Методы обнаружения лейшманий в мазке из инфильтрата кожи

Для выявления лейшмании исследуют фиксированный и окрашенный мазок содержимого инфильтрата.

Реактивы

  • Метиловый спирт, или абсолютный этиловый спирт, или смесь Никифорова (смесь равных количеств серного эфира и абсолютного этилового спирта).
  • Фосфатный буфер pH 6,9—7,1, для приготовления которого смешивают 40 мл раствора КН2РО4 (9,078 г сухого вещества КН2РО4 в 1 л раствора) и 60 мл раствора Na2PHO4 (11,876 г сухого вещества в 1 л раствора).
  • Азурэозин по Романовскому.

Методика обнаружения лейшманий в мазке из инфильтрата кожи

Материал для исследования берут из бугорка (на ранней стадии развития процесса) или из краевого инфильтрата язвы (на более поздней стадии), несколько отступив от ее края.

Протерев ватой со спиртом бугорок или выбранный участок инфильтрата, сдавливают его двумя пальцами для обескровливания и, не ослабляя давления пальцев, концом острого скальпеля (желательно глазного) делают поверхностный надрез кожи. При появлении крови ее следует удалить марлевым тампоном. Со дна и краев надреза делают этим же скальпелем соскоб пораженной ткани и быстро размазывают содержимое соскоба тонким слоем на предметном стекле.

Готовят несколько мазков. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают по Романовскому.

Оценка результатов обнаружения лейшманий в мазке из инфильтрата кожи

В препарате должны быть хорошо различимы макрофаги, эндотелиоциты, плазматические и лимфоидные клетки, фибробласты и небольшая примесь клеток периферической крови.

Наличие в препарате эпителиоцитов, а также бесструктурных глыбок, окрашенных в равномерно-сиреневый цвет, означает, что соскоб был взят слишком поверхностно и его следует повторить. В мазке не должно быть слишком много крови, а также гноя и бактерий.

Лейшмании L. tropica обнаруживаются в макрофагах, а также вне клеток в виде округлых, овальных или удлиненных телец размером 3— 5 мкм. При окраске по Романовскому цитоплазма лейшманий приобретает светло-голубой или сиреневый цвет, ядро становится красно-фиолетовым.

Хорошо виден кинетопласт, окрашенный интенсивнее, чем ядро.

На начальных стадиях изъязвления лейшмании легко выявляются в бугорках и в краевом инфильтрате язвы. В гнойном отделяемом язвы могут быть найдены лишь деформированные и разрушающиеся лейшмании, которые трудно дифференцировать. На стадии заживления в пораженных тканях лейшмании выявляются редко.