчайших тканевых частиц опухоли, которые могут попадать в выделения человека. Изучением этих отторгшихся клеточных элементов новообразования занимается эксфолиативная цитология.

Необходимо тщательно отбирать подозрительные частицы материала (мокроты, желудочного сока, кала и др.) и исследовать их. Для этой цели используются метод послойного исследования жидкого и густого материала, а также микроскопическое исследование.

Для обнаружения мелких тканевых частиц исследуемый материал (гной, мокроту, аспирационную жидкость и др.) помещают тонким слоем в чашку Петри. Поставив чашку на черную или белую бумагу, узким тонким металлическим шпателем и препаровальной иглой отбирают среди крови, слизи и гноя частицы, отличающиеся своей консистенцией, формой и окраской, и помещают их на предметное стекло. Плотные частицы расщепляют и растягивают шпателем и иглой, чтобы получить тонкие препараты.

Сейчас для диагностических целей широко применяется пункция опухолей (пункционная цитология). При этом исследуются клетки и мельчайшие частицы опухоли, часто невидимые макроскопически.

Метод пункции иглой очень прост и доступен, приводит к незначительной травматизации больного и не дает осложнений, которые иногда наблюдаются при биопсии. При необходимости пункцию можно повторить. Проводится она опытным клиницистом по всем правилам асептики. Пунктируются наиболее мягкие или флюктуирующие части опухоли. Можно пунктировать и плотную опухоль.

После проведения пункции шприц с иглой немедленно передается в лабораторию, где содержимое иглы и шприца, на поршне которого могут остаться мелкие, важные для исследования частички, тщательно собирается и готовятся препараты для микроскопического исследования. При большом количестве материала его собирают в чашку Петри, при небольшом — на предметное стекло и тщательно изучают его вид.

Макроскопически внешний вид пунктата опухолей может значительно варьировать, что не позволяет выявить его характерные признаки.

Пунктат рака в большинстве случаев кровянистый, скудный, часто содержит мелкие тканевые частицы. Если опухоль не подвергается дистрофическим и некротическим изменениям, консистенция частиц плотная и их с трудом удается растянуть на стекле.

В пунктате из саркомы частицы опухоли очень мелкие, полупрозрачные (напоминают рыбье мясо), легко растягиваются на стекле (раздавливаются).

Пунктат доброкачественной опухоли однообразный, большей частью скудный и состоит из нескольких или одной капли кровянистой жидкости с мелкими или мельчайшими серовато-беловатыми плотными тканевыми частицами.

Пунктат различных кистозных образований жидкий, иногда может быть обильным — до 20—30 мл и более. При большом содержании холестерина пунктат имеет характерный перламутровый блеск. Количество лейкоцитов и эритроцитов может сильно варьировать, что обусловливает цвет и степень мутности пунктата. В содержимом эпидермоидной кисты макроскопически обнаруживаются беловатые крошковатые массы, иногда в очень большом количестве.

Гнойный пунктат желтовато-серого цвета, пунктат с примесью крови — буроватый или темно-красный, густой, реже вязкой консистенции или жидкий. Гнойный пунктат необходимо тщательно обследовать макроскопически для обнаружения мелких тканевых частиц, пленчатых образований (обрывки хитиновой оболочки эхинококковых пузырей) , серовато-желтоватых зерен (друзы актиномицетов) и др.

Микроскопическое исследование цитологических препаратов проводится в два этапа. Вначале изучаются препараты в нативном состоянии, а затем окрашенные. В нативных препаратах раковой опухоли обнаруживается большее или меньшее количество клеток различной степени атипии, разных размеров, но чаще всего крупных, с большими, иногда с несколькими ядрами, часто с эксцентрически расположенными многочисленными ядрышками. В этих клетках нередко выражены жировая дистрофия цитоплазмы, вакуолизация или ороговение. Клетки могут лежать свободно или, что более характерно для рака, располагаются группами, в виде тяжей или «жемчужин», дорожек, гроздьевидных образований.

Размеры, форма и вид клеток, а также их расположение зависят от гистологической структуры и характера опухоли. В мелких частицах рака обычно присутствует соединительнотканная строма, иногда с эластическими волокнами, капиллярами и некоторым количеством описанных атипичных клеток в различных сочетаниях (железисто-подобные образования, удлиненные комплексы, сосочки, дорожки, «жемчужины» и др.). Встречаются также исходящие из новообразования некротизированные мелкие, покрытые бактериями тканевые частицы, содержащие кристаллы гематондина и незначительное количество клеточных элементов. Частицы такого рода чаше всего встречаются при раке гортани, пищевода и желудка.

Клетки саркомы более однородны, чем клетки рака, располагаются чаще всего в виде диффузных скоплений, идущих в различных направлениях. Клеточный состав пунктата, размеры и форма клеток зависят от гистологической структуры саркомы. Общими для всех видов саркомы являются обилие клеток, их полиморфизм различной степени выраженности или однотипность (при резко выраженной малигнизации), диффузное расположение, множество митозов. На основании обнаружения указанных элементов в большинстве случаев удается определить характер новообразования и его гистологическую структуру. Однако отличить в цитологическом препарате элементы высокодифференцированной лимфосаркомы от лимфоидных клеток в пунктате лимфатического узла нелегко. В ряде случаев при исследовании пунктата или другого материала нельзя с точностью указать, саркома это или рак. При этом выдается цитологическое заключение о наличии злокачественного новообразования, что, учитывая быстроту выдачи заключения, также важно для диагностики.

При микроскопическом исследовании содержимого кисты кроме жидкости в ней можно обнаружить лейкоциты и эритроциты в различном количестве, ксантомные клетки, клетки, выстилающие полость кисты, и почти всегда кристаллы холестерина или капли нейтрального жира. Количество жирно-перерожденных клеток и клеток выстилки варьирует в широких пределах. Иногда в пунктате кисты при ее нагноении или деструкции стенки можно обнаружить макрофаги гистиоциты, фибробласты, плазматические клетки и др.

В содержимом дермоидной кисты микроскопически можно обнаружить в нативных препаратах пласты плоского эпителия с нейтральным жиром и кристаллами холестерина. Комплексное изучение нативных и окрашенных препаратов позволяет более полно оценить сущность патологического процесса.

При изучении нативных препаратов в гнойных массах часто можно обнаружить элементы распада жировой ткани — нейтральный жир, иглы жирных кислот и кристаллы холестерина; в плотных тканевых частицах — скопления эластических и коллагеновых волокон, лежащих среди лейкоцитов или детрита. В пунктате или другом исследуемом материале могут быть выявлены остатки гнойно-инфильтрированной грануляционной ткани со сплетениями капилляров, ксантомные клетки и друзы актиномицетов, массы казеозного распада и элементы туберкулемы и др.

Макро- и микроскопическое изучение нативных и окрашенных препаратов заканчивается описанием цитологической картины с заключением, которое может быть положительным, предположительным, отрицательным (если задача клинициста — выявить клетки злокачественного новообразования) либо свидетельствующим, что по данным цитологической картины судить о характере патологического процесса не представляется возможным.