Методы обнаружения лейшманий в соскобе пораженных тканей методом выделения чистой культуры

При посеве соскоба пораженных тканей больного на определенную питательную среду лейшмании размножаются и их можно обнаружить при микроскопии.

Реактив

Среда W.W.W. для выращивания лейшманий (14 г агара, 6 г хлорида натрия, примерно 150 мл дефибринированной крови кролика, взятой из сердца непосредственно перед приготовлением среды, 900 мл воды дистиллированной). В дистиллированную воду добавляют хлорид натрия и агар. Колбу со средой нагревают до полного расплавления агара и 20—30 мин стерилизуют в паровом стерилизаторе при 147,1 кПа (15 ат).

В охлажденный до 56 °С агар добавляют стерильно дефибринированную кровь кролика, размешивают вращением колбы и стерильной пипеткой разливают по 4 мл в пробирки. Колба с кровяным агаром во время разлива находится на водяной бане при температуре 58 °С. Пробирки со средой наклоняют.

После застывания агара их помещают на сутки в термостат при 37 °С для контроля стерильности и получения конденсационной жидкости. Если ее образуется недостаточно, то перед посевом в пробирки можно добавить стерильно около 1 мл одного из следующих растворов: 0,85 % раствора хлорида натрия, 1 % раствора пептона, раствора Хенкса, гидролизата лактальбумина или других питательных сред в изотонической концентрации.

Методика обнаружения лейшманий в соскобе пораженных тканей методом выделения чистой культуры

При выделении культуры тщательно соблюдают правила стерильности. Исследуемый участок кожи протирают ватным тампоном, смоченным 70 % спиртом.

После испарения спирта острым концом стерильного глазного скальпеля делают надрез бугорка длиной 2—3 мм. Со дна надреза стерильной пастеровской пипеткой делают соскоб ткани. Полученную каплю серозно-кровянистой жидкости переносят в пробирку со средой. Манипуляцию проводят несколько раз, засевая материал каждый раз в новую пробирку. Ватные пробки заливают парафином или надевают на них резиновые колпачки и помещают в термостат при 22—24 °С.

Оценка результатов

Посевы просматривают под микроскопом ежедневно до выявления возбудителя. Исследуют нативные препараты, приготовленные по методу раздавленной капли, с объективом 40×40. Результаты посева считают отрицательными, если через 40 дней возбудитель не обнаружен. Культуральные лейшмании имеют удлиненную форму (10—12 мкм со жгутом).

Применение культурального метода наиболее целесообразно при туберкулоидной форме лейшманиоза, диагностика которой другими методами может оказаться менее результативной.